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(1.江苏农牧科技职业学院动物医学院,江苏 泰州 225300; 2.上海瑞鹏宠物医院有限公司宜川路分公司,上海 静安区 200040; 3.亳州汽车工业学校,安徽 蒙城 233500)
禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌感染引起的一类细菌性传染病。该病可引起禽类的肝周炎、气囊炎、心包炎、输卵管炎和腹膜炎等,并导致不同程度的死亡率。做好禽大肠杆菌病的防控工作,对于保障养禽业的健康发展具有重要意义。
某鸡场存栏蛋鸡约15 200只,在290日龄开始呈现持续发病和死亡现象。2周后,产蛋率较发病前现下降约31%,发病率为10.7%,死亡率为2.13%。
病鸡精神沉郁,羽毛粗乱无光,呼吸困难,采食、饮水减少或废绝。腹泻,排黄白色稀薄粪便。部分病鸡后腹部明显胀大下垂,蹲伏少动,有的较快死亡,也有的拖延很久,消瘦衰弱致死。剖检严重或死亡病鸡,见腹腔中充满淡黄色腥臭的液体和凝固的卵黄碎块。腹腔器官相互粘连,输卵管黏膜发炎,有针尖状出血点和淡黄色纤维素性渗出物沉着,输卵管腔中有黄白色纤维素性凝块。
无菌采集2只病鸡的肝组织进行触片、瑞氏染色镜检,发现存在中等大小的杆菌。
无菌采集鸡病变的肝或心组织,于麦康凯琼脂平板上划线分离,37℃培养24 h后观察菌落生长情况。结果见麦康凯琼脂平板上存在中等大小、表面光滑、湿润的红色菌落(见图1)。
图1 麦康凯琼脂平板分离结果
挑取中等大小、表面光滑、湿润的红色菌落接种于普通琼脂平板进行纯培养;挑取单个菌落涂片、染色镜检。结果分离菌是革兰氏阴性中等大小的杆菌(见图2)。
图2 革兰氏染色结果
挑取普通琼脂平板上的纯培养物进行氧化酶试验,结果呈阴性(见图3);接着进行肠杆菌科编码鉴定系统规定的葡萄糖发酵及赖氨酸脱羧酶及鸟氨酸脱羧酶等11项常规生化反应,结果:葡萄糖产酸产气试验阳性、赖氨酸脱羧酶试验阳性、鸟氨酸脱羧酶试验阳性、H2S试验阴性、吲哚试验阳性、乳糖发酵试验阳性、卫矛醇分解试验阴性、苯丙氨酸脱氨酶试验阴性、脲酶试验阴性、枸橼酸盐利用试验阴性(见图4)。根据氧化酶试验及常规生化反应的结果,本次的分离菌鉴定为大肠杆菌。
图3 氧化酶试验
图4 常规生化反应11项
取营养琼脂纯培养物接种于营养肉汤,37℃培养18 h,腹腔接种小白鼠,0.2 mL/只[1];对照组小白鼠腹腔接种无菌生理盐水,0.2 mL/只。在12~36 h内观察实验组和对照组小白鼠存活情况。结果大肠杆菌分离菌能够导致小白鼠接种后24 h左右发病死亡。剖检死亡小白鼠,取其脏器,用麦康凯琼脂进行细菌分离,发现其培养特性及形态染色结果均符合大肠杆菌的生物学特性。
根据临床症状、剖检病变及实验室诊断结果,诊断该蛋鸡群存在致病性大肠杆菌引起的大肠杆菌病。
使用10%的盐酸多西环素可溶性粉,混饮,300 mg/L水,连用5 d。同时,加强饲养管理,做好卫生消毒工作。通过采取以上措施,1周后鸡群基本恢复正常。
鸡致病性大肠杆菌是鸡大肠杆菌病的病原,可通过多种途径感染不同品种、日龄的鸡,引发鸡的急性败血症、肝周炎、心包炎及卵黄性腹膜炎等多种症状。常常采用麦康凯或若伊红美蓝培养基进行分离,大肠杆菌在伊红美蓝培养基上则形成紫黑色带金属光泽的菌落。使用生化试验可以鉴定分离菌是否为大肠杆菌,借助于动物致病性试验,可以鉴定出分离的大肠杆菌是否具有致病性。
最好根据药敏试验结果,选择敏感度比较高的抗菌药物进行治疗。本次鸡场大肠杆菌病的治疗药物选择没有进行药敏试验,但是根据调查了解该鸡场近2年没有发生过鸡大肠杆菌病,而且长时间没有使用过土霉素类抗菌药物,于是尝试性选择多西环素进行治疗,若用药3 d后没有明显的疗效,需要及时更换药物,或者尽早进行药敏试验。
疫苗是有效预防鸡大肠杆菌病的重要方法之一。因为大肠杆菌血清型众多,不同血清型大肠杆菌疫苗间的交叉保护性较低。所以,在选择疫苗时,应根据鸡场当前流行的血清类型而定。本次鸡大肠杆菌分离株将进一步进行血清型鉴定,为制作菌苗奠定基础。目前,国内外研制的预防大肠杆菌的疫苗在质量、安全性和免疫效果等方面存在一定的缺陷,还有待提高[2]。