宫颈癌患者外周血调节性B细胞数量及血清IL-10、TGF-β表达水平

孙 会 王丙娟 孙慧霞

(南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473061)

宫颈癌发病率呈不断上升趋势，且在我国女性恶性肿瘤中位居第2位〔1,2〕。目前，对于宫颈癌具体发病机制尚不十分明确。调节性B细胞参与机体的免疫耐受调节，且主要与肿瘤免疫逃逸关系紧密〔3,4〕。近年来研究表明，肿瘤的发生、发展与外周血调节性B细胞、白细胞介素(IL)-10及转化生长因子(TGF)-β相关〔5,6〕。本研究旨在探讨宫颈癌患者外周血调节性B细胞的数量及血清IL-10、TGF-β的表达水平。

1 资料与方法

1.1一般资料 选自南阳医学高等专科学校附属医院2015年1月至2016年12月收治的宫颈癌患者83例，年龄24～75岁，平均(57.42±6.57)岁；鳞癌47例、腺癌36例；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期32例，Ⅲ、Ⅳ期51例。入组标准：(1)均为初治，且通过病理学或细胞学证实为宫颈癌；(2)经医院伦理委员会审核，签订知情同意书。排除标准：(1)合并肺癌、乳腺癌、肝癌等其他恶性肿瘤者；(2)伴自身免疫性疾病；(3)精神疾病者；(4)合并肺、肾、肝等功能严重异常者。同期选择我院健康志愿者59例对照组，均为女性，年龄24～75岁，平均(56.89±6.79)岁。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2主要试剂和仪器 IL-10试剂盒(上海依科赛生物制品有限公司)，TGF-β试剂盒(广州蕊特生物科技有限公司)，CD5-FITC、CD1d-PE、CD19-Percp-Cy5.5单克隆抗体(美国BD公司)。美国BD公司FACSCalibur流式细胞仪。

1.3外周血B细胞亚群比例检测 所有研究对象分别采集外周血2 ml。抗凝外周血淋巴细胞表面分子采用流式细胞多色荧光法标记，具体为CD5-FITC、CD1d-PE、CD19-Percp-Cy5.5标记外周血淋巴细胞，以BD FACS Diva软件，CD19+设门识别B细胞，分析外周血B细胞各亚群比例，结果以其占CD19+B淋巴细胞百分比表示。

1.4血清IL-10、TGF-β检测 所有研究对象分别采集外周血2 ml，以3 000 r/min，离心半径15 cm离心10 min，分离血清，置于-20℃保存待测，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。

1.5观察指标 观察两组CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例；血清IL-10、TGF-β表达；宫颈癌不同分期CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例及血清IL-10、TGF-β表达。

1.6统计学方法 应用SPSS16.0统计学软件进行t检验。

2 结 果

2.1两组CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例及血清IL-10、TGF-β水平比较 宫颈癌组CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例明显高于对照组；血清IL-10、TGF-β表达显著高于对照组(均P<0.05)，见表1。

2.2宫颈癌不同分期外周血B细胞亚群比例及血清IL-10、TGF-β水平比较 宫颈癌Ⅰ、Ⅱ期组CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例显著低于Ⅲ、Ⅳ期组(P<0.05)；血清IL-10、TGF-β表达显著高于Ⅲ、Ⅳ期组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表1 两组外周血B细胞亚群比例及血清IL-10、TGF-β水平比较

表2 宫颈癌不同分期外周血B细胞亚群比例及血清IL-10、TGF-β水平比较

3 讨 论

宫颈癌是一种免疫原性肿瘤，主要与高危人乳头状瘤病毒亚型密切相关。近年来，调节性B细胞在肿瘤免疫耐受中越来越受重视〔7，8〕。调节性B细胞主要通过分泌IL-10、TGF-β等抑制性细胞因子，调控树突细胞、调节性T细胞、自然杀伤(NK)细胞、细胞毒性T细胞及效应性T细胞等免疫活性细胞的功能，从而维持机体免疫功能〔9，10〕。现代医学认为，在肿瘤、感染性疾病及自身免疫性等疾病中该免疫平衡通常有所失调〔11,12〕。近年来研究表明，除分泌抗体的致病性B细胞外，还存在分泌TGF-β和IL-10等细胞因子的调节性B细胞，分别称为产生TGF-β1的Br3细胞或IL-10的Br1细胞〔13〕。其中IL-10具有免疫抑制作用，TGF-β具有直接抑制CD8+CTLs激活，明显降低肿瘤免疫效果〔14，15〕。调节性B细胞通过分泌抑制性抗体或产生抑制性细胞因子影响其他免疫细胞功能，从而减轻炎症。现代医学认为调节性B细胞发挥肿瘤免疫逃逸可能调节机制主要涉及以下途径：①调节性B细胞上的CD40与肿瘤细胞上的CD40L相互作用，从而抑制CD8+T细胞的生物学活性，诱导调节性B细胞分泌IL-10，下调CD8+T细胞和NK细胞分泌干扰素(IFN)-γ；②调节性B细胞大量分泌的TGF-β能够诱导CD4+效应性T细胞转化成调节性T细胞，从而促进肿瘤细胞的转移和增殖。有研究报道，调节性B细胞免疫表型呈多样性，而其中CD19+CD5+CD1d+的调节性B细胞最能代表B10的免疫表型，由于其表达标记均位于细胞膜，故而样本处理简单、快速，适用于临床研究。本研究结果表明，宫颈癌患者CD19+CD5+CD1d+调节性B细胞增多，且随着疾病进展而增高。此外，宫颈癌患者血清IL-10、TGF-β表达上升，且随着疾病进展而增高。

综上，外周血调节性B细胞及血清IL-10和TGF-β可能与宫颈癌进展相关。