精制冠心片中降香组分的检测方法研究*

袁 航，陈安珍，吴爱英，卢京光

（山东省青岛市食品药品检验研究院，山东 青岛 266073）

精制冠心片由丹参、降香、赤芍、川芎、红花5味中药组方，具有活血化瘀的功效，现行标准收载于2015年版《中国药典（一部）》，该标准中包括丹参、赤芍、川芎和红花的薄层色谱鉴别项及丹参、赤芍的含量测定项［1］，但缺少降香的质量控制方法，无法考察降香药味投料及质量。降香为豆科植物降香檀Dalbergia odoriferaT．Chen树干和根的干燥心材，有化瘀止血、理气止痛功效，主要有效成分为挥发油和水溶性黄酮类成分［2-3］。现代药理研究表明，降香有抗急性心肌缺血、抗凝血、舒张血管、增加冠脉流量、抗炎及镇痛等作用［4-5］。在精制冠心片生产工艺中，降香首先提取挥发油，并将水提液同时入药。中药复方配伍是中药复方（中成药）的关键［6］。有研究表明，降香挥发油和水提物与丹参配伍均可增强丹参的药效［7］，故降香的质量优劣、是否足量投料及是否按工艺生产，对精制冠心片的质量及临床疗效均有较大影响。由于法定标准中降香药味质控指标的缺失，且降香价格昂贵，会有不法企业为降低生产成本，提高利润，不惜违反生产工艺，降香不投料或不经提取挥发油直接水提入药，严重影响精制冠心片的临床疗效。本试验中建立了可同时检测降香挥发油和水提极性成分的薄层色谱法，并采用气相色谱法验证降香挥发油成分，本方法的建立，可同时考察企业是否按法定工艺投料及生产，进一步完善精制冠心片的质量标准体系，为精制冠心片中降香的质量控制提供依据。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Agilent 7890A型气相色谱仪（FID检测器，美国Agilent公司）；DB-5 毛细管柱（30m×0．32mm，0．25μm，美国 Agilent公司），HP-5毛细管柱（30 m×0．32 mm，0．25 μm，美国 Agilent公司），FB-5 毛细管柱（30 m ×0．32 mm，0．25 μm，美国菲罗门公司）；AS10200BT 型超声波清洗器（天津Auto Science公司）；硅胶G薄层板（德国Merck公司）。

1．2 试药

降香对照药材（批号为120952-201108，中国食品药品检定研究院）；反式橙花叔醇（批号为BCBP5327V，西格玛奥德里奇公司，质量浓度为0．876 g／mL）；石油醚（40～60℃ ，色谱纯，德国 Merck公司），乙醇（99．8%，色谱纯，北京百灵威科技有限公司），甲醇（色谱纯，德国Merck公司）；精制冠心片为2015年国家评价性抽验样品，共47批次。

2 方法与结果

2．1 降香挥发油及水溶极性成分的薄层色谱鉴别

2．1．1 溶液制备

供试品溶液：取样品10片，除去包衣，研细，加石油醚（40 ～60℃）5 mL，超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz）30 min，滤过，滤液作为降香挥发油测定的供试品溶液；滤渣挥干残留溶剂，加甲醇5 mL，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，滤过，滤液作为降香水溶极性成分测定的供试品溶液。

对照药材溶液：取降香对照药材0．3 g，加石油醚（40～60℃）10 mL，超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz）30 min，滤过，滤液作为降香挥发油的对照药材溶液；滤渣挥干残留溶剂，加水20 mL，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为降香水溶极性成分测定的对照药材溶液。

阴性对照品溶液：取处方中除降香的其他药味，按处方比例及工艺提取，制成缺降香的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2．1．2 薄层色谱条件及检视

精密吸取 2．1．1项下3种溶液各 10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯 （8∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的主斑点；若挥发油样品在与对照药材溶液色谱相应位置未显相同颜色的主斑点，则应采用气相色谱法进一步验证；阴性对照品溶液在与对照药材溶液色谱相应位置无干扰斑点。结果见图1。

图1 降香薄层色谱图

2．2 降香挥发油气相色谱验证

2．2．1 色谱条件

色谱柱：HP-5 毛细管柱（30m×0．32mm，0．25μm）；检测器：FID；进样量：2 μL；流速：1．0 mL ／min；程序升温：起始温度为90℃，保持3 min，以30℃ ／min的速率升至180℃，保持6 min，再以相同速率升至220℃，保持5 min；进样口及检测器温度：230℃。

2．2．2 溶液制备

按2．1．1项下方法制备供试品溶液、对照药材溶液与阴性对照品溶液；取反式橙花叔醇对照品20 μL，加乙醇溶解并定容至100 mL，作为对照品溶液。

2．2．3 方法学考察

检出限确定：取反式橙花叔醇对照品溶液，逐级稀释后进样。根据信噪比（S／N）＝3时的溶液浓度，计算出方法的检出限（LOD）为 0．105 μg ／g。

专属性试验：分别精密吸取反式橙花叔醇对照品溶液、降香挥发油供试品溶液、石油醚提取的阴性对照品溶液，各2 μL，按拟订色谱条件测定。结果见图2。供试品溶液色谱中，呈现与对照品溶液色谱峰保留时间基本一致的色谱峰，阴性对照品溶液在相同保留时间无相应色谱峰，表明阴性样品对测定无干扰。

耐用性试验：按拟订色谱条件测定，考察DB-5毛细管柱 （30 m × 0．32 mm，0．25 μm）和 FB-5 毛细管柱（30 m × 0．32 mm，0．25 μm）。结果反式橙花叔醇与其他成分分离度良好，阴性对照品溶液在与对照品溶液相应位置无色谱峰，表明该方法的色谱柱耐用性良好。

图2 降香挥发油气相色谱图

2．2．4 样品检出结果

取47批次样品，依法测定，结果有7个企业的14批次样品检出降香挥发油，占29．79%；4个企业的11批次样品检出降香水提极性成分，占23．40%；其中，仅2个企业的2批次样品同时检出降香挥发油和水提极性成分，占4．26%；7个企业的24批次样品中2种成分均未检出，占51．06%。

3 讨论

本试验中所用47批次精制冠心片样品分别从生产企业及经营企业抽样，涉及10家企业，分布于全国4个省份，其中吉林省7家，样品覆盖面广，代表性强。样品检测结果表明，2批次样品同时检出了降香挥发油成分和降香水提极性成分，且同一厂家的样品批间差异较大，部分批次只检测出了降香挥发油成分或水提极性成分，部分批次2种成分均未检出。检测结果揭示了部分企业在生产过程中涉嫌违反生产工艺生产或使用伪劣降香药材投料生产等。降香为处方中主要药味，对于精制冠心片的临床疗效起着关键性作用，而精制冠心片现行标准中降香质量控制方法的缺失，使部分企业不按法定工艺生产或投料，严重影响药品的有效性。

在精制冠心片的生产工艺中，降香为首先提取挥发油入药，但对挥发油的量并无要求。因此，为确保挥发油检出结果的准确性，本试验中同时建立了气相色谱法对未检出挥发油的样品进行了进一步确证。有研究表明，降香挥发油的主要成分为反式橙花叔醇［8-9］，且正品与伪品间挥发油的成分差异较大［10］，因此选择以反式橙花叔醇作为降香挥发油的检测指标对降香挥发油进行验证。按照降香足量投料、挥发油提取转移率为0．4%计算，则制剂中含有挥发油的量应为 12．5 μg ／g，本方法的检出限为 0．105 μg ／g，因此，按本疗法可检出制剂中的降香挥发油。

本试验中建立的方法可通过同一个色谱条件实现对降香挥发油成分和水提极性成分的同时检测，方法简便、快速、有效，可进一步提高和完善中药制剂的质量标准，为药品监督部门提供了技术支撑，以有效打击违法违规行为，保证广大人民群众用药安全有效。