两种灵芝的粗多糖提取及其抗氧化活性的比较

郑秋桦 曾松荣 柯野 陈桢

【摘 要】 本文主要探究两种灵芝粗多糖提取及抗氧化活性的比较。采用超声波提取，然后，选用苯酚——硫酸法检测两种灵芝粗多糖得率。其中紫芝为2.2%，赤芝为2.8%。另外，还选取了铁氰化钾还原法来检测比较两种灵芝粗多糖的自身还原能力，同时对二者清除羟基自由基（-OH）效果进行了比较，以及对清除DPPH的效果进行比较，结果表明：赤灵芝粗多糖清除羟基自由基的能力、还原能力均比紫灵芝粗多糖强，但是对于DPPH的清除能力比紫芝粗多糖稍弱，而且紫芝、赤芝的抗氧化活性均与其粗多糖含量的浓度成正比。

【关键词】 紫灵芝；粗多糖；抗氧化活性

[Abstract] In this paper， the extraction and antioxidant activity of crude polysaccharides from Ganoderma lucidum were studied. Ultrasonic extraction was used， then phenol-sulfuric acid method was used to detect the yield of two kinds of crude Ganoderma lucidum polysaccharides.The scavenging effect of hydroxyl radical （-OH） was compared， and the effect of scavenging DPPH was compared. The results showed that crude polysaccharide of Ganoderma lucidum could scavenge hydroxyl radical and reduce hydroxyl radical more effectively than crude polysaccharide of Ganoderma lucidum， but for DPPH.

[Keywords] ganoderma lucidum； polysaccharide； antioxidant activity

灵芝属于担子菌纲多孔均科灵芝属真菌，又称之为仙草以及灵草，具有滋补强壮的功效，其主要成分包括多糖、多肽以及三萜类成分，多糖是由多种单糖聚合而成的碳水化合物[1]，在对灵芝多糖成分以及抗氧化活性的研究中，研究人员认为采用超声波结合纤维素酶的方式，可以确定多糖含量，且可以研究灵芝的抗氧化活性[2]。但是对于不同种类灵芝的多样含量以及抗氧化活性研究较少。本文采用超声波提取法以及水提醇沉法两种方法来提取紫灵芝、赤灵芝子实体中的粗多糖，并且探究其抗氧化活性。

1 材料与方法

1.1 材料

采用紫灵芝和赤灵芝，均为仿野生人工栽培。

1.2 方法

1.2.1 绘制标准曲线 本次研究以葡萄糖作为标准，方法采用苯酚硫酸法[3]，绘制标准曲线。

1.2.2 多糖测定 采用超声波提取工艺[4]，料液比：1：20/1：15，提取溫度：65℃，超声次数：2次，超声时间：55min/30min，超声波提取功率为750W。然后，选用苯酚——硫酸法检测两种灵芝粗多糖得率。其算法面公式1所示：

多糖含量（%）=质量浓度*体积*稀释倍数/原材料质量*100 （1）

1.2.3 总糖、蛋白质测定 总糖采用苯酚硫酸法进行测定，根据公式2计算总糖含量：

总糖含量（%）=多糖质量浓度*体积*稀释倍数/粗多糖质量*100 （2）

蛋白质的测定：采取子实体多糖0.25g，锡箔纸包好，制作成为药片，采用杜马斯定氮仪，一级和二级燃烧管分别设置温度960℃和800℃。还原温度设置为815℃，运用TC检测器确定总氮含量，之后确定蛋白质含量，如公式3所示：

蛋白质（%）=总氮含量*6.25 （3）

1.2.4 抗氧化活性 提取子实体制作成为1-5mg/ml的5份水溶液，同时选择阳性对照。对于自由基清除能力，采用硫酸钾氰氧化，生成ABTS+，根据褪色程度判断抗氧化能力。混合7mmol/L的ABTS以及2.45mmol/L的硫酸钾，避光12h，试管中加入0.5ml多糖溶液，之后加入ABTS+，在734nm处测试吸光度，其自由基清除率如公式4所示：

[空白对照吸光度-（样品吸光度-样品本底吸光度）空白对照吸光度]×100% （4）

DPPH的自由基清除能力测试[5]，试管中加入0.6mmol/L的DPPH1.0mL以及1ml粗多糖溶液，之后用60%乙醇定容到10mL，避光30min后再517nm处测试吸光度，其自由基清除率同公式。

羟基自由基清除，在试管中加入9mmol/L的水杨酸-无水乙醇溶液，1mL的9mmol/L的硫酸铁溶液，之后加入1mL的8.8mmol/L的过氧化氢。在37℃下水浴30min，之后在510nm处测定吸光度。其自由基清除率计算如公式4。

总还原力的测定，在试管中加入粗多糖2.5mL、铁氰化钾2.5mL、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液2.5mL以及2.5mL的三氯乙酸，在5000r/min下离心处理，取5mL上清液，总还原力计算如公式5：

总还原力=样品组吸光度-样品本底吸光度 （5）

1.3 统计学处理

本次研究采用SPSS 17.0软件处理数据，计量资料采用[X—±S]表示。

2 结果分析

2.1 两种灵芝粗多糖得率比较

紫灵芝的粗多糖含量为2.2%，赤灵芝的粗多糖含量为2.8%，在总糖和蛋白质含量方面，紫灵芝和赤灵芝的含量较为接近，具体数据如表1所示。

2.2 抗氧化活性

2.2.1 ABTS自由基清除率 赤灵芝的ABTS自由基清除率均高于紫灵芝，且两种灵芝在2mg/mL的浓度下，ABTS的自由基清除率均高于50%。

2.2.2 DPPH自由基清除能力 赤灵芝的DPPH自由基清除率均低于紫灵芝，且两种灵芝在3mg/mL的浓度下，DPPH自由基清除率均高于50%。

2.2.3 羟基自由基清除能力 赤灵芝的羟基自由基清除率均高于紫灵芝，且两种灵芝在3mg/mL的浓度下，羟基自由基清除率高于60%。

2.2.4 总还原力比较 赤灵芝的总还原力高于紫灵芝，且紫芝、赤芝的抗氧化活性均与其粗多糖含量的浓度成正比。

3 结论

灵芝多糖属于灵芝的重要活性成分[6]，其具有抵抗肿瘤、抗氧化和消炎的功效，并且其可以调节人体的免疫机制[7]，其对静脉内皮细胞具有氧化损伤的保护作用，同时可以抑制细胞的凋亡[8]，因此，在对灵芝的粗多糖含量分析中，需要通过生物学提取的方式来进行验证，以便为灵芝的使用提供借鉴意义。

在本研究中，对紫灵芝和赤灵芝的粗多糖進行提取，且对其抗氧化活性进行分析。其中紫灵芝的粗多糖提取率约为2.2%左右，赤灵芝的粗多糖提取率约为2.8%左右。两种灵芝的总糖以及蛋白质含量均较为接近。在抗氧化活性方面，赤灵芝粗多糖清除羟基自由基的能力、还原能力均比紫灵芝粗多糖强，但是对于DPPH的清除能力比紫芝粗多糖稍弱，而且紫芝、赤芝的抗氧化活性均与其粗多糖含量的浓度成正比。总之，经过本文的分析，可以为不同种类灵芝的粗多糖提取提供借鉴意义。

参考文献：

[1] 王红岩，汪璐，谢鲲鹏，等.灵芝全粉的抑菌作用和抗氧化 作用[J].中国生化药物杂志，2017，（03）：52-54.

[2] 陈杰，董扬，鲁吉珂，等.3种不同产地灵芝子实体粗多糖体 外抗氧化活性比较研究[J].食品工业科技，2016，（21）：100-104.

[3] 曹正，凡军民，谢春芹，等.不同灵芝菌株功能性成分含量 及其抗氧化活性比较[J].江苏农业科学，2016，（09）：281-283.

[4] 聂健，杨水莲，莫美华，等.7种不同来源灵芝热水提物体外 抗氧化活性研究[J].安徽农业科学，2016，（18）：134-136+174.

[5] 谢丽源，彭卫红，黄忠乾，等.不同栽培基质灵芝与不同灵 芝菌 株活性差异及相关性分析[J].西南农业学报，2014， （01）：325-330.

[6] 韩小燕，刘春雨.有氧运动结合灵芝对肥胖大鼠肝脏的保 护作用[J].体育研究与教育，2014，（01）：122-124.

[7]江 海涛.灵芝、裂褶菌多糖体外抗氧化活性的实验研究[J]. 南京晓庄学院学报，2012，（03）：41-44.

[8] 翁梁，郝涤非.蛹虫草与其他天然抗氧化剂协同抗氧化作 用研究[J].安徽农业科学，2011，（30）：18503-18506.