遂宁市种猪场伪狂犬病的监测及净化

尹念春 ，李春 ，鲁志平 ，黄平全 ，钟飞 ，谭春青

（1.四川省遂宁市农业局，四川 遂宁 629000；2.四川省动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041；3.成都农业科技职业学院，四川 温江 611130；4.四川省蓬溪县畜牧食品局，四川 蓬溪 629100）

猪伪狂犬病（PR）是由猪伪狂犬病毒（PRV）引起的一种高度接触性传染病，是危害全球养猪业的重大传染病之一。成年猪多呈隐性感染，通常引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎，产弱仔，新生仔猪伴有呕吐、腹泻及震颤等神经症状，15日龄内的仔猪死亡率高达100%[1-2]。为了有效控制PR流行，特别是从源头控制PR，我们在前期PR流行病学调查研究的基础上，在遂宁地区选择7个规模化种猪场开展PR免疫净化试验。

1 材料

1.1 仪器 扁桃体活体采样器；10 mL一次性采血管；美国Bio-Rad iMarkerTM酶标仪；德国Eppendorf微量移液器；凯达TDZ4-WS和TGL20MB低速、高速冷冻离心机；美国BIO-RAD T100 PCR仪，美国BIO-RAD SUB-CELL电泳仪，美国BIO-RAD GEL DOC EZ凝胶成像系统。

1.2 试剂盒 武汉科前PRV抗体检测试剂盒；北京世纪元亨PRV PCR检测试剂盒。

2 方法

2.1 现场调查 在遂宁地区选择7个规模化种猪场，重点调查猪场规模、猪场基础设施建设（动物防疫条件）、饲养管理、防疫制度建设、防疫措施落实情况，重点了解本场后备种猪的健康状况等。

2.2 采样 采集已免疫PR疫苗3周的仔猪（对应于检测中的生产母猪）的血清和扁桃体，检测PR病原及免疫抗体水平；全群采集免疫后的种公猪和后备母猪的血清和扁桃体，检测PR病原及免疫抗体水平，每半年采集一次，全群连续检测3次；空怀期生产母猪在免疫后分三期全群采样检测PR抗原及免疫抗体水平，优先选择有过产死胎、弱胎或仔猪成活率低的母猪进行采样检测。先后在7个种猪场累计采集血清样品7126份，扁桃体样品5176份，应用ELISA试剂盒检测3批（次），应用PCR检测组织样品3批（次）。

2.3 实验室检测

2.3.1 PRV抗体检测 按照武汉科前PRV抗体检测试剂盒说明书操作。

2.3.2 PRV病原检测 按照北京世纪元亨PRV PCR试剂盒说明书操作，提取DNA，配制PCR反应液，电泳后观察结果。

2.4 制定净化方案 按照前期调查及实验室检测结果，综合评价猪场PR流行的影响因素及流行强度，制定科学的净化方案。

3 结果

3.1 猪场基本情况 所选7个规模化种猪场的养殖规模适中（母猪存栏小于1000头），猪场建设符合动物防疫法规定要求，饲养管理和防疫制度运行较规范，后备种猪健康状况良好（表1）。

表1 猪场基本情况表

3.2 净化期间的检测

3.2.1 PRV抗体ELISA检测结果 结果显示：经过一年半的免疫程序调整和加强免疫，7个种猪场的PR抗体平均合格率为90.48%。其中，种公猪和生产母猪的抗体水平明显高于仔猪和后备母猪（表2）。

3.2.2 PRV病原PCR检测结果 结果显示：经过一年半的检测净化，共淘汰感染带毒猪105头，7个种猪场4个猪群的PRV平均感染率由净化实施前的3.8%（67/1 762） 逐渐降到 1.38%（27/1 952）、0.75%（11/1462）；种公猪、后备母猪、仔猪的感染率由净化实施前的 0.46%（1/219）、5.14%（18/350）、30%（15/50）逐渐降低到0（表3）；仔猪成活率由71.14%提高到92.43%。

表3 伪狂犬病病原PCR检测结果

3.3 净化方案的制定

3.3.1 完善生物安全措施 制定自繁自养、全进全出的养殖模式，严防疫病传入。制定猪场参考消毒程序，通过对MIC/MBC值的测定选择最适合的消毒剂，比较紫外灯和超声波雾化对空气消毒的差异性。

3.3.2 规范调整免疫程序 仔猪1～3日龄滴鼻免疫；后备母猪在145日龄和186日龄免疫；经产母猪和种公猪每季度（2月、5月、8月、11月）免疫一次。采用PRV gE基因缺失弱毒疫苗按照使用说明进行全群免疫，以达到有效控制伪狂犬病的目的。其他主要动物疫病如口蹄疫、猪瘟、圆环病毒、蓝耳病的免疫均按照常规进行。

3.3.3 示范场PR病毒和血清的流行病学调查 生产母猪免疫抗体阳性率如低于15%，则一次性全部淘汰；如出现疑似病例，则淘汰病原学检测阳性个体。PR抗体不合格的猪应及时补免，经多次免疫仍不合格的予以淘汰。后备母猪抗体检测呈阳性、病原学检测呈阴性方可混群饲养；新引进种猪应先隔离观察并检测PR抗体和病原，对于病原检测阳性猪予以淘汰。

3.3.4 建立无伪狂犬病阶段 通过以上措施不断地净化猪群，从源头切断病毒的传播途径，后期连续两年跟踪调查无临床病例出现，群体免疫抗体合格率均大于90%，即表明已有效控制PR，成功建立无伪狂犬病阶段。

4 分析与讨论

4.1 规模化养殖中，对免疫抑制性疾病的控制是稳定养殖生产的关键因素。常年来，受免疫抑制性因素的影响，PRV、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒（PCV-2）及霉菌毒素等对猪的免疫系统造成了严重损害，从而导致免疫失败[3]。疫苗免疫失败、引种不当和生产管理不当是引起PRV暴发的主要原因[4]，且生产母猪、后备母猪和仔猪群的无症状持续感染带毒现象明显。通过严格的检测净化，能有效提高群体免疫抗体水平和仔猪的存活率。PRV可通过消化道和呼吸道水平传播，也可通过交配、精液、胎盘垂直传播。被PRV感染的规模猪场中，尤其是耐过的呈隐性感染的成年猪是PRV的主要传染源[5]。通过胎盘传播给胎儿时，由于母猪免疫球蛋白不能通过胎盘屏障，所以，病毒对胎儿的感染是致命的。一旦规模猪场被PRV感染，这种水平传播和垂直传播就会导致猪场PRV感染的恶性循环。目前，对PRV尚无有效治疗药物，采用疫苗免疫和净化淘汰带毒猪群是预防和控制该病的根本措施[6-7]。因此，规模猪场开展PR净化势在必行，尤其是对种猪群的净化。

4.2 扁桃体是猪感染PRV后含毒量最多的器官之一，也是检测最稳定的器官之一[8]。娄高明等[9-10]证明，用PCR方法检测PR的敏感性明显高于病毒分离和ELISA方法。因此，本试验采集活体扁桃体样品进行PCR检测，以准确诊断与净化PRV。

4.3 本试验首先全群逐头采集试验场的种公猪和混群前后备母猪的扁桃体和血清，进行PRV筛查，防止配种时交叉感染；其次，对表现出临床症状的个体进行采样检测，以提高检出率，加快净化进程。经过一年半对7个种猪场4个猪群定期开展PRV血清学和病原学检测，结合严格的生物安全措施，共淘汰病原检测阳性猪105头，种公猪和后备母猪的病原阳性率由0.46%、5.14%降到0，仔猪成活率由净化前的71.14%提高到92.43%，有效控制了种猪的带毒感染，达到了净化要求，为后期申请净化评估、建立非免疫净化场奠定了基础。