探讨周围Th17细胞和调节性T细胞在儿童过敏性鼻炎与支气管哮喘中的失衡及临床意义

杨春梅，张念凯

青岛大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科，山东青岛 266005

研究发现，支气管哮喘、过敏性鼻炎相关发病机制全部为IgE介导产生的Ⅰ型变态反应，多表现为局部免疫应答，且均存在气道高反应性[1]。而支气管哮喘患者的气道的重塑及炎性细胞的浸润程度，均与周围T细胞亚群的表达发生紊乱存在一定相关性，其中IL-17、Th17细胞因子的过量表达可促使调节性T细胞出现功能缺陷，或是显示Treg细胞的表达水平下降，加快过敏性鼻炎进展，但临床医学针对Th17、Treg细胞失衡于支气管哮喘、过敏性鼻炎发生、发展中的意义缺乏研究报道[2-3]。基于此，该研究选取2016年8月—2017年12月青岛大学附属医院收治的120例支气管哮喘、过敏性鼻炎患儿作为观察对象，探讨周围Th17细胞和调节性T细胞在儿童过敏性鼻炎与支气管哮喘中的失衡及临床意义进行分析，为临床防治提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择青岛大学附属医院收治的120例支气管哮喘、过敏性鼻炎患儿作为观察对象，该研究病例均经医院伦理委员会审核通过。其中支气管哮喘组（BA组）40 例，男 23 例、女 17 例，年龄 5～10 岁，平均（8.0±0.5）岁；单纯性过敏性鼻炎组（AR组）40例，男22例、女 18 例，年龄 4～12 岁，平均（7.9±0.4）岁；支气管哮喘合并过敏性鼻炎组（BA+AR组）40例，男24例、女16例，年龄 5～11 岁，平均（7.8±0.6）岁。入选标准：所有入选患儿均经临床检查确诊为支气管哮喘、过敏性鼻炎；无严重的心、肾、肝等脏器功能疾病；研究前7 d未接受支气管药物治疗。3组患儿的基本临床资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05），存在可比性。所有儿童及其家长对该研究均知情，并签署相关同意书。

1.2 方法

所有儿童均于入院当日早晨空腹状态下抽取4 mL肘静脉血，应用负压真空EP管（经肝素钠抗凝）进行血液标本采集，标本于4 h内处理完，取全血放在流式细胞仪上实施分析；将剩余的全血经300 G/min离心操作10 min，后对上层血浆进行留取，开展血浆细胞因子测定；并对沉淀部位开展PBMC分离，后将获取的所有标本放在-80℃冰箱内保存，待测。①外周血内CD4+/Th17+细胞及CD4+/TFoxp3+细胞的表达水平用流式细胞技术测定，后用EXPRO32 ADC软件分析检测结果。②肺功能检测：选择肺功能检测仪对第1秒用力呼吸容积比值（FEV1%）进行检测，正常值是≥83.0%。③血浆炎症因子：选择酶联免疫吸附法对血浆 IL-6、免疫球蛋白 E（IgE）、IL-17、IL-10、转化生长因子 β1（TGF-β1）、IL-23 表达水平进行检测，并对450 nm处OD值进行检测，设置空白对照组。所有操作均严格参照说明书执行。

1.3 观察指标

观察并对比儿童的外周血Th17细胞 （用CD4+/Th17+细胞代表）、Treg细胞（用CD4+/TFoxp3+细胞代表）、FEV1%、IgE、TGF-β1、IL-23 表达水平； 探讨BA+AR 组患儿的 FEV1%、IgE 和 Th17、Treg、TGF-β1相关性；将r≥0.3视作存在相关性，且r值越大代表相关性越显著。

1.4 统计方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计数资料以百分数和例数表示，采用χ2检验；计量资料采用（±s）表示，采用 t检验；P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 外周血Th17细胞及Treg细胞表达水平

BA+AR组高于BA组、AR组，差异有统计学意义（P＜0.05）；BA+AR 组低于 BA 组、AR 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 3组儿童的外周血Th17细胞及Treg细胞表达水平对比[（±s），%]

表1 3组儿童的外周血Th17细胞及Treg细胞表达水平对比[（±s），%]

注：与 BA+AR 组对比，bP＜0.05。

组别 Th17细胞 Treg细胞BA 组（n=40）AR 组（n=40）BA+AR 组（n=40）（7.9±1.3）b（7.7±1.2）b 15.6±2.0（2.1±1.2）b（2.1±1.4）b 1.0±0.2

2.2 FEV1%与血 IgE、TGF-β1表达水平

BA+AR组低于 BA组、AR组，BA组低于 AR组，差异有统计学意义（P＜0.05）；BA+AR 组高于 BA组、AR组，BA组高于AR组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表2。

表2 3组儿童的FEV1%与血IgE、TGF-β1表达水平对比（±s）

表2 3组儿童的FEV1%与血IgE、TGF-β1表达水平对比（±s）

注：与 BA+AR 组对比，bP＜0.05；与 AR 组对比，cP＜0.05。

组别 FEV1%（%） IgE（IU/mL） TGF-β1（pg/mL）BA 组（n=40）AR 组（n=40）BA+AR 组（n=40）（88.5±1.4）bc（91.3±1.7）b 80.9±5.7（201.4±55.3）bc（137.4±53.9）b 271.4±43.3（368.4±57.2）bc（401.7±55.9）b 221.3±28.5

2.3 相关性分析

BA+AR组患儿的血浆IgE水平和Th17、IL-17的表达水平显示为正性相关，和Treg、TGF-β1的表达水平显示为负性相关；而FEV1%水平和Th17、IL-17的表达水平显示为负性相关，和Treg、TGF-β1的表达水平显示为正性相关。见表3。

表3 BA+AR 组患儿的血浆 IgE、FEV1%和Th17、Treg、IL-17、TGF-β1相关性分析

3 讨论

研究发现，BA、AR的相关发病机制主要为IgE介导引起的Ⅰ型变态反应，有关病理变化表现为变应原刺激机体后释放的各种免疫活性细胞不断参与疾病发生、发展过程，并在出现Ⅰ型变态反应条件下，血液内IgE因子能发挥结合嗜酸性粒细胞及肥大细胞的免疫功能，且直接由免疫根源对过敏生物链进行抑制，进而对免疫T细胞造成直击，让免疫T细胞的相关调控功能不断增强，故通过检测外周血显示IgE过高表达，说明机体可能伴有过敏性疾病[4-5]。

研究显示，于BA、AR患儿发病情况下，患儿的肺功能存在显著受损，通过肺功能检测仪实施检测能显示FEV1%水平降低；相关研究发现对TGF-β1水平进行动态检测能帮助临床医学早期诊断、治疗支气管哮喘，因TGF-β1对间质细胞增殖及转化、分化具有促进作用，使血管生成加快，引起细胞外相关基质合成，并于肺纤维化的不断变性过程中激活TGF-β1，为病程进展的重要标志点[6-7]。随着临床医学的深入研究：Th1/Th2细胞的水平失衡难以对哮喘具体病因进行完整解释，而Th17、调节性T细胞作为Th1、Th2细胞的2个亚群，其中Th17细胞和其相关效应性细胞因子IL-17，于慢性炎症及自身免疫性疾病的发展中过程中发挥促炎作用，同时Th17细胞释放的炎性细胞因子，如 IL-6、IL-10、IL-17及 IL-23等，于集体动员及募集、活化中性粒细胞等有关方面发挥重要作用；而调节性T细胞能发挥重要的维持机体免疫稳态、抑制炎症作用，和哮喘呼吸道炎症存在密切相关性[8-9]。目前，越来越多研究显示支气管哮喘发病发与Th17/Treg细胞的失衡存在相关性，其能对存在哮喘性疾病患儿的气道炎症反应造成影响，但针对BA合并AR患儿发病中有无Th17/Treg细胞失衡存在缺乏报道。该研究结果显示，BA+AR组周围血Th17细胞水平（15.6±2.0）%，高于 BA 组（7.9±1.）%、AR 组（7.7±1.2）%，Treg细胞水平为（1.0±0.2）%，低于 BA 组（2.1±1.2）%、AR 组（2.1±1.4）%；提示 BA 合并 AR 患儿伴有Th17/Treg细胞失衡，Th17、Treg细胞参与疾病的发展，能作为治疗的新靶点。这与相关学者[10]研究结果中AR+BA组Th17水平 （15.56±1.98）%， 高于BA组（7.89±1.44）%、AR 组（7.68±1.40）%具有相似性。 该研究发现，BA+AR组的 TGF-β1、FEV1%水平低于BA组、AR组；故BA+AR组患儿的外周血 IgE、FEV1%、TGF-β1表达水平和BA组、AR组存在明显差异；分析可能和Th17/Treg细胞失衡存在相关性。同时，BA+AR组患儿的血浆IgE水平和Th17的水平显示为正性相关，和Treg、TGF-β1的水平显示为负性相关；而FEV1%水平和Th17水平显示为负性相关，和Treg、TGF-β1的水平显示为正性相关；说明BA合并AR患儿伴有Th17/Treg细胞失衡，表达水平和FEV1%、IgE存在相关性，能为临床诊治提供参考。

综上所述，儿童过敏性鼻炎与支气管哮喘的周围Th17细胞和调节性T细胞存在失衡情况，其表达水平和IgE、FEV1%具有一定相关性，及时检测IgE、FEV1%及Th17/Treg细胞水平，能为临床诊治提供信息。