抗菌脂肽surfactin对雏鸡生长性能及血液生化的影响

胡美忠， 陈 敏，郁建生

（铜仁职业技术学院，贵州铜仁 554300）

兽用抗生素在畜牧养殖业中起到了重大作用，但是抗生素的滥用带来了耐药菌、药物残留等危害，严重威胁人们身体健康及生态环境安全。寻找安全、无耐药性无残留的抗生素替代品成为急需解决的问题。由芽孢杆菌产生的抗菌脂肽有广谱抗菌作用，不易产生耐药性，且来源安全，近年成为研究的热点，有望替代抗生素在畜牧业中的使用（庄国宏，2014）。

surfactin是枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌等芽孢杆菌属产生的环状抗菌脂肽（庄国宏，2014），具有广谱抗菌、抗病毒等活性（翟少伟等，2015；任鹏举等，2014），有在畜牧业中替代抗生素使用的潜力，研究表明surfactin具有促进动物生长，增强抗病能力等作用 （都海明等，2010）。为进一步研究surfactin在畜牧养殖业使用潜力，本试验研究了surfactin对雏鸡生长性能及血液生化的影响，为进一步开发surfactin在畜牧养殖业使用提供依据。

1 材料与方法

1.1 抗菌脂肽surfactin半固体发酵制备 枯草芽孢杆菌S21（民族中兽药分离纯化技术国家地方联合工程研究中心中兽药微生物发酵技术研究室分离筛选保藏）使用LB培养基活化得种子液，待用。市售黄豆粉碎成粗颗粒，蒸馏水浸泡过夜后蒸熟，趁热把黄豆颗粒转入用开水淋洗的带盖托盘（黄豆颗粒厚度约2～3 cm），冷却，接入黄豆5%（V/g）的枯草芽孢杆菌S21种子液，同时加入黄豆20%（V/g）无机盐体系（硫酸镁0.5 g/L，氯化钾 0.5 g/L，硫酸锰 0.005 g/L，硫酸铜 0.0016 g/L，硫酸亚铁0.0015 g/L及占黄豆重量5%的葡萄糖），搅拌均匀，37℃发酵48 h。甲醇萃取发酵黄豆2～3次，合并萃取液，浓缩至干，加少量蒸馏水溶解，使用高效液相色谱法检测甲醇萃取液中surfactin的峰面积，根据surfactin标准品峰面积计算其含量，制备得到surfactin样品。

1.2 试验动物 试验动物为贵州地方品种青脚土鸡苗，购自贵州黔灵山鸡苗孵化厂，铜仁职院农学院生态养殖园常规饲养至20日龄后进行试验，土鸡苗接种疫苗情况：1日龄马立克疫苗，7日龄新城疫IV疫苗，14日龄法氏囊多价苗，20日龄H120疫苗。

1.3 试验设计及饲养管理 随机选取100只健康的20日龄青脚雏鸡，分成基础日粮添加3、6、9 mg/kg surfactin三个surfactin剂量组（参照恩拉霉素剂量）、金霉素阳性组（基础日粮添加金霉素30 mg/kg）和空白组5个组。每组4个重复，每个重复5只，早晚定时喂食一次，自由采食，定期清理粪便，保持鸡舍卫生。

1.4 基础日粮配方 基础日粮配方依据当地土鸡饲养的配方配制，配方为60%玉米，10%麸皮，29%豆粕和1%骨粉鱼粉混合物。

1.5 测定指标

1.5.1 生长性能 于21、35、50日龄早上喂食前对各组称重，每日记录各组喂食量及死亡情况，根据数据计算各组的平均日增重，死亡率及料重比，数据使用SPSS 20.0分析统计。

1.5.2 血液生化 使用一次性真空采血管于雏鸡50日龄进行翅静脉采血，每组随机采集三只，采集的血液静置30 min，4000 g离心15 min得血清，置于-20℃冰箱保藏。采用南京建成生物工程研究所的总胆固醇（TC）试剂盒，甘油三酯（TG）试剂盒，尿素氮 （BUN）试剂盒，白蛋白（ALB）试剂盒，谷丙转氨酶试剂盒，谷草转氨酶试剂盒分别检测血清中总胆固醇、甘油三酯、尿素氮、白蛋白、谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量。

2 结果与分析

2.1 surfactin对雏鸡生长性能的影响 由表1可知，21～35 d内，添加了3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin日粮喂养的雏鸡，3 mg/kg surfactin组其日平均增重比空白对照组提高23.9%（P＜0.05），比金霉素组提高 13.5%（P＜0.05），6 mg/kg surfactin组其日平均增重比空白对照组提高24.7%（P ＜ 0.05）， 比金霉素组提高 14.2%（P ＜ 0.05），可见3 mg/kg surfactin组和6 mg/kg surfactin组日增重效果比金霉素组好（P＜0.05）。35～50 d平均日增重结果与21～35 d类似，添加了3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin日粮喂养的雏鸡，其日平均增重相对于空白对照组分别提升26.5%（P＜0.05）、31.4%（P ＜ 0.05），与阳性对照金霉素组相比无显著性差异。整个试验期间，对照组20只雏鸡死亡4只，死亡率为20%，但是3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin组，每组死亡雏鸡1只，死亡率为5%，阳性对照金霉素组死亡率为10%，可见添加surfactin能增强雏鸡抗病能力，降低死亡率。料肉比上，3 mg/kg surfactin和6 mg/kg surfactin组的料肉比与对照组相比分别降低4.5%（P＜0.05）、5.1%（P＜0.05），与金霉素组相当。

表1 surfactin对雏鸡生长性能的影响

表2 surfactin对雏鸡血液生化的影响

2.2 surfactin对雏鸡血液生化的影响 由表2可知，surfactin对雏鸡血清中总胆固醇、谷草转氨酶和谷丙转氨酶含量统计学上无明显影响，对血清中甘油三酯、尿素氮和白蛋白的含量有影响，3、6 mg/kg surfactin组和9 mg/kg surfactin组血清中甘油三酯和尿素氮的含量降低，甘油三酯含量分别降低 19.2%（P＜ 0.05）、12%（P＜ 0.05） 和 68.6%（P＜0.05）， 尿素氮含量分别降低36%（P＞0.05）、69.7%（P ＜ 0.01）和 67.4%（P ＜ 0.05），血清中白蛋白的含量提高，血清中白蛋白含量分别提高66.4%（P ＜ 0.05）、61.7%（P ＜ 0.05）、67.3%（P ＜ 0.05）。

3 讨论

研究表明芽孢杆菌产生的抗菌脂肽surfactin具有广谱高效抗菌、抗病毒活性，对支原体和原虫有显著的抑制效果，对畜禽具有很好的抗氧化、促生长、抗菌、增强动物机体免疫力及改善动物的肉质品质等作用，且具有相当好的热稳定性和pH稳定性，是一种潜在的新型绿色抑菌促生长饲料添加剂（翟少伟等，2015；龚谷迪等，2013）。都海明（2010）研究了抗菌脂肽对肉鸡生长性能和免疫机能的影响，得出抗菌脂肽对肉鸡的生长发育和免疫机能具有较好的调节和促进作用。翟少伟等（2016）的研究指出，饲料中添加surfactin可以提高中华鳖稚鳖的生长性能和肠道消化酶活性。陈旭波（2016）研究了surfactin对断奶仔猪生长性能及血液生化指标的影响，得出饲料中添加适量抗菌脂肽surfactin能够提高断奶仔猪生长性能、降低腹泻率、改善血脂水平和改善血液生化指标。surfactin促生长可能与其抑菌活性有关，surfactin通过抑制动物肠道致病菌的繁殖从而改善肠道微生态环境，促进了肠道健康，动物采食量提高，促进动物生长。血液生化指标可反映机体新陈代谢情况，尿素氮是衡量机体蛋白分解代谢速率的一个指标，白蛋白则是衡量机体内蛋白质合成代谢的指标，比较尿素氮和白蛋白在机体内的浓度变化可以得出机体对蛋白质的利用效率（刘观忠等，2011;张凯等，2011），血脂可反映机体脂质代谢情况，较低的甘油三酯和胆固醇有利于机体健康，谷草转氨酶和谷丙转氨酶则反映机体肝脏健康，较高水平说明机体肝脏功能受损。

4 结论

本试验结果表明，surfactin能促进雏鸡生长，降低料肉比、死亡率、血清中甘油三酯和尿素氮含量，提升血清中白蛋白的含量，促进饲料中蛋白质的消化吸收，在日增重和死亡率及血液生化指标方面优于金霉素。