冻融卵裂期胚胎当日解冻与提前解冻移植对临床妊娠结局的影响

李维娟,李彦奇,张 坤

(新疆佳音医院IVF胚胎实验室，乌鲁木齐 830001)

冻融胚胎移植(FET)是将胚胎置于超低温的液氮(-196 ℃)中冷冻保存，并在适宜时间解冻胚胎，进行分期、分批、可多次移植的一项技术，胚胎冷冻-解冻的过程称之“冻融”。1983年世界上首例冻融胚胎成功妊娠，1985年世界首例由FET获得的健康婴儿诞生。目前FET技术已广泛应用于临床，并成为辅助生殖技术中不可缺少的一部分。有研究表明，该技术不仅可以减少卵巢过度刺激综合征，使患者可以选择在更适合的时期进行移植,降低多胎妊娠率、促排卵次数及患者费用，还可减轻患者的身心压力和提高体外受精(IVF)的累积妊娠率[1-2]。对于延长冻融胚胎复苏后体外培养时间是否有助于改善妊娠结局尚有争议[3]。本研究通过对解冻移植周期中卵裂期胚胎当天解冻移植和提前解冻过夜培养后移植的临床妊娠结局进行回顾性分析，探讨解冻移植周期中卵裂期胚胎当天解冻移植和提前解冻过夜培养后移植对IVF结局的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2017年1-4月在本院生殖中心接受冻融卵裂期胚胎移植治疗的277例患者，即277个冻融卵裂期胚胎移植周期，均为玻璃化冷冻。本研究中卵裂期胚胎FET周期移植胚胎数≥1个，接受移植患者年龄22～49岁，平均(32.63±5.56)岁。纳入标准:(1)子宫正常，既往无子宫手术史；(2)均为不超过3次的IVF移植周期。排除标准：(1)程序化冷冻胚胎移植周期；(2)囊胚移植周期；(3)解冻后继续培养成囊胚再移植周期。根据解冻后胚胎培养时间的不同分为当日解冻组(A组)和提前解冻组(B组)。其中移植当日解冻胚胎162个周期(A组)，接受移植患者平均年龄(32.27±4.02)岁，平均解冻胚胎数(1.91±0.59)个；提前解冻115个周期(B组)，接受移植患者平均年龄(30.11±3.43)岁，平均解冻胚胎数(1.92±0.50)个，2组一般情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)。根据患者的年龄，可将A组和B组分别分成3组，即A1、B1：年龄<30岁；A2、B2：年龄30～<35岁；A3、B3：年龄≥35岁。

1.2方法

1.2.1胚胎冷冻-复苏 依照本院常规的促排卵方案，在IVF后第3天进行胚胎冷冻。本院胚胎冷冻标准：(1)第3天细胞数≥7个细胞，卵裂球大小均匀，无空泡，碎片≤10%；(2)第3天细胞数≥4个细胞，碎片≤10%，且与第2天相比卵裂球数目有所增加。采用玻璃化冻融法对胚胎进行冷冻和复苏。胚胎复苏后，观察胚胎的透明带和卵胞浆，选择复苏后卵裂球≥50%的胚胎进行移植。

1.2.2复苏的胚胎分组 A组当日解冻，即在移植当天进行胚胎复苏，体外培养1～3 h后进行移植。B组提前解冻，在移植的前一天下午进行胚胎复苏，体外培养18～20 h后进行移植。

1.2.3内膜准备 采用人工周期，于月经第3天口服戊酸雌二醇2～6 mg/d，B超显示子宫内膜厚度为8～15 mm时，加用黄体酮40 mg/d肌肉注射和黄体酮软胶囊(安琪坦)，第3天或第2天下午解冻胚胎。胚胎移植均在B超引导下进行，移植后给予常规黄体支持。

1.2.4临床妊娠标准 胚胎移植后14 d，尿人绒毛膜促性腺激素(HCG)阳性，血HCG≥25 mIU/mL，可定为生化妊娠。胚胎移植三周后行B超可见孕囊，判断为临床妊娠。临床妊娠率=临床妊娠周期数/移植周期数×100%，胚胎着床率=着床胚胎数/移植胚胎数×100%。

2 结 果

2.1当日解冻和提前解冻移植结局比较 A组与B组的临床妊娠率分别为38.27%、43.48%，着床率分别为24.68%、26.98%，2组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.2年龄与FET结局的关系 A3、B3分别与A1、B1，A2、B2相比，其临床妊娠率和着床率均明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。即随着女性年龄增高，临床妊娠率和着床率均随之下降，见表1。

表1 年龄与FET结局的关系

3 讨 论

FET在经历30多年的发展后，已成为辅助生殖技术的重要手段之一。因此，影响FET临床妊娠结局的相关因素也成了国内外学者共同探讨的问题。影响FET临床妊娠结局的因素很多，包括患者年龄、胚胎质量、移植时子宫内膜是否适宜、冻融胚胎复苏后体外培养时间等[4-5]。李伟等[6]认为卵裂球的完整性是影响冻融胚胎种植率的重要因素，移植前提早解冻观察复苏后胚胎有无进一步生长，有助于评价冻融胚胎的发育潜能。有报道认为，延长解冻后的培养时间对胚胎临床妊娠结局没有好处，缩短体外培养时间则可以明显提高种植率和活产率[7]。另外一些学者则发现延长冻融胚胎体外培养时间并不影响冻融卵裂期胚胎的发育潜能，也不能提高FET的妊娠率和着床率[8-10]。本研究也表明提前解冻并未明显改善妊娠结局。但是，有研究表明将第3天卵裂期胚胎冻融后培养至囊胚移植，可以明显提高临床妊娠率[11]。因此，临床可通过适量增加囊胚的移植数目，从而改善FET的临床妊娠结局。

随着年龄的增长，在FET周期中卵母细胞的数量及质量逐渐下降，临床妊娠率也随之下降。因此，女性的年龄是影响FET临床妊娠的因素之一。本研究结果显示，年龄≥35岁患者临床妊娠率和着床率明显低于年龄<35岁患者，年龄≥35岁患者临床妊娠率较低可能是因为卵巢储备能力、卵子数量和质量，以及子宫内膜容受性均降低，并且染色体异常概率增加，从而导致临床妊娠率下降，这与已有研究结论相一致[12-13]。

综上所述，冻融卵裂期胚胎提前解冻培养后再进行移植并不能改善妊娠结局，但年龄是影响冻融胚胎妊娠率和着床率的重要因素，随着女性年龄的增高，临床妊娠率和着床率均会随之下降。因此，在临床工作中应根据患者的具体情况选择恰当的时间进行移植，从而提高临床妊娠率。