孕妇O型血中抗A、抗B效价检测的方法学研究

朱文刚

(阜阳市人民医院南区 输血科，安徽 阜阳236011)

人类血型至今已知有36种，ABO血型系统在临床输血及致新生儿溶血病实验中意义最为重要，其中孕妇为O型，不规则抗体阴性，配偶为非O型常常需要检测抗A、B效价，因为孕妇体内抗A、B IgG型抗体效价过高(大于256)会通过胎盘屏障与胎儿(非O型)红细胞结合、致敏而发生新生儿溶血病[1，2]。因此，常通过检测孕妇血浆中抗A、B效价来评估新生儿溶血病发生的可能性[3]。目前用2-Me处理标本常达不到实验要求，为了更好地检测抗体效价的真实水平和提高检出率，我们利用IgM冷凝集的特性，在4℃用标准A、B红细胞吸附O型孕妇血浆中的IgM抗体与2-Me处理样本进行比较，并统计分析两者的检出率。

1 材料与方法

1.1研究对象收集2014年12月-2017年5月门诊孕检孕妇O型全血样本842份，中位年龄 28 岁(17-45)岁。

1.2主要试剂与仪器微柱凝胶抗人球蛋白卡、微柱凝胶蛋白卡专用离心机(长春博讯生物技术有限公司)，标准A、B红细胞、抗筛谱细胞、2-Me(上海血液生物医药有限责任公司)，离心机(武汉贝索生物有限公司)，S.HH.W型数字显示式恒温水温箱(上海东荣丰科学仪器有限公司)。

1.3用微柱凝胶抗人球蛋白卡进行检测操作步骤

1.3.12-Me处理血浆 将2-Me与被检测血浆各400 μl按1∶1比例加入标记的试管中，在37℃下温育30 min处理，用生理盐水按照1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024、1∶2048倍比稀释，将稀释好的各管分别按顺序加入对应标记的抗人球蛋白卡中，最后将A、B红细胞悬液(0.8-1.0)%加入对应的抗人球蛋白卡中，温育15 min，离心5 min，观察、记录结果。

1.3.24℃红细胞吸附处理血浆 分别取标本血浆400 μl置于标记“A”“B”2支试管中，并置于4℃温箱中1 h，将(3.0-5.0)%A、B红细胞悬液，并置于4℃温箱中1 h，将红细胞悬液各400 μl分别加入相应的加入血清的标记试管中，3 000转/min，离心15 s，取上清液400微升加入第二管，观察凝集强度。依次处理到第十管(1∶2048)，其间每管观察结果，直至无肉眼可见的凝集。最后用抗人球蛋白卡检测，观察结果。

1.3.3分别取标本血浆400 μl置于标记“A”“B”2支试管中，并置于37℃温箱中1 h，将(3.0-5.0)%A、B红细胞悬液，并置于37℃温箱中1 h，将标准红细胞悬液各400 μl分别加入相应的加入血清的标记试管中，3000转/min，离心15 s，取上清液400 μl加入第二管，观察凝集强度。依次处理到第十管(1∶2048)，其间每管观察结果，直至无肉眼可见的凝集。最后用抗人球蛋白卡检测，观察结果。

1.3.4结果判定 以一个加号(+)作为判断终点，以稀释倍数的倒数作为最终数值。

1.4统计方法采用Graphpad Prism5统计软件，率的检验用χ2检验，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1孕检门诊842例样本中经2-Me处理符合检测标准的595例，用4℃红细胞吸附方法处理后亦可检出相应的抗A，B效价，247例不符合实验要求的标本用4℃红细胞吸附方法处理，效价检测结果全部高于参考值(256)，所以这类标本IgG抗体效价高于参考值(>256)。

2.2本研究比较了2-Me破坏IgM与4℃ A，B红细胞吸附IgM在不同效价组别的检出率，效价在≥32以上两种方法的检出率存在明显差异(表1)。

2.3本研究2-Me处理样本和4℃吸附处理样本对比 若以2-Me处理标本组的256做为参考值，4℃吸附处理标本组可以128做为参考值；或仍以2-Me处理标本组的256做为参考值，用4℃吸附处理标本，相应结果增加相应效价组别稀释梯度(表2)。

3 讨论

近年来，随着人们对健康及优生优育的意识不断加强，产科门诊孕妇数量不断增加。对于孕妇血型为O(不规则抗体阴性)配偶非O型，产科门诊要求检测抗A、B效价以评估孕妇体内抗体IgG水平，从而间接预测ABO血型系统致新生儿溶血病的可能性[4，5]，但是往往由于IgM的存在干扰检测结果，不能反映孕妇血清中抗A、B效价[6]，在临床中经常需要对于效价过高或效价逐渐增高的孕妇在孕期内进行干预，从而预防或减少新生儿溶血病的发生[7]。

表1 不同方法处理样本在不同效价组别的检出率比较

表2 4℃吸附处理样本较2-Me增加的稀释梯度数

目前检测IgG抗A、抗B效价时，通常用2-Me灭活IgM抗体，在实际实验过程中，2-Me灭活IgM抗体时一部分标本无法达到实验要求且2-Me对人体有危害、污染环境[8，9]。近期研究发现在4℃或37℃条件下，用标准A(B)红细胞(3.0%-5.0%)吸附血浆中的IgM可达到实验目的，但在37℃红细胞吸附过程中，由于温抗体效应，不仅吸收了IgM抗体，也吸附了IgG抗体，所以37℃处理标本对IgG类型抗体影响较大[10]。我们结果显示若以2-Me处理标本的效价256做为参考值，通过对比4℃用标准红细胞处理标本参考值可为128；或仍以256做为参考值，相应的组别增加相应的稀释梯度。

我们对2-Me处理后达不到实验要求的样本用4℃红细胞悬液吸附处理后IgG效价仍高于参考值(256)，说明这一类标本中不仅IgM含量高，IgG抗体含量也高，因此2-Me处理后样本IgG效价检测结果容易出现假阴性，而在4℃通过A、B红细胞(3.0%-5.0%)吸附可明显提高检测阳性率，可更好地反映孕妇血清中IgG效价的真实水平，以减少新生儿溶血症的发生。