意大利牛舌草提取物对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用

朱晓东， 张佳佳， 郭玉婷， 兰 卫

(1新疆医科大学中医学院， 乌鲁木齐 830011； 2乌鲁木齐市中医医院药学部， 乌鲁木齐 830000； 33新疆医科大学克拉玛依学院， 新疆 克拉玛依 834099)

牛舌草为紫草科植物意大利牛舌草(AnchusaitalicaRetiz.)或琉璃苣(BorageofficinalesL.)的地上部分[1],主要含有挥发油、脂肪酸、三萜类和黄酮类等成分[2],其中，黄酮类化合物包括芸香苷、异槲皮苷和黄芪苷等，在其新鲜植物体中还分离出抗坏血酸和脱氢抗坏血酸[3]。具有生湿生热、祛寒补心、润燥消炎等功效，临床上多用于心脑血管疾病的治疗[4]。近年来，心脑血管疾病是影响人类健康的慢性疾病之一，也逐渐趋于年轻化，除了损害健康以外还会带来诸多的并发症，临床多采用化学药物治疗，但副作用较大[5]。徐晓娜等研究发现牛舌草总黄酮具有抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用并对机制进行了研究[6]。研究表明，意大利牛舌草不同提取物具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗病毒和中枢神经系统和内分泌系统的调节作用[7-10]。本研究采用立体恒温灌流系统和压力换能器研究意大利牛舌草提取物对大鼠主动脉血管的舒张作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1实验动物雄性SD大鼠，体质量(200±20)g，由新疆医科大学动物实验中心提供，动物使用许可证号为SCXK(新)2011-0004。

1.2仪器JY96-IIN型超声提取仪(上海沪析仪器厂)，RE-3000B型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，CTHI-100B型电热恒温鼓风干燥箱(施都凯仪器设备上海有限公司)，BL-420型生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)。

1.3试剂乙酰胆碱(美国sigma公司，批号20161222，Ach)，去甲肾上腺素(美国sigma公司，批号20161222，PE)， Kreb-Henseleit(K-H)液(NaCl 118mmol/L，KCl 4.7 mmol/L，NaHCO325 mmol/L，KH2PO41.2 mmol/L，MgCl21.2 mmol/L,CaCl22.5 mmol/L，glucose 2 g/L， pH 7.4并用双蒸水定容至1 L)，试剂均为分析纯。

1.4药材意大利牛舌草2017年3月购于新疆维吾尔药业有限公司(批号：20161012)，经新疆医科大学中医学院资源教研室盛萍教授鉴定为紫草科植物意大利牛舌草(AnchusaitalicaRetiz)的干燥地上部分。

1.5牛舌草提取物的制备方法称取意大利牛舌草粗粉 0.5 kg置容器中，加入70%乙醇超声提取3次，每次40 min，过滤，合并滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩，将浓缩液倒入肾形盘中放于电热恒温鼓风干燥箱中烘干成浸膏，使用时配制成所需浓度。

1.6溶液的制备方法

1.6.1 对照品溶液的制备 将Ach溶于双蒸水，配制成浓度分别为0.01、0.10、1.00、10.00 μmol/L的溶液。将PE均溶于双蒸水，配制成浓度为l.0 μmol/L的溶液。

1.6.2 牛舌草提取物溶液的制备 将“1.5”项下牛舌草提取物用1%的DMSO溶液溶解，配制成浓度分别为 1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0 mg/mL的溶液。

1.7大鼠胸主动脉血管环的制备方法将大鼠脱颈处死后，迅速打开胸腔，剪下肾主动脉以上的胸主动脉，取出后放入已通过氧气并置于冰育的K-H液中，轻轻甩动将血管中的血液冲出，去除血管上附着的脂肪和结缔组织，将血管环剪成3 mm长的血管环，备用。

1.8血管环的分组及给药方法随机取部分血管环，用牙签插入血管环内部来回滚动，去除血管内皮细胞，此为内皮去除组；未去除内皮的血管环称为内皮完整组。将血管环用2个三角形不锈钢金属丝挂起，置于37℃恒温浴槽中，持续通入95%的氧气和5%的二氧化碳混合气体。主动脉环的一段连接张力换能器，另一端固定在浴槽中。调整动脉环静息负荷2 g，用BL-420生物机能实验系统对血管张力进行测定。实验前用60mmol/L的KCl溶液收缩并冲洗2次，收缩活性良好的血管环用于实验。

1.9指标的测定方法

1.9.1 血管内皮功能的检测 血管环在浴槽中达到平衡后，加入终浓度为1.0 μmol/L PE孵育血管环进行预收缩，待收缩达到稳定，用4个浓度(0.01、0.10、1.00、10.00 μmol/L)的Ach累积加入浴槽舒张血管环，待Ach引起的血管环舒张达到平衡台期后，加入1 μmol/L的forskolin 舒张血管环，待forskolin引起的血管环舒张为最大舒张状态(100%)，舒张率为50%及以上的血管环为内皮完整组，不舒张甚至继续收缩的血管环为内皮去除组。

1.9.2 舒张率的测定 内皮完整组和内皮去除组更换K-H液平衡45 min(每15 min换液1次)后，加入PE(1 μmol/L)对血管环进行预收缩，待收缩稳定后，逐步累积加入牛舌草提取物，前一个剂量达到平衡后再给下一个剂量，最后加入1 μmol/L的forskolin至最大舒张。舒张率=(血管环预收缩最大张力-不同药物浓度血管环的张力)/(血管环预收缩最大张力-基础平衡张力)×100%。

2 结果

2.1大鼠胸主动脉血管环内皮活性检测内皮完整组的最大舒张率Emax为(77.97%±18.92%)，内皮去除组为(12.40%±6.37%)，2组大鼠胸主动脉血管环的内皮活性符合实验要求，均可用于后续实验，见表1。

2.2意大利牛舌草提取物对大鼠胸主动脉环的舒张作用内皮完整组的血管舒张率为(15.13%±3.67%～93.82%±5.35%)，意大利牛舌草醇提物浓度范围在(1.0～11.0)mg/L内具有浓度-剂量效应，内皮去除组与内皮完整组的血管舒张变化情况一致。内皮完整组和内皮去除组的Emax分别为(93.82%±5.35%)和(91.54%±5.00%)，内皮完整组和内皮去除组的血管舒张作用比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 Ach对PE预收缩的主动脉环的舒张作用/%

表2 牛舌草醇提物对PE预收缩的主动脉环的舒张作用/%

3 讨论

本实验通过大鼠离体主动脉环来检测意大利牛舌草提取物的舒张血管作用。血管平滑肌的收缩状态决定血管腔的大小，血管平滑肌的紧张程度异常增大可以参与血管性疾病的发生机制，因此，意大利牛舌草提取物具有舒张血管作用的化合物或中药提取物对心脑血管等一系列疾病具有积极的作用。研究表明，血管内皮细胞对血管平滑肌的舒张起着非常重要的作用，当血管内皮细胞释放一些一氧化氮(NO)、前列腺素、超极化因子(EDHF)等从而使血管达到舒张的作用[11]。而PE诱导的血管收缩主要作用在α-肾上腺受体，从而激活磷脂酶C，产生三磷酸肌醇，刺激平滑肌细胞内贮钙的释放，同时也可激活细胞膜上的操纵性钙通道(ROC)和磷酸化电压依赖性钙通道使细胞外钙内流而达到血管收缩的作用[12-13]。 本实验结果表明，意大利牛舌草对血管具的舒张作用，但对于内皮完整组和内皮去除组并无性差异，表明牛舌草提取物诱导的舒张作用无内皮依赖性，可能是抑制了细胞内钙的释放和细胞外钙的内流，引起血管环舒张，从而产生血管舒张的作用，具体机制有待进一步研究。