续断饮片标准汤中川续断皂苷Ⅵ转移率的研究

李军山 常云凤 马浩 牛丽颖 李振江

中图分类号 R284.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）20-2782-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.20.10

摘 要 目的：研究续断饮片标准汤中川续断皂苷Ⅵ的转移率。方法：采用高效液相色谱法测定续断饮片及其标准汤中川续断皂苷Ⅵ的含量，色谱柱为SinoChrom ODS-AP，流动相为乙腈-水（30 ∶ 70，V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为212 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。根据成分含量测定结果计算从饮片到标准汤转变过程中川续断皂苷Ⅵ的转移率。结果：川续断皂苷Ⅵ检测进样量线性范围为0.484～4.84 μg（r=0.999 9）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%；定量限、检测限分别为0.3、0.1 μg；饮片和标准汤中的加样回收率分别为95.13%～100.22%（RSD=1.78%，n=6）、97.07%～100.08%（RSD=0.98%，n=6）；耐用性试验的RSD均小于1%。续断饮片标准汤中川续断皂苷Ⅵ的转移率为26.3%～49.5%。结论：该方法操作简便、准确，精密度、稳定性、重复性、耐用性好，可用于续断饮片标准汤中川续断皂苷Ⅵ转移率的测定。

关键词 续断；饮片；标准汤；高效液相色谱法；川续断皂苷Ⅵ；转移率

ABSTRACT OBJECTIVE： To study transfer rate of asperosaponinⅥ in standard decoction of Dipsacus asper decoction pieces. METHODS： The content of asperosaponin Ⅵ in Dipsacus asper decoction pieces and its standard decoction was determined by HPLC. The determination was performed on SinoChrom ODS-AP with mobile phase consisted of acetonitrile-water （30 ∶ 70，V/V） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 212 nm， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 10 μL. By the ingredients content obtained， the transfer rate of asperosaponin Ⅵ was calculated during decoction piece to standard decoction. RESULTS： The linear range of asperosaponin Ⅵ was 0.484-4.84 μg（r=0.999 9）. RSDs of precision， stability and reproducibility tests were all lower than 2%. The limits of quantification and detection were 0.3 and 0.1 μg， respectively. The average recoveries in D. asper decoction pieces and standard decoction were 95.13%-100.22%（RSD=1.78%，n=6），97.07%-100.08%（RSD=0.98%，n=6）. RSD of durability test was lower than 1%.The transfer rate of asperosaponin Ⅵ in standard decoction of D. asper decoction pieces ranged 26.3%-49.5%. CONCLUSIONS： The method is simple， accurate， precise， stable， reproducible and durable， and can be used for transfer rate of asperosaponin Ⅵ in standard decoction of D. asper decoction pieces.

KEYWORDSD Dipsacus asper； Decoction pieces； Standard decoction； HPLC； Asperosaponin Ⅵ； Transfer rate

續断为川续断科植物川续断（Dipsacus asper Wall. ex Henry）的干燥根，收载于2015年版《中国药典》（一部）[1]，在《神农本草经》中被列为上品，主产于四川、云南等地，其性苦、辛，微温[2]。续断的主要成分是三萜皂苷类成分，其中含量最高的为川续断皂苷Ⅵ；此外还有茶茱萸苷、熊果酸等环烯醚萜类成分以及龙胆碱、喜树碱等生物碱类成分[3]。研究显示，川续断皂苷Ⅵ对非酒精性脂肪肝模型小鼠具有明显的降脂作用[4]。

中药配方颗粒（即本文中“标准汤”）是由单味中药饮片煎煮后经提取浓缩制成的供中医临床配方使用的颗粒，是近几年市场需求增长迅速的产品，但存在着标准不统一等问题，给临床用药带来诸多不稳定因素[5]。本研究参照《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求（征求意见稿）》，收集15 批不同产地的续断药材饮片，制备成标准汤，并测定川续断皂苷Ⅵ的含量，以此计算从饮片到标准汤转变过程中川续断皂苷Ⅵ的转移率，从而为续断饮片标准汤的质量控制提供依据。

1 材料

1.1 仪器

LC-15C型高效液相色谱（HPLC）仪，包括SPD-15C紫外-可见检测器等（日本Shimadzu公司）；Shunliu-12N型冷冻干燥机（南京顺流仪器有限公司）；2XZ-4型旋片式真空泵（临海市谭氏真空设备有限公司）；AE 240型电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；KH-3200 E型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。

1.2 试剂

川续断皂苷Ⅵ对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111685-201506，纯度：90.2%）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

1.3 药材

笔者收集得到不同产地的15批续断药材饮片（详见表1），并经河北省药品检验研究院孙宝慧教授鉴定为真品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：SinoChrom ODS-AP（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（30 ∶ 70，V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：212 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取川续断皂苷Ⅵ对照品适量，精密称定，加70%甲醇溶液制成川续断皂苷Ⅵ质量浓度为242 μg/mL的对照品溶液。

2.2.2 饮片供试品溶液 精密称取饮片样品细粉0.5 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液25 mL，密塞，称定质量，超声（功率：100 W，频率：40 kHz）处理10 min，放冷，再次称定质量，用70%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 标准汤供试品溶液 称取饮片样品100 g，加水煎煮2次。第一次加水900 mL，浸泡30 min，沸后煎煮60 min；第二次加水700 mL，沸后煎煮40 min。合并两次煎液，经300目筛网趁热滤过，取续滤液，真空浓缩（温度<65 ℃，真空度≥0.09 MPa），冷冻干燥后精密称取0.5 g，按“2.2.3”项下方法制备标准汤供试品溶液[6-7]。

2.2.4 阴性对照溶液 以70%甲醇溶液作为阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验

取上述对照品溶液、饮片和标准汤供试品溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。结果，理论板数按川续断皂苷Ⅵ峰计均不低于3 000；基线分离良好，分离度均大于1.5。

2.4 专属性试验

取上述对照品溶液、阴性对照溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。结果，阴性对照在与川续断皂苷Ⅵ对照品相同保留时间处无干扰峰，表明本方法专属性良好。

2.5 线性关系考察

分别精密量取“2.2.1”项下对照品溶液2、6、12、16、20 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以川续断皂苷Ⅵ进样量（x，μg）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程y=2.338 3×105x+5.200 4×103（r=0.999 9）。结果表明，川续断皂苷Ⅵ检测进样量线性范围为0.484～4.84 μg。

2.6 定量限与检测限考察

分别精密量取“2.2.1”项下对照品溶液适量，倍比稀释，并按“2.1”项下色谱条件进样测定，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分别计算定量限、检测限。结果，川续断皂苷Ⅵ定量限、检测限分别为0.3、0.1 μg。

2.7 仪器精密度试验

取“2.2.1”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，川续断皂苷Ⅵ峰面积的RSD为0.61%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.8 中间精密度试验

由2名分析员分别在不同日期精密称取饮片样品（批号：1609032）细粉适量，分别按“2.2.2”“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，各6份，再按“2.1”项下色谱条件在不同仪器上进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表2、表3。

2.9 稳定性试验

分别取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：1609032）、“2.2.3”项下供试品溶液（批号：1609032）适量，于室温下放置0、2、4、6、8、12、18 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，饮片、标准汤供试品溶液中川续断皂苷Ⅵ峰面积的RSD分别为0.74%、0.60%（n=7），表明两种供试品溶液在室温下放置18 h内均基本稳定。

2.10 重复性试验

精密称取饮片样品（批号：1609032）细粉适量，分别按“2.2.2”“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，各6份，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量。结果，饮片、标准汤供试品溶液中川续断皂苷Ⅵ含量平均值分别为6.20%、6.75%，RSD分别为1.56%、1.15%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.11 加样回收率试验

取已知含量饮片样品（批号：1609032）细粉适量，共12份，分别加入一定质量浓度的川续断皂苷Ⅵ对照品溶液适量，按“2.2.2”“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，各6份，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表4。

2.12 耐用性试验

2.12.1 色譜柱考察 精密称取饮片样品（批号：1610111）细粉适量，分别按“2.2.2”“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件[色谱柱分别设置为SinoChrom ODS-AP（150 mm×4.6 mm，5 μm）、Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）]进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表5。结果表明，色谱柱发生一定程度变化时，本方法能满足试验要求，耐用性良好。

2.12.2 流动相考察 精密称取饮片样品（批号：1610111）细粉适量，分别按“2.2.2”“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件（流动相乙腈与水体积比分别设置为25 ∶ 75、30 ∶ 70、35 ∶ 65）进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表5。结果表明，流动相发生一定程度变化时，本方法能满足试验要求，耐用性良好。

2.12.3 流速考察 精密称取饮片样品（批号：1610111）细粉适量，分别按“2.2.2”“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件（流速分别设置为0.8、1.0、1.2 mL/min）进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表5。结果表明，流速发生一定程度变化时，本方法能满足试验要求，耐用性良好。

2.12.4 柱温考察 精密称取饮片样品（批号：1610111）细粉适量，分别按“2.2.2”“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件（柱温分别设置为25、30、35 ℃）进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表5。结果表明，柱温发生一定程度变化时，本方法能满足试验要求，耐用性良好。

2.13 样品含量测定及转移率计算

取15批饮片样品细粉各适量，分别按“2.2.2”“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，平行测定3次，记录峰面积计算样品含量，并计算从饮片到标准汤转变过程中川续断皂苷Ⅵ的转移率（出膏率=膏体质量/饮片质量×100%；转移率=标准汤中川续断皂苷Ⅵ含量×出膏率/饮片中川续断皂苷Ⅵ含量×100%），结果见表6。

3 讨论

川续断皂苷Ⅵ作为续断药材饮片的主要成分，是评价续断药材饮片质量的重要指标；续断饮片标准汤是续断药材饮片经提取、浓缩、干燥制成，因此，川续断皂苷Ⅵ同样是续断饮片标准汤的指标成分。本研究结果显示，以饮片到标准汤转变过程中川续断皂苷Ⅵ转移率为26.3%～49.5%，均值为37.7%。若以川续断皂苷Ⅵ转移率均值的70%～140%[8-9]作为限定范围（26.4%～52.8%）进行评判，本次15批续断饮片标准汤中川续断皂苷Ⅵ的转移率均符合要求。

预试验中，笔者先后采用冷冻干燥、60 ℃真空干燥和100 ℃干燥3种方式干燥标准汤，结果显示，冷冻干燥和60 ℃真空干燥后膏粉含量变化不大；而100 ℃干燥所得膏粉含量显著下降。考虑到试验操作的简便性，故选择冷冻干燥。笔者又先后考察了第一次煎煮加水量为7、9、11倍，第二次煎煮加水量为6、7、8倍时川续断皂苷Ⅵ的转移率，结果显示，适度增加水量，标准汤中川续断皂苷Ⅵ的转移率呈增长趋势。最终确定正式试验第一次煎煮加水量为9倍，第二次煎煮加水量为7倍。笔者还先后考察了第一次煎煮30、40、50、60 min，第二次煎煮20、30、40、50 min时川续断皂苷Ⅵ的转移率，结果显示，适度延长煎煮时间，标准汤中川续断皂苷Ⅵ的转移率呈增长趋势。最终确定正式试验第一次煎煮60 min，第二次煎煮40 min。

综上所述，本方法操作简便、准确，精密度、稳定性、重复性、耐用性好，可用于续断饮片标准汤中川续断皂苷Ⅵ转移率的测定。

参考文献

[ 1 ] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：一部[S].2015年版. 北京：中国医药科技出版社，2015：329-330.

[ 2 ] 徐国钧，何宏贤，徐璐珊，等. 中国药材学[M]. 北京：中国医药科技出版社，1999：428-429.

[ 3 ] 高秀芝，马鲁豫，金艳霞，等. 川续斷化学成分及药理作用研究进展[J]. 亚太传统医药，2010，6（7）：142-146.

[ 4 ] 李广润，宫丽丽，吕亚丽，等. 川续断皂苷Ⅵ对非酒精性脂肪肝小鼠的降脂作用研究[J]. 时珍国医国药，2014，25（8）：1800-1802.

[ 5 ] 仇法新，高福君. 中药配方颗粒的发展现状及应用前景[J]. 中国药房，2007，18（3）：163-165.

[ 6 ] 孙宝莹，郭涛，李西文，等. 葛根饮片标准汤剂的研究[J].世界中医药，2016，11（8）：1586-1589.

[ 7 ] 徐姣，赵嵘，代云桃，等. 栀子标准汤剂的质量评价方法考察[J]. 中国实验方剂学杂志，2017，23（7）：1-6.

[ 8 ] 陈士林，刘安，朱广伟，等. 中药饮片标准汤剂研究策略[J]. 中国中药杂志，2016，41（8）：1367-1375.

[ 9 ] 朱广伟，李西文，陈士林. 白芍饮片标准汤剂质量标准研究[J]. 世界中医药，2016，11（5）：753-757.

（收稿日期：2018-01-03 修回日期：2018-03-16）

（编辑：张 静）