2号染色体父系单亲二倍体遗传亲子鉴定1例

何汝雯 ，张小川 ，何仕雯 ，温小莲 ，童大跃 ，莫秋华 ，3，张兹钧

（1.广东科登法医物证司法鉴定所，广东 珠海 519000；2.中山大学中山医学院法医系，广东 广州 510080；3.珠海国际旅行卫生保健中心，广东 珠海 519000）

1 案 例

1.1 简要案情

夫妻二人因女儿移民，要求进行亲子鉴定，以确定他们之间的亲生关系。

1.2 检验过程

采集三人的指血到无菌滤纸上。先用人类STRtyper-21G扩增荧光检测试剂盒（宁波海尔施基因科技有限公司）进行D3S1358等20个基因座检测，发现女儿与母亲之间在TPOX和D2S1338基因座上不符合孟德尔遗传规律，按照司法部颁布的《亲权鉴定技术规范》（SF/Z JD0105001-2016）的方法计算这些基因座的父权指数（paternity index，PI），累积父权指数为1.5615×102，需增加检测基因座来达到判断要求。

随后采用人类STRtyper-10G扩增荧光检测试剂盒（珠海科登生物工程有限公司）和STRtyper-23comp常染色体补充位点试剂盒（宁波海尔施基因科技有限公司），增加了20个基因座进行检测，又发现女儿与母亲之间在D2S1772和D2S441基因座上不符合孟德尔遗传规律。综上所述，40个基因座累积父权指数为1.7990×105，除去4个不符合孟德尔遗传规律的基因座，余36个STR基因座累积父权指数为5.179 5×1020。可以判断为支持存在亲生关系。虽然以上40个基因座检测结果能够支持亲生关系，但4个不符合孟德尔遗传规律的基因座均出现在2号染色体上。为了弄清母女之间不符合孟德尔遗传规律的原因，再增加了12个X-STR基因座及12个2号染色体上的STR基因座进行检测。12个STR基因座用6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析产物，500V电泳1h左右。银染显色，对12个STR基因座扩增产物进行分析。将女儿的血样送到广州金域医学检验中心进行染色体核型分析。

为了进一步澄清每个基因座中父、母、女等位基因之间的序列差异，用T-Vector pMDTM19（Simple）试剂盒（大连宝生物工程有限公司）将每个等位基因片段进行克隆，并送到上海铂尚生物技术有限公司进行Sanger双脱氧链终止法测序分析。

1.3 检测结果

用人类STRtyper-21G扩增荧光检测试剂盒等共检测了40个常染色体基因座，发现母女在TPOX、D2S1338、D2S1772和D2S441基因座上不符合孟德尔遗传规律（表1）。增加12个X-STR基因座进行检测，母女之间未发现不符合孟德尔遗传规律的基因座（表2）。对新设计的12对2号染色体上的STR基因座引物进行PCR扩增（图1）。女儿的染色体数目或结构未发现异常，排除了母源部分基因片段缺失的可能性。表3显示，16个基因座涵盖了2号染色体上各个区段，说明女儿的等位基因全部为纯合子，而且全部能从父亲的等位基因中找到来源，其中11个基因座（TPOX、D2S1338、D2S1772、D2S441、D2S429、D2S1399、D2S1387、D2S1790、D2S434、D2S1391 和 D2S1788）的等位基因可以肯定是父亲遗传的，从母亲的等位基因中找不到来源。

表1 40个常染色体STR基因座中4个不符合遗传规律的基因分型结果及父权指数

表2 12个X-STR基因座等位基因分型结果

用Sanger法对上述所有等位基因片段进行序列分析，在原有基础上又发现D2S1327和D2S2960完全与父亲的序列相同，与母亲的序列有所差异（表4）。剩下的 3 个基因座（D2S2952、D2S2961、D2S1360）中虽可从母亲的结果中找到女儿的等位基因，但其父亲也有相同的等位基因。

表3 2号染色体上16个STR基因座的位置

图1 2号染色体上12个STR基因座PCR扩增银染检测结果

表4 2号染色体上16个STR基因座的Sanger测序结果

2 讨 论

STR等位基因分型是目前公认的亲子鉴定方法，但由于遗传的原因，分型过程中可观察到STR基因突变的现象，而表现出不符合孟德尔遗传规律的情况[1-3]。本案发现1例4个STR基因座上女儿的等位基因中找不到母亲的来源，而且都在2号染色体上，因此高度怀疑是单亲二倍体遗传[4]。

通过染色体核型分析，未发现女儿的染色体数目或结构异常，排除了母源部分基因片段缺失的可能性。对涵盖了2号染色体上不同区段的16个STR基因座用荧光或银染法进行检测，结果显示女儿的等位基因全部为纯合子，而且全部能从父亲的等位基因中找到来源，其中 11 个基因座（TPOX、D2S1338、D2S1772、D2S441、D2S429、D2S1399、D2S1387、D2S1790、D2S434、D2S1391和D2S1788）的等位基因可以肯定是父亲遗传的，从母亲的等位基因中找不到来源。用Sanger法对上述所有等位基因片段进行序列分析，在原有基础上又发现D2S1327和D2S2960完全与父亲的序列相同，与母亲的序列有所差异。剩下的3个基因座（D2S2952、D2S2961、D2S1360）中虽可从母亲的结果中找到女儿的等位基因，但其父亲也有相同的等位基因。因此，推断这3个基因座的等位基因很可能是由父亲传给女儿的，而不是来源于母亲。从上述结果可以看出，在16个2号染色体基因座中没有一个能肯定是母亲遗传的，而且这16个基因座涵盖了2号染色体上不同区段（图3），基本上能代表整个2号染色体的基因类型。由此分析女儿的2号染色体属于父系单亲二倍体遗传，母亲没有将2号染色体的基因遗传给女儿。因此，在本案中4个不符合遗传规律的STR检测结果不属于亲子鉴定中常见的等位基因变异，而是2号染色体单亲二倍体遗传变异[5-8]。所以笔者认为，TPOX、D2S1338、D2S1772 和 D2S441 这 4个 STR基因座的检测结果不应该纳入PI计算，而其余36个STR基因座的累积父权指数5.1795×1020才是更准确的结果。

迄今为止，虽然单亲二倍体遗传变异的报道不是很多见，但在亲子鉴定中仍需引起重视，以免造成误判。特别是出现同一染色体上多基因座不符合孟德尔遗传规律，而且突变步骤多（≥3）的案例时，更应引起高度重视。