婴儿血液、尿液和产妇母乳巨细胞病毒DNA检测结果的相关性*

张效本，田 葱，赵雪丽，原慧芳

(河南省开封市医学科学研究所 475000)

人巨细胞病毒(HCMV)属疱疹病毒科，为双链DNA病毒，是引起围产儿感染最常见的病毒[1]。HCMV可侵袭多个器官、系统而产生严重疾病[2]。免疫机制发育不成熟的新生儿和婴儿，则可产生肝炎、肺炎、脑膜炎、智力低下、先天性耳聋等严重的感染症状[3]。因此，及早诊断和治疗对疾病的控制和预后有着重要意义。现探讨婴儿血液、尿液、母乳联合检测在婴儿HCMV感染的诊断价值。报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 258例疑似HCMV感染的婴儿来自2015年10月至2017年11月该市妇幼保健院就诊或住院患者，男152例，女106例，年龄28 d至11个月，中位年龄3个月。临床表现为黄疸和(或)肝功能异常者114例，腹泻29例，肺炎45例，脑炎7例，传染性单核细胞增多症3例，心肌炎3例，其他57例。HCMV感染的诊断参考中华医学会儿科学分会发布的《巨细胞病毒诊断方案(1998年)》[4]和《儿童HCMV疾病诊断和防治的建议(2012年)》[5]。

1.2方法

1.2.1标本采集和处理 采用洁净试管收集婴儿晨尿或产妇乳汁(清洗乳头)1.5 mL，10 000 r/min离心5 min留取沉淀物；取婴儿空腹全血1.0 mL加入含EDTA抗凝剂的试管中，使用1.0 mL淋巴细胞液抽提细胞,生理盐水洗涤留取沉淀。不能及时检测的标本―20 ℃保存。

1.2.2仪器与试剂 全自动荧光定量PCR扩增仪，DA7600型，佛山达安医疗设备有限公司生产。HCMV DNA检测试剂盒为中山达安基因股份有限公司产品。

1.2.3HCMV DNA测定 严格按试剂盒说明书操作。将50 μL处理后的尿液、乳汁、血细胞沉淀物，以及等量DNA提取液加入1.5 mL离心管中，100 ℃加热10 min,12 000 r/min离心5 min取上清液2 μL做PCR扩增。FQ-PCR扩增条件：93 ℃,2 min预变性;93 ℃ 45 s→55 ℃ 60 s,10个循环；93 ℃ 30 s→55 ℃ 45 s,30个循环。结果判定由分析处理软件系统自动生成。试剂盒检出限度为103copy/mL。

1.3统计学处理 采用SPSS18.0统计软件进行数据分析。计数资料以例数或百分率表示，结果关联性分析使用χ2检验；差别性检验，关联系数P越接近1表示关系越密切，反之越不密切。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.13种标本HCMV DNA阳性率结果比较 258例婴儿血液、尿液及其母亲母乳HCMV DNA阳性率分别为28.68%(74/258)、48.06%(124/258)、61.24%(158/258)。婴儿血液和尿液联合检测HCMV DNA的阳性率为55.04%(142/258)，3种标本联合检测HCMV DNA的阳性率为74.41%(192/258)。

2.23种标本检测的相关性及诊断价值 258例婴儿血液、尿液及其母亲母乳HCMV DNA检测结果经关联性分析和差别性检验，结果之间有相关性，但差异无统计学意义(均P>0.05)。见表1～3。

表1 血液和尿液标本HCMV DNA检测结果之间的相关性(n)

注：χ2=63.09，P=0.444

表2 血液和母乳标本HCMV DNA检测结果之间的相关性(n)

注：χ2=12.84，P=0.219

表3 尿液和母乳标本HCMV DNA检测结果之间的相关性(n)

注：χ2=29.02，P=0.318

3 讨 论

HCMV感染在我国流行广泛，原发性感染多发生于婴幼儿时期[5]。成人常为隐性感染，但婴儿由于免疫系统发育尚不完全，感染后极易诱发相关疾病。对婴儿HCMV感染诊断除依靠临床症状外，实验室诊断尤其重要[6]。HCMV感染后病毒核酸比血清学证据和临床症状出现得更早，因此可将检测HCMV核酸作为HCMV感染的早期诊断指标[7]。目前，有关婴儿血液、尿液及其母亲母乳HCMV DNA检测已有临床应用的相关报道[7-8]。但未对3种标本检测结果之间的相关性进行探讨。

本研究结果显示，婴儿尿液HCMV DNA阳性率(48.06%)高于血液(28.68%)，推测尿液检测对婴儿HCMV感染的诊断价值可能大于血液；但婴儿尿液和血液HCMV DNA检测结果之间的相关性提示，两者关系并不密切，2种标本检测结果一致性并不高。说明婴儿血液和尿液标本联合检测对HCMV感染的诊断具有互补作用，可减少漏诊。本研究血液HCMV DNA阳性率较低的原因，可能与病毒感染时期或者提取DNA的含量较少有关。

本研究258例婴儿血液、尿液及其母亲母乳标本检测结果表明，母乳HCMV DNA阳性率(61.24%)高于婴儿血液和尿液，与宋春兰等[9]报道的69.4%基本一致，认同母乳是婴儿HCMV获得性感染的主要途径，提示母乳喂养可能会增加婴儿HCMV感染概率，应引起重视。同时，分析母乳与婴儿血液、尿液检测结果的相关性显示，母乳与血液、尿液HCMV DNA检测结果之间的相关性也不密切，虽然母乳HCMV DNA结果为阳性(或阴性)者，婴儿血液或尿液HCMV DNA结果也多为阳性(或阴性)，但仍有多例乳汁HCMV DNA结果为阳性者，血液或尿液HCMV DNA结果为阴性。因此，对于血液或尿液HCMV DNA阴性，又疑似HCMV感染的患儿，行母乳HCMV DNA检测很有必要，即使不能为HCMV感染的诊断提供直接证据，也对HCMV感染相关疾病溯源和治疗具有指导作用。

当前，母乳喂养增加婴儿HCMV感染概率已经被众多研究所证实。有研究报道，HCMV的发病机制及预后受机体免疫力的影响，当感染了HCMV的孕妇免疫力下降时，HCMV可被激活而变为显性感染，并通过母乳传播给婴儿[10]。但也有研究认为，虽然新生儿产后通过母乳喂养HCMV感染率较高，但症状性感染率无明显升高[11-12]。因此，母乳HCMV DNA检测对婴儿HCMV感染及相关疾病诊断的应用价值，还有待进一步的探讨和临床验证。