TNF—α启动子基因多态性与子痫前期的相关分析

刘影林　龙峰　周璐　何云　黄燕　洪小苹

【摘要】 目的：研究腫瘤坏死因子α（TNF-α）启动子基因多态性与子痫前期的关系。方法：选取本院2014年9月-2017年9月期间收治的子痫前期患者156例作为研究组，另选取同期来本院产检无并发症的正常妊娠孕妇150例作为对照组，对两组研究对象进行TNF-α启动子基因检测，分析TNF-α启动子基因多态性与子痫前期的关系。结果：重度子痫前期患者血清TNF-α表达水平为（3.96±0.78）pg/mL

明显高于轻度子痫前期的（3.22±0.71）pg/mL；轻度子痫前期患者血清TNF-α表达水平明显高于对照组的（2.43±0.64）pg/mL，差异均有统计学意义（P<0.05）。研究组TNF-α-238启动子基因型分布情况与对照组对比，差异均无统计学意（P>0.05）；研究组TNF-α-308启动子GA和AA基因型分布率均明显高于对照组，GG基因型分布率明显低于照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。GG、GA+AA基因型在不同程度子痫前期患者中对比，差异均无统计学意义（P>0.05）。GA+AA基因型患者血清TNF-α表达水平为（4.31±0.46）pg/mL，明显高于GG基因型的（3.25±0.63）pg/mL，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：TNF-α-308启动子基因多态性可影响细胞因子的表达水平，可能参与了子痫前期的发病过程。

【关键词】 TNF-α； 基因多态性； 子痫前期； 相关性

【Abstract】 Objective：To study the correlation of tumor necrosis factor α （TNF-α） promoter gene polymorphism and pre-eclampsia. Method：A total of 156 patients with pre-eclampsia treated from September 2014 to September 2017 in our hospital were selected as the study group. In addition，150 normal pregnant women without complications at the same period were selected as the control group.The TNF-α promoter gene was detected in two groups，and the relationship between TNF-α promoter polymorphism and pre-eclampsia was analyzed.

Result：The level of serum TNF-α expression in patients with severe pre-eclampsia was （3.96±0.78）pg/mL，which was significantly higher than （3.22±0.71）pg/mL in mild pre-eclampsia；the level of serum TNF-α expression in the patients with mild pre-eclampsia was significantly higher than （2.43±0.64）pg/mL in the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The TNF-α-238 promoter gene distribution rate in the study group was not significantly different from that in the control group （P>0.05）.The TNF-α-308 promoter GG and AA genotypes distribution rates in the study group were significantly higher than that in the control group；the GA genotype distribution rate was significantly lower than that in the control group，the differences were statistically significant （P<0.05）.There were no significant differences in GG，GA+AA genotype distribution rates in patients with different degree of pre-eclampsia（P>0.05）.The level of serum TNF-α expression in patients with GA+AA genotypes were （4.31±0.46）pg/mL，which was significantly higher than （3.25±0.63）pg/mL in patients with GG genotype，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：The TNFα-308 promoter gene polymorphism will affect the level of cell factor expression and be involved into the genesis process of pre-eclampsia.

【Key words】 TNF-α； Gene polymorphism； Pre-eclampsia； Correlation

First-authors address：Shenzhen Maternity and Child Healthcare Hospital Affiliated to Southern Medical University，Shenzhen 518028，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.22.006

子痫前期（Pre-eclampsia，PE）是妊娠期特有的一种病症，属于妊娠期高血压范畴，据报道PE的发病率为5%～10%，主要表现为妊娠期间一过性蛋白尿、高血压、水肿等症状，妊娠终止后症状随之消失，PE可引起严重的母胎并发症，也是造成孕妇、围产儿死亡的重要原因[1-3]。隨着近年来对子痫前期的不断深入研究，虽然对子痫前期的发病机制尚未完全明确，但部分学者提出一些病因学说，如胎盘缺血缺氧学说、免疫学说、遗传学说以及氧化应激学说等，从不同角度试图去解释子痫前期的发病原理[4]。目前认为子痫前期的发病机制极其复杂，是多种因素共同作用的结果，但遗传因素是子痫前期发病的主要因素[5]。肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种炎性因子，目前认为TNF-α启动子基因多态性及其编码的蛋白表达水平与机体自身免疫遗传疾病具有密切关系，参与了疾病的发生和发展[6]。多数学者认为TNF-α启动子基因与子痫前期的发生和发展具有密切关系[7]。该研究对本院子痫前期患者进行研究，对比无并发症正常孕妇，观察TNF-α启动子基因多态性与子痫前期的关系，进一步为临床治疗子痫前期提供理论依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2014年9月-2017年9月期间收治的子痫前期患者156例作为研究组。纳入标准：（1）经检查和诊断均符合子痫前期诊断标准[8]；（2）均自愿参加本次研究并签署知情同意书；（3）年龄20～40岁的育龄产妇；（4）均为初婚初孕的单胎产妇。排除标准：（1）合并其他妊娠疾病影响研究；（2）不愿参加研究；（3）有输血史；（4）少数民族。另选取同期来本院产检无并发症的正常妊娠孕妇150例作为对照组。该研究已经本院医学伦理委员会批准通过。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 研究中的血液样本是在孕妇孕晩期（妊娠第28～40周）产检时所采集，抽取研究对象外周血4 mL。其中2 mL注入干燥管，室温下放置20 min后采用离心机旋转离心（3 000 r/min），

10 min后取上层血清置入-80 ℃的冰箱中备用。剩余2 mL血液注入EDTA抗凝管，放置于-80 ℃冰箱中备用。

1.2.2 检测方法 （1）TNF-α-238、TNF-α-308位点基因多态性检测：采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性分析法分析TNFα启动子基因多态性。TNF-α-238上游引物：5-CAAACACAGGCCTCAGGA-3；下游引物：5-GGGCGGGGAAAGAATCATTC-3；扩增产物长度456 bp，限制性内切酶为BamH I。TNFα-308上游引物：5-AGGCAATAGGTTTTGAGGGCCAT-3；下游引物：5-TCCTCCCTGCTCCGATTCCG-3；扩增产物长度107 bp，限制性内切酶为Ncol I。

（2）TNF-α血清表达水平检测：采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测研究对象TNF-α血清表达水平，采用由北京博迈杰科技有限公司提供的试剂盒及相关试剂，严格按试剂盒操作说明书进行操作。

1.3 观察指标 观察两组血清TNF-α表达水平，分析不同程度子痫前期患者血清TNF-α表达水平情况。观察两组TNF-α启动子基因多态性情况，分析不同程度子痫前期患者TNF-α启动子基因多态性情况，探讨TNF-α启动子基因多态性与子痫前期的关系。

1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0软件，对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验；采用Pearson相关性分析计算相关性，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的基线资料对比 研究组年龄21～38岁，平均（28.4±4.2）岁；疾病程度：轻度子痫前期72例，重度子痫前期84例。对照组年龄20～38岁，平均（28.2±4.1）岁。两组患者年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 不同程度子痫前期患者血清TNF-α表达水平对比 重度子痫前期患者血清TNF-α表达水平为（3.96±0.78）pg/mL，明显高于轻度子痫前期的（3.22±0.71）pg/mL；轻度子痫前期患者血清TNF-α表达水平明显高于对照组的（2.43±0.64）pg/mL，差异均有统计学意义（P<0.05）。

2.3 两组TNF-α启动子基因型分布情况对比 研究组TNF-α-238启动子基因型分布情况与对照组对比，差异均无统计学意（P>0.05）；研究组TNF-α-308启动子GA和AA基因型分布率均明显高于对照组，GG基因型分布率明显低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.4 不同程度子痫前期患者TNF-α-308基因型分布情况对比 GG、GA+AA基因型在不同程度子痫前期患者中对比，差异均无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.5 不同基因型子痫前期患者血清TNF-α表达水平对比 GA+AA基因型患者血清TNF-α表达水平为（4.31±0.46）pg/mL，明显高于GG基因型的（3.25±0.63）pg/mL，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

子痫前期是妇产科较为常见的疾病，发生于妊娠期的特殊疾病之一，个体的遗传、免疫因素决定着疾病的发生和发展[9]。目前子痫前期具有家族遗传倾向已经得到临床专家学者的认可。随着免疫学和遗传学的不断发展进步，目前对子痫前期疾病的探索已经发展至基因层次，为探讨子痫前期遗传、免疫学的发病机制提供了新的思路和方案，通过对基因多态性和免疫学关系的研究，可使笔者从基因水平上认识子痫前期的发病机制，为治疗子痫前期提供新的依据[10-11]。人类TNF-α基因在第六号染色体的短臂上（6p21.3），人类白细胞抗原（HLA）Ⅲ区域内，与HLA基因连锁。在TNF-α启动子区域存在高度多态性，目前多数研究发现TNF-α启动子-308位点基因多态性与多种免疫疾病有密切关系[12-13]。如系统性红斑狼疮、乙型肝炎、Gracess眼病、再生障碍性贫血等。研究还发现，TNF-α-308A是免疫性疾病的易感基因，而TNF-α-308G则是免疫性疾病的保护基因。

TNF-α-238、TNF-α-308位点存在3种基因型，包括GG、GA以及AA。该研究对本院子痫前期患者进行研究，发现子痫前期患者以及正常孕妇均存在3种基因型的表达。两组研究对象TNF-α-238位点基因型分布频率对比，差异无统计学意义（P>0.05），提示TNF-α-238位点基因对子痫前期的发生无明显影响。研究组患者TNF-α-308GA和AA型的分布频率均明显高于正常对照组，而研究组TNF-α-308GG型的分布频率明显低于正常对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），结果表明TNF-α-308GA和AA阳性者的子痫前期发病率明显较高，而TNF-α-308GG阳性者的子痫前期发病率明显降低。提示TNF-α-308GA和AA可能是子痫前期的易感基因，而TNF-α-308GG可能是子痫前期的保护基因。上述研究结果提示TNF-α-308位点基因与子痫前期的发生发展具有一定关系，可能机制为：（1）TNF-α-308位点存在于人第六号染色体短臂上，在HLA Ⅲ类基因内，TNF-α-308A与DRB1*0301存在连锁不平衡[14-15]。（2）TNF-α自身基因多态性可能会影响细胞因子的表达，使TNF-α水平升高，增加滋养细胞的凋亡，对内皮细胞产生毒素，使内皮细胞损伤，凝血因子释放，引起子痫前期的发生[16]。在本文中还对不同程度的子痫前期患者进行对比，分析不同程度子痫前期患者TNF-α-308基因型分布频率情况，结果显示，TNF-α-308GA+AA和TNF-α-308GG基因型分布频率在轻度子痫前期和重度子痫前期患者中对比，差异均无统计学意义（P>0.05），提示TNF-α-308GA+AA和TNF-α-308GG仅与子痫前期的发生有关，与子痫前期的发展并无关系。子痫前期是由于各种因素综合作用的结果，除了遗传因素最为重要以外，还包括免疫、血管内皮损伤、营养等因素[17]。遗传因素在子痫前期的发展中起到根本性作用，但子痫前期病情的严重程度却受到多种因素的影响，决定性因素尚未明确，需要进一步深入研究[18]。

在个体中细胞因子的功能是由基因所决定的，而细胞因子在不同个体中的差异性是由细胞因子调节区多态性所决定[19]。在本文研究中，TNF-α-308位点基因（GA+AA）型的表达水平明显高于GG型表达水平，可见TNFα-308位点基因编码的细胞因子与TNF-α的血清表达水平有关。TNF-α-308多态性与血清学表达的机制尚未完全明确，但可能与下列原因有关：（1）TNF-α基因型与HLA Ⅲ区域位点连锁，HLA多态性突变会影响TNF-α的分泌[20]。（2）TNF-α在转录后表达，受到多态性的调控，从而改变DNA二级结构，影响转录因子的结合[21]。在本研究中，重度子痫前期患者TNF-α表达水平明显高于轻度子痫前期的TNF-α水平，提示TNF-α表达水平与子痫前期的发展有密切关系。可能是由于TNF-α是子痫前期发病过程中的重要因子，病情越严重，对免疫功能损伤越严重，伴有免疫反应，导致TNF-α水平增加[22]。

综上所述，TNF-α-308启动子基因多态性可影响细胞因子的表达水平，可能参与了子痫前期的发病过程。

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（收稿日期：2018-04-19） （本文编辑：李莹莹）