镜检法与金标法在疟原虫筛查中的应用

李冉，王康椿，叶青，黄小玲

(广东省第二中医院检验科，广东 广州 510095)

疟疾是由人类疟原虫感染引起的寄生虫病，据WHO统计2016年全球仍有2.12亿疟疾感染病例[1]。近年来，经济贸易全球化带来的人口流动及劳务输出增加，我国多有输入性疟疾的报道。2010年1月-2015年7月，广东省共报告疟疾病例773例，全为输入性病例[2]。因此，准确快速的诊断对疟疾控制具有重要意义。疟原虫检测多采用镜检法，其操作简便，适用于各级医疗机构，但其受影响因素较多，而疟原虫快速诊断试剂盒具有操作简便、耗时短、检测结果直观易判读等优点。广州万孚生物技术股份有限公司生产的疟原虫检测试剂盒通过检测全血样本中的特异性恶性疟原虫乳酸脱氢酶 （pfLDH）和疟原虫乳酸脱氢酶（panLDH）来判定有无疟原虫感染。本研究同时应用镜检法与金标法进行检测，对两种方法的临床应用进行评价，旨在为各级医疗机构使用提供参考。

1 材料与方法

1.1 病例选择 选取2011年1月-2017年9月期间在我院镜检发现疟原虫的55例为阳性组；以发热查因为诉求镜检疟原虫阴性的292例为对照组。

1.2 材料 OLYPUMS CX41双目普通光学显微镜，BASO吉姆萨染液，广州万孚疟原虫金标法检测试剂盒。

1.3 方法

1.3.1 显微镜检查 每份病例均采集EDTA.K2新鲜抗凝全血2ml，并立即涂厚、薄血片，其中薄片用甲醇固定后，与厚片一起用吉姆萨染液染色10min，使用清水浸泡法除去多余的染液，待干后由经验丰富的镜检人员进行镜检，所有镜检结果均由第二人复核。薄片用于虫种鉴定，具体方法参见《疟疾诊断标准》（WS/T 259-2006）。

1.3.2 金标法检测 按照试剂盒说明书操作。取5ul全血样本滴加于加样孔内，同时滴加4滴裂解液于试剂孔，15min内观察结果。检测区（T1）及质控区（C）各出现一条红色反应线，提示恶性疟感染；检测区（T1、T2）及质控区（C）均出现一条红色反应线，提示恶性疟感染，但不排除可能同时混合感染其他3种疟疾；检测区（T2）及质控区（C）各出现一条红色反应线，提示除恶性疟以外的其他3种疟疾中的1种或多种感染；仅质控区（C）出现一条红色反应线，为阴性；质控区（C）无红色反应线出现，为无效，应重测。

1.4 数据统计 两组间数据采用χ2检验，P＜0.05具有显著性差异，所有数据均使用SPSS 18.0软件进行统计与分析。

2 结果

对347例血样同时用金标法和镜检法进行疟原虫检测，镜检出疟原虫阳性55例（32例恶性疟，17例间日疟，1例卵形疟，5例混合疟），阴性292例，阳性率为15.85%（55/347）；金标法试剂盒检测出阳性55例（32例恶性疟，17其他疟疾，5例混合疟，1例假阳性），阴性292例。以镜检法结果为基准，金标法试剂盒检测的灵敏度为98.18%（54/55），特异性为99.66%（291/292），阳性预测值为98.18%（54/55），阴性预测值为 99.66%（291/292）；两种检测方法符合率为 99.42%﹛（54+291）/347﹜；两种检测方法间差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 镜检法与金标法检测疟原虫结果统计分布

3 讨论

我国的疟疾发病率虽较19世纪70年代有了较大下降，但随着国际化的进程，外贸经济的繁荣，人员流动性的加大，疟疾仍为困扰我国的传染性疾病之一，海南、云南、广西等地疟疾发病率相对较高，而内陆地区输入性疟疾的报道也日益增多[3-6]。

目前疟疾检测主要有经典的镜检法，金标法，流式细胞标记法，PCR法等方法[7]。镜检法操作简便，易于普及，适合各级医院使用，但检出受制片、染色、镜检水平、显微镜质量等多方面因素影响，导致疟疾病例的确诊与鉴别诊断困难[8，9]，特别在疟原虫混合感染或药物治疗后，疟原虫形态遭到破坏，增大了疟原虫染色镜检的难度[10]；流式细胞标记法和PCR检测法虽然具有检测准确，灵敏度高的优点[11]，但其操作繁琐，要求条件及成本较高，难以普及；金标法试剂盒具有体积小，易保存，操作方便，结果易于判读，对操作人员要求不高等特点，适用于各级医疗检测机构用于疟疾疑似患者的辅助诊断和疟区病例的筛选检查。

本研究中以镜检法为参照，金标法检测试剂盒具有较高的灵敏度 （98.18%）与特异性（99.66%），两种检测方法之间无显著差异。金标法与镜检法二者的符合率高达99.42%，显示了良好的一致性。

万孚金标法疟原虫检测试剂盒通过检测特异性恶性疟原虫乳酸脱氢酶（pfLDH）和疟原虫乳酸脱氢酶（panLDH）以检测疟原虫。本研究的347例检测血样中，有1例镜检法阳性，而金标法阴性，经镜检确认该例标本为卵形疟，故未能检出，这与唐凤[12]等人的研究相符，但因标本量不足，未能验证金标法对卵形疟的检出率。本研究中发现的1例镜检法阴性，金标法阳性的标本，经询问该患者检查前1周内曾服用抗疟药物，这可能与镜检结果转阴时间（1-5d）和金标法转阴时间（＞7d）有差异有关[13]。

疟疾是由雌性按蚊传播的一种致死率第一的寄生虫疾病，根据感染疟原虫种类的不同有7-30天的潜伏期[14]，消灭传染源和传播途径是控疟的两大首要任务，由于人群对抗疟药抵抗加强，抗疟药滥用，病人治疗不规范等，使传染源多为低密度带虫者。常规镜检法不易检出，常出现漏诊，使传染源不能及时发现并消除[15]。故提升各级检验人员的能力，及时发现疟疾，对疟疾防治有重要意义[16]。联合镜检法与金标法对疟原虫进行检测，简便易行，易于推广，可弥补检测人员技术上的不足，提高疟原虫检出率，为不同医疗机构根据自身特点选择疟原虫的检测方法提供依据。