定量检测EB病毒VCA-IgA抗体及EB病毒DNA对鼻咽癌筛查和诊断的价值

李晓，杨永泉，廖海平，孙朝晖，李林海

中国人民解放军 广州总医院，广东 广州 510010

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是上皮细胞来源的恶性肿瘤，在我国广东、广西、福建等地区高发[1-2]。鼻咽癌是临床常见的头颈部肿瘤之一，起病隐匿，早期无典型临床症状，容易出现漏诊和误诊[3]，很多患者确诊时已为晚期。因侵袭性和转移率很高，预后较差，因此对鼻咽癌高发地区人群进行筛查和早期诊断是鼻咽癌防治的关键。研究表明Epstein-Barr病毒（Epstein-Barr virus，EBV）感染与鼻咽癌的发生发展密切相关[4-5]，通过检测血液中EBV衣壳抗原IgA（VCA-IgA）和EBV-DNA，可早期诊断鼻咽癌，提高鼻咽癌患者的存活率。传统的检测IgA抗体的间接免疫荧光法和酶联免疫法较为繁琐，易出现假阳性，不利于质量控制。在此，我们收集了鼻咽癌患者、非鼻咽癌病人和健康体检人群的血液，采用化学发光法定量检测VCA-IgA抗体，PCR荧光探针法检测EBV-DNA浓度，评价这2项指标对鼻咽癌的血清学诊断价值，并为鼻咽癌的早期筛查提供数据和理论依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集2017年6月至2018年6月来广州总医院就诊的病人和体检人群的全血标本，分为3组，即鼻咽癌组（NPC）（经病理诊断确诊的鼻咽癌患者48例，男41例、女7例，年龄30～76岁，平均49.6岁）、非鼻咽癌组（Non-NPC）（因鼻咽部症状就诊我院的非鼻咽癌患者41例，男27例、女14例，年龄8～83岁，平均 48.7岁）、健康对照组（healthy control，HC）（来我院接受健康体检的人群共6735例，男 4185例、女 2550例，年龄 20～97岁，平均47.2岁）。

1.2 EBV抗体检测

抽取患者和体检人群无抗凝静脉血3 mL，4000 r/min离心10 min，分离血清。采用化学发光免疫夹心法检测EBV-VCA-IgA抗体浓度，试剂盒购于深圳新产业生物医学工程股份有限公司，检测仪器为该公司配套的Maglumi 4000 Plus全自动化学发光仪，严格按照试剂盒说明书操作，VCA-IgA抗体浓度≥4 AU/mL判定为阳性。

1.3 EBV-DNA定量检测

抽取患者和体检人群EDTA抗凝的静脉血3 mL，4000 r/min离心10 min，分离血浆。采用实时荧光定量PCR技术检测血浆中EBV-DNA的浓度，试剂盒购于湖南圣湘生物科技有限公司，检测仪器为美国罗氏LightCycler 480高通量实时荧光定量PCR仪，严格按照试剂盒说明书进行，EBV-DNA拷贝数≥4.00×102拷贝/mL判定为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS22.0软件对数据进行统计学分析，计数资料用百分比表示，各组间率的比较采用χ2检验；计量资料2组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 研究人群基本临床资料

本研究纳入的鼻咽癌患者、非鼻咽癌患者和健康对照人群在年龄组成上基本一致，广州地区鼻咽癌发病率以青壮年为高，平均年龄49.6岁，且以男性为主，占总发病人数的85.4% （41/48），详见表1。

2.2 3组人群VCA-IgA抗体和EBV-DNA定量检测结果

以临床病理确诊鼻咽癌为“金标准”，共有48例患者确诊为鼻咽癌患者，其中44例VCA-IgA抗体阳性，25例EBV-DNA阳性。表2可见，3组人群VCA-IgA抗体和EBV-DNA浓度明显不同，鼻咽癌组的浓度显著高于其他2组（13.96 AU/mL，4.85×102拷贝/mL），差异有统计学意义（P＜0.001）；VCA-IgA抗体浓度在非鼻咽癌组也有升高，但数值低于鼻咽癌组，差异有统计学意义（9.41 vs.13.96，P＜0.001）；而EBV-DNA浓度中位数在非鼻咽癌组和健康对照组人群均为正常值。VCA-IgA抗体和EBV-DNA在3组中的阳性率结果比较显示均以鼻咽癌组最高（91.6% ，52.1% ），差异有统计学意义（P＜0.001）。

表1 研究人群年龄和性别分布

2.3 VCA-IgA抗体和EBV-DNA定量检测对鼻咽癌的诊断价值

根据3组人群的VCA-IgA抗体和EBV-DNA定量检测结果，计算诊断鼻咽癌的灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值、阴性预测值和约登指数。表3可见，应用VCA-IgA抗体指标检测鼻咽癌患者时，其敏感度、阴性预测值和约登指数高于EBV-DNA指标，而VCA-IgA抗体的特异性、准确度和阳性预测值低于EBV-DNA指标。阳性预测值越高，说明EBV-DNA阳性者患鼻咽癌的风险较高，在阴性预测值中，VCA-IgA抗体和EBVDNA均大于99% ，说明当这2项指标为阴性时，患鼻咽癌的风险较低。

2.4 VCA-IgA抗体和EBV-DNA定量ROC曲线分析

以鼻咽癌组、非鼻咽癌组和健康对照组为分析人群做ROC曲线如图1。曲线下面积（AUC）为0.5～1.0。当AUC＞0.5时，AUC越接近于1，说明诊断效果越好；AUC＜0.5说明诊断方法完全无效，无诊断价值。VCA-IgA抗体的AUC为95.19% ，EBV-DNA的AUC为76.02% ，说明VCA-IgA抗体和EBV-DNA均可用于诊断鼻咽癌，且VCA-IgA抗体的诊断效能优于EBV-DNA。

3 讨论

鼻咽癌的发病主要与遗传、环境和病毒感染等因素有关，而EBV与鼻咽癌的发生发展有着密切的关系，病毒早期感染和长期反复感染会导致鼻咽部上皮细胞病变，进一步恶化为鼻咽癌[6]。EBV VCA-IgA抗体水平增加可出现于鼻咽癌确诊前10～61个月，通过检测VCA-IgA有助于早期发现和诊断鼻咽癌[5]，对提高患者生存率和远期预后具有重要意义，而对高发地区人群的筛查是提高鼻咽癌治愈率和获得良好预后的关键。

鼻咽癌是我国较常见的恶性肿瘤之一，病例约占全世界的80%[7-8]，南方高于北方，好发于青年和中年，男性多于女性。本研究结果显示，广州地区青壮年的鼻咽癌发病率高，平均年龄49.6岁，以男性为主，占85.4% ，发病年龄和发病率均高于陈云等的报道[9]。

图1 VCA-IgA抗体和EBV-DNA定量ROC曲线

表2 3组人群VCA-IgA抗体和EBV-DNA检测结果

表3 VCA-IgA抗体和EBV-DNA定量检测对鼻咽癌的诊断评价分析（% ）

本研究对EBV-VCA-IgA和EBV-DNA的定量检测结果显示VCA-IgA在非鼻咽癌组与健康对照组中的阳性率分别为29.2% 和6.5% ，表明非鼻咽癌患者和健康体检者血清中的VCA-IgA有一定比例的阳性率，但远低于鼻咽癌组91.6% 的阳性率；而VCA-IgA抗体浓度在非鼻咽癌组也有升高，但数值低于鼻咽癌组，差异有统计学意义，这表明EBV抗体参与了鼻咽癌的病变过程，VCAIgA抗体浓度较高者为患鼻咽癌高风险人群。进一步分析发现，VCA-IgA抗体检测鼻咽癌的敏感度和特异性均较高（91.67% ，87.62% ），而EBVDNA指标虽有很高的特异性（93.69% ），但敏感度太低（52.08% ）。在阴性预测值中，VCA-IgA抗体和EBV-DNA均大于99% ，说明当这2项指标均为阴性时，患鼻咽癌的风险较低。而阳性预测值结果显示EBV-DNA高于VCA-IgA抗体，说明EBVDNA阳性者患鼻咽癌的风险较高，故EBV-DNA阳性者应定期复查EBV抗体和EBV-DNA定量检测，必要时进行鼻腔镜检查，以便早期发现鼻咽癌。ROC曲线分析结果显示，VCA-IgA抗体曲线下面积为95.19% ，与以往报道一致[10]，VCA-IgA抗体作为鼻咽癌诊断的血清指标其诊断效能高于EB-DNA，这可能与VCA-IgA抗体检测的方法和检测试剂盒有关。以往研究[11-12]一般采用ELISA法或免疫酶法，试剂批间差异大，操作繁琐，结果判断受主观因素影响；而本研究采用化学发光法检测VCA-IgA抗体，提高了检测的敏感度和特异性，且具有操作过程自动化、高通量、数据更精准、检测结果客观、重复性良好等优点，非常适用于鼻咽癌高发地区和高危人群的筛查，对于排除鼻咽癌具有重要的临床价值。

综上所述，通过对鼻咽癌患者和健康体检人群VCA-IgA抗体和EBV-DNA的检测，有利于鼻咽癌的有效筛查，为鼻咽癌的早期诊断提供可靠的依据，是较好的临床诊断辅助指标，值得临床广泛应用。