生化仪两种时间模式下所测同一项目结果的对比观察

王成河

（江苏省宜兴市东山东路宜兴市肿瘤医院检验科 江苏 宜兴 214200）

日常工作中，发现部分终点法项目在反应到达终点时，仪器的检测效率尚有提升的空间。通过调整项目时间模式以缩短分析流程时间，力求在保障结果可靠的前提下，更好地发挥仪器的检测效率。为此，根据美国“用病人样本进行方法学比较和偏差评估”指南文件EP9-A2方案[1]，选用氧化法测定的TBIL为对象，分别设置两种不同的时间模式、不同的读点，平行测定同一组标本，以评价两法可比性及偏倚，观察两种方法是否均能达到终点。

1.材料和方法

1.1 样品

收集2018年7月21日—2018年7月26日的本院患者血清，包括正常值和异常值标本，标本要求新鲜、无溶血脂血。

1.2 仪器和试剂

日立7180生化仪。TBIL试剂：北京利德曼公司，Lot705121E。TBIL校准液：北京利德曼公司，Lot709041I。质控血清：RANDOX公司，正常值批号：1131UN；异常值批号：746UE。

1.3 实验方法

1.3.1 现有TBIL测试为基本方法，项目命名TB-1；新增TBIL测试的对比方法，项目命名TB-2。两法均使用相同试剂、相同校准液，同时校准。

TB-1参数依据试剂说明书设置，其中，读点16/34，时间模式10min。TB-1分析大致流程：标本与R1孵育5min，第16、17点间加入R2，反应5min，第34点流程结束。TB-2参数设置：读点设为5/17，时间模式5min，其余参数同TB-1；TB-2分析大致流程：标本与R1孵育1.5min，第5、6点间加入R2，反应3.5min，第17点流程结束。

1.3.2 标本测定 线性范围内，随机挑选48份包含高、中、低TBIL浓度样本，TB-1和TB-2平行进行测定，每天测定8份样本及2个水平质控品，第3位和第9位插入正常-异常2个水平质控品，按顺序1、2、3 …… 10测定一次，再按反序10、9、8 ……1复测一次，观察质控结果，纠正测试。测定6d，双份测定均值作为1个结果，共48个结果。记录每一测试最后两点吸光度差值及吸光度最大变化量（对于TB-1：差值=A34-A33，对于TB-2：差值=A17-A16。最大变化量=A34-A16）。

1.4 数据处理

1.4.1 离群值检验 共分为2种情况，即方法内离群值检验和方法间离群值检验。

1.4.2 相关性试验 以TB-1每样本双份均值为X轴、TB-2双份均值为Y轴，用Excel绘制相关性散点图，计算相关系数R及回归方程。

1.4.3 相对偏倚分析 以TB-1每样本双份均值为X轴、以同一标本的TB-2均值与TB-1均值之差除以TB-1均值所得相对偏倚为Y轴，用Excel作散点图。

1.4.4 两组结果的差异性比较、反应完成情况的观察 采用配对t检验，使用SPSS16.0统计学软件处理。

2.结果

2.1 两法的相关性比对及相对偏倚分析。

2.1.1 离群值检验：所有48个标本结果均未发现离群点，符合EP9-A文件要求，可以进行后续试验。

2.1.2 相关性散点图，见图1。

图1 TB-1和TB-2双份均值相关性散点图

通过计算，相关系数R=0.9968。EP9-A2要求R≥0.975，说明两方法的测定范围合适。回归方程y=0.9465x+5.3132，数据点拟合程度R2=0.9937。

2.1.3 相对偏倚散点图，见图2。

图2 TB-2对TB-1的相对偏倚散点图

可看出，线性范围内散点图分布正常，绝大多数点在-0.05～0.05间波动，最大相对偏倚为6.1%。

2.2 两组结果间的差异性比较、每一测试反应完成情况的对比观察

以TB-1组48个结果为参照，TB-2组48个结果与之比较，经配对t检验，组间无显著性差异（P＞0.05）。两组所有测试最后两点吸光度差值均在±5以内；两组反应剩余比率（即最后两点吸光度差值占最大吸光度变化量的百分比）均在-0.1058%～0.1011%之间波动。

3.结论

两组所有反应均已达到终点，经配对t检验，两组结果无统计学差异。因此，两法所测结果同样可靠，但对比方法耗时更少，检测效率更高。

4.讨论

本研究对本实验室TBIL的基本方法与对比方法进行了分析，EP9-A文件要求最终的有效标本数40～100个，且至少一半的结果位于参考范围以外，不能包含离群值，若离群值≥2时，应终止实验，问题排查后，重新实验[2]。当相关系数R＜0.975或R2＜0.95时提示样本量过少，应追加样本数，本实验数据均满足要求。