二妙散免煎颗粒与传统饮片中有效成分含量对比分析

刘德志，张世亮，章飞霞，林 君

(苍南县中医院，浙江 苍南 325800)

“二妙散”出自《丹溪心法》卷4，是由黄柏和苍术组成的药方，其中，黄柏擅清下焦湿热，苍术擅燥湿健脾助运，两者相辅相成。中药免煎颗粒作为一种新剂型，其有效成分含量测定是临床应用的关键。本研究旨在通过分析二妙散免煎颗粒与传统饮片中有效成分的含量差异，为二妙散的临床应用提供参考。

一、材料

(一)仪器。

LC-2010A型高效液相色谱仪，HS6150型超声波清洗器，CP225D分析天平。

(二)药品与试剂。

黄柏饮片、麸炒苍术饮片、二妙散免煎颗粒剂、盐酸小檗碱对照品、苍术素对照品、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

二、方法与结果

(一)色谱条件。

1.盐酸小檗碱。以十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)为填充剂，乙腈-0.1%磷酸溶液(50：50)为流动相，检测波长265 nm，柱温25℃，流速1 ml/L，进样量10 μL，理论塔板数≥4000。

2.苍术素。以ODS为填充剂，甲醇-水(79：21)为流动相，检测波长340 nm，柱温25 ℃，流速1 ml/L，进样量10 μL，理论塔板数≥5000。

(二)溶液的制备。

1.对照品溶液的制备。取盐酸小檗碱和苍术素适量，精密称定，加甲醇溶液溶解，制成1.17 mg/ml的盐酸小檗碱混合溶液和21.65 μg/ml的苍术素混合溶液，二者在2.1色谱条件下均可完全出峰，且对称性较好(见图1、图2)。

2.供试品溶液制备。①二妙散汤剂：取黄柏饮片、麸炒苍术饮片各50 g，浸泡30 min，头煎加水500 ml煎汁约200 ml，二煎加水300 ml煎汁约200 ml，洗涤药渣，两煎混合后，定容至500 ml，既得。②二妙散免煎颗粒剂：取等效剂量免煎颗粒(黄柏的饮片与免煎颗粒比为12∶1，麸炒苍术的饮片与免煎颗粒比为4.5∶1)，两者混合，加入40-50℃温水溶解，并温水定容至500 ml，既得。

图1 盐酸小檗碱对照品色谱图

(三)方法学考察。

1.线性关系考察。精密吸取适量对照品溶液进样5次，盐酸小檗碱的进样量依次为1μL、2μL、4μL、6μL、10μL，苍术素的进样量依次为1μL、2μL、5μL、10μL、15μL，以各对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，盐酸小檗碱的回归方程为Y=7132.5X+676.89(R=0.999)，苍术素的回归方程为Y=215751X-9672.7(R=0.999)。结果显示，盐酸小檗碱为1.021 mg-10.21 mg时与峰面积呈良好的线性关系，苍术素为0.53μg-10.68μg时与峰面积呈良好的线性关系。

2.精密度试验。精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，测定峰面积。结果显示，盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.14%，苍术素峰面积的RSD为0.973%，二者均小于3%，表明该方法的精密度良好。

3.稳定性试验。精密吸取供试品溶液适量，分别于0h、2h、6h、8h、12h时进行测定，记录峰面积。结果显示，二妙散汤剂中盐酸小檗碱和苍术素峰面积的RSD分别为0.532%和1.157%，二妙散免蒸颗粒剂中盐酸小檗碱和苍术素峰面积的RSD为0.639%和1.113%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

4.重复性试验。精密称取二妙散传统饮片5份，每份2 g，测定并得到峰面积。结果显示，盐酸小檗碱和苍术素峰面积的RSD分别为0.450%和1.322%，二者均小于3%，表明该方法的重复性较好。

5．加样回收试验。精密称取黄柏和苍术饮片各50 g及同等剂量二妙散免煎颗粒，蒸煮后各取1 ml，加入等量的盐酸小檗碱对照品和苍术素对照品，按要求制成供试品溶液，测定6次，计算加样回收率。结果显示，二妙散汤剂中盐酸小檗碱和苍术素的平均回收率分别为98.96%和99.03%，RSD分别为0.210%和1.523%，二妙散免煎颗粒剂中盐酸小檗碱和苍术素的平均回收率分别为98.73%和99.11%，RSD分别为0.131%和1.148%。

(四)样品含量测定。

取黄柏饮片、苍术饮片及二妙散免煎颗粒各4批，制成供试品溶液，测定二妙散免煎颗粒及传统饮片中的盐酸小檗碱和苍术素含量(见附表)。

三、讨 论

(一)色谱条件的选择。

2015版《中国药典》中对盐酸小檗碱的紫外扫描采用265 nm或345 nm波长测定，苍术中的苍术素为340 nm。本研究前期对盐酸小檗碱进行紫外扫描发现，当波长为265 nm时，盐酸小檗碱吸收良好且峰形对称性较好，故选择265 nm作为盐酸小檗碱的测定波长，340 nm作为苍术素的测定波长。同时，参考相关文献[1]，初步选择盐酸小檗碱和苍术素的流动相，通过对比出峰情况发现，以乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50)为盐酸小檗碱流动相，以甲醇-水(79∶21)为苍术素流动相，可较好分离样品中的主峰与杂峰，灵敏度高且保留时间短，因此，本法可作为质量控制标准。

附表 含量测定结果(mg/g)

(二)研究意义。

本研究发现，二妙散免煎颗粒中的盐酸小檗碱和苍术素含量虽略高于传统饮片，但无明显差异。因此，研究者推测，二妙散免煎颗粒与传统饮片具有同等疗效[2]。但由于中药成分相对复杂，传统饮片共煎过程中有效成分会发生一系列络合作用，可减毒增效，而免煎颗粒只是单味中药的提取浓缩，因此，仅靠有效含量的检测并不能完全肯定其药效优劣。