小柴胡汤不同煎煮方式对黄岑有效化学成分的影响

陈露露 林汝秀 李瑞明

摘要 目的：探析不同煎煮方式對小柴胡汤中黄岑有效化学成分的影响。方法：选取高效液相色谱法测定小柴胡汤用去滓再煎法与不去滓煎法2种煎煮后的黄岑有效化学成分（黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素）的含量。对照品溶液包括黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素，检测开始前先进行对照品溶液的线性关系考察及精密度试验、稳定性试验、回收率试验。结果：黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素对照品溶液的标准曲线方程分别为Y=4 345 730.98X-8 888.11（r=0.999 8）、Y=2 478 268.68X911.05（r=0.999 5）、Y=771 988 9.74X2 449.03（r=0.999 9）。黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素对照品溶液的精密度试验、稳定性试验与回收率试验的RSD均低于2%，平均回收率均高于95%。供试品溶液A中所测得的黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素含量分别为（0.364 2±0.027 1）g/L、（10.192 3±0.387 5）g/L、（18.082 2±0.746 5）μg/mL，高于供试品溶液B的（0.282 4±0.047 8）g/L、（8.215 0±0.354 1）g/L、（12.698 2±0.642 9）μg/mL（P<0.05）。结论：去滓再煎法较之传统不去滓煎法更利于小柴胡汤中黄岑有效化学成分黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素的溶出。

关键词 小柴胡汤;煎煮;方式;黄岑;有效;化学成分

Effects of Different Decoction Methods of Xiaochaihu Decoction on Active

Chemical Constituents of Scutellaria Baicalensis Georgi

Chen Lulu1， Lin Ruxiu1， Li Ruiming2

（1 Department of Pharmacy， Nanfang Hospital of Southern Medical University， Guangzhou 510515， China;

2 Department of Pharmacy， Seventh Affiliated Hospital of Zhongshan University， Shenzhen 518107， China）

Abstract Objective：To study the effects of different decoction methods on the effective chemical composition of Scutellaria baicalensis Georgi in Xiaochaihu Decoction. Methods：The contents of effective chemical composition （Baicalin， Baicalein， Wogonin） in Xiaochaihu decoction boiled by deslagging and non-deslagging and then decocting were determined by high performance liquid chromatography. The comparison solution included the Baicalin， Baicalein and Wogonin. The linear relationship of the comparison solution and the precision test， the stability test and the recovery rate test were carried out before the start of the test. Results：The standard curve equation of Baicalin， Baicalein and Wogonin comparison solution were Y=4 345 730.98X888 8.11 （r=0.999 8）， Y=247 826 8.68X911.05 （r=0.999 5） and Y=771 988 9.74X244 9.03 （r=0.999 9）. The RSD of Baicalin， Baicalein， Wogonin reference solution in the precision test， stability test and the recovery test were all lower than 2% and the average recoveries were all higher than 95%. The contents of Baicalin， Baicalein and Wogonin in test solution A were （0.364 2±0.027 1）mg/mL， （10.192 3±0.387 5）mg/mL and （18.082 2±0.746 5）μg/mL， which were higher than （0.282 4±0.047 8）mg/mL， （8.215 0±0.354 1）mg/mL and （12.698 2±0.642 9）μg/mL in test solution B （P<0.05）. Conclusion：The deslagging and then decocting were more beneficial to the dissolution of Baicalin， Baicalein， Wogonin in Xiaochaihu decoction compared to the non-deslagging and then decocting.

Key Words Xiaochaihu decoction; Decoction method; Scutellaria baicalensis Georgi; Effective chemical composition

中图分类号：R289.5;R284文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.03.050

小柴胡汤为临床经典方剂，在各种发热性疾病的治疗中应用广泛。“去滓再煎”是药物的一种特殊煎煮方式，即于药物煎煮一定时间后将药渣滤去再次煎煮使药液浓缩。有中医研究认为，去滓再煎可使药液浓缩，减少药液量，减轻患者胃肠负担;另外药汁再煎后药液浓度大，适用于水液运化、转输障碍的患者[1]。已有研究显示，去滓再煎法在半夏泻心汤、小柴胡汤等方剂中较为多用，且以上汤方均为临床常用方剂[2]。但有专家提出[3-4]，煎煮方式、药物配伍比例、炮制等因素均会对中药方剂中有效成分的溶出造成影响，但有关去滓再煎、不去滓再煎后有效成分含量变化的研究较少，故本研究采用高效液相色谱法测定小柴胡汤用去滓再煎法与不去滓煎法2种煎煮后的黄岑有效化学成分黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素的含量，以探析不同煎煮方式对小柴胡汤中黄岑有效化学成分的影响，以期为临床中药煎煮方式的合理应用提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪（型号LC-20AT，购自日本岛津公司）;分析天平（型号AEL-200，购自湘仪天平仪器厂）;超声波清洗器（型号KQ3200E，购自昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂

黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素对照品;甲醇（购自北京普天同创生物科技有限公司，纯度≥98%）作为对照品。

1.3 分析样品

小柴胡汤配方：生柴胡120 g，黄芩（枯芩）、人参、生姜、半夏、大枣各45 g，甘草30 g。组方中所涉及药材均购自同仁堂药店。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱温6 ℃，流动相乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱（5%～12% A，0～5 min;12%～24% A，5～15 min;24%～27% A，15～20 min;27% A，20～30 min;27%～70% A，20～30 min;70%～100% A，40～50 min;100%～5% A，50～55 min），流速1.0 mL/min，进样量20 μL，黄芩苷检测波长在200～400 nm之间扫描，最终供试品在278 nm处有吸收峰而对照品溶液无，确定在278 nm处测定波长。按照以上色谱条件将不同梯度浓度的对照品溶液分别进样6次，测定峰面积值。并以对照品A、B、C的进样量作为衡坐标（X）、峰面积值作为纵坐标（Y）进行线性回归，得到标准曲线方程。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取对照品黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素，置于量瓶中，加甲醇（购自天津市光复科技发展有限公司）溶解并稀释至刻度，摇匀，得到对照品溶液A、B、C。取20 μL甲醇作为空白溶剂，注入液相色谱仪进行测定，证实空白试剂对实验结果无影响后开始测定。

2.3 供试品溶液的制备

分别用2种方法煎煮小柴胡汤：去滓再煎法：按组方剂量称量药材，称量误差需控制在±0.01 g。称好后将药材置于5 L的容器中，加入2 400 mL超纯水浸泡0.5 h。后大火煎煮，水沸后调至小火维持微沸状态，至药汁浓缩为1 200 mL时关火，将药渣滤去，微沸状态下继续煎煮药汁至600 mL，再次关火。得到供试品溶液A。不去滓煎法：按组方剂量称量药材，称好后将药材置于5 L的容器中，加入2 400 mL超纯水浸泡0.5 h。大火煎煮至水沸，调至小火维持微沸状态，至药汁浓缩为600 mL，关火。得到供试品溶液B。

2.4 专属性试验

取甲醇20 μL为空白对照试剂，加入液相色谱仪内，在2.1色谱条件下测定，显示空白溶剂<5 min出峰且较小，无干扰，另取混合对照组溶液、供试品溶液C 20 μL注入液相色谱仪，2.1色谱条件下测定，显示有效成分和相邻峰分离均>1.5。

2.5 线性关系考察

取对照品溶液A、B、C，3种溶液均平均分为6份，分别稀释为6个梯度浓度。见表1。

表1 3种对照品溶液的线性回归方程

2.6 中间精密度试验

精密量取对照品溶液A、B、C各6份，测定278 nm处的吸收度，计算精密度试验的相对标准差（RSD），结果精密度试验RSD低于2%。见表2。

表2 中间精密度试验结果

2.7 对照品溶液稳定性试验

再次精密量取对照品溶液A、B、C各6份，分别于0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h时测定278 nm处的吸收度，计算稳定性试验的RSD。结果：稳定性试验RSD低于2%。见表3。

表3 对照品溶液稳定性试验

2.8 回收率试验

精密量取6份供试品溶液B，每份9 mL，分别置于10 mL的量瓶中，然后加入1 mL的对照品溶液A、B、C各2份进行超声混合。之后加入甲醇至刻度线进行定容。按照2.3中色谱条件分别进样，计算黄岑苷的平均回收率及相对标准差（RSD）。结果：回收率试验RSD低于2，平均回收率高于95%。见表4。

表4 回收率试验

2.9 样品测定结果

分別取供试品溶液A、B各6份，按2.3中色谱条件每次进样20 μL测定样品中黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素的含量。应用SPSS 19.0处理数据，计量资料采用（±s）表示，比较采取独立样本t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。供试品溶液A中所测得的黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素含量均高于供试品溶液B（P<0.05）。见表5。

表5 2种煎煮方法的黄岑有效化学成分含量比较

（±s，n=6）

3 讨论

目前，黄岑药材内主要主要化学成分的测量方法有电化学法、分光光度法、高效液相色谱法等。其中电化学法、分光光度法检测的选择性差，含量的测定结果易受杂质的干扰，为提高研究结果的精度，故本研究选择高效液相色谱法进行测定。

黄岑的主要成分为黄酮类，包括黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素等。有药理学研究显示[5-6]，黄岑苷具有消炎、抗菌等作用;黄岑素可抗菌、利尿并抗变态反应;汉黄岑素可利尿、解痉，故本研究选择黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素作为对照品。液相色谱法测定过程中，为防止色谱柱出现堵塞导致柱压升高，研究中的对照品溶液及供试品溶液均经微孔滤膜滤过后进样。另外，临床以往多于黄酮类成分显色后在510 nm处测定其含量[7]，但本研究中的供试品溶液A与B在510 nm处均未见吸收，推测与本研究中的供试品溶液中成分复杂有关。经多次试验，最终在278 nm处进行测定，且效果满意。结果显示黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素对照品溶液均具有良好的线性关系，精密度试验、稳定性试验与回收率试验结果也表明，RSD均在2%以上，平均回收率均达95%以上，故本研究的科学性与准确性基本满意。

中药的药疗是多组分的协同作用这一观点已基本达成共识[8]。有研究称，小柴胡汤为复方制剂，不同成分之间会相互影响[9]。有研究认为，小柴胡汤中的柴胡、人参等药材中含蛋白、皂苷等表面活性物质，可促使黄酮类成分进入蛋白、皂苷等“胶团”中而使黄岑主要成分的溶解度获得提高[10]。也有专家指出，人参与柴胡的极性较大，皂化能力强，因而黄岑与柴胡及人参等中药材配伍后溶出效果更佳，有利于提高方剂疗效[12]。有研究提出，中药方剂在相同配伍的前提下，煎煮方式对有效成分的溶出也会造成不同影响[13]。全方水煎煮是中药方剂中药材的传统提取方法，随着单味配方颗粒及根据药味“有效成分”理化性质确定提取方法等新观点的提出[14-16]，中药复方制剂的提取方法也逐渐发生变化。在此现状下明确不同提取工艺对中药方剂疗效的影响非常重要。由于不去滓煎法是临床最常见的中药煎煮方式，故本研究设置了去滓煎法与不去滓煎法的2种供试品溶液。结果显示，供试品溶液A中所测得的黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素含量均高于供试品溶液B，证实小柴胡汤采取去滓煎法更利于黄岑主要化学成分的溶出，从而发挥该方剂的药理学作用[17-18]。姜侠等[19]的研究也证实，不去滓煎法所测得的黄岑苷含量低于去滓再煎法，与本研究结论一致，但2组煎煮方法导致黄岑主要有效化学成分含量差异的具体原因尚不明确。有研究在探讨煎药器具、煎药时间及火候等因素对中药方剂主要成分的影响时发现，煎药时间的影响系数最大[20]。而不去滓煎法与去滓再煎法的煎药时间理论上会存在差异，推测可能是造成黄岑有效化学成分含量差异的因素之一，有待进一步深入研究。另外，本研究仍存在一定局限性，如尚未观察其他药材化学有效成分含量的变化，因此本研究虽初步认为去滓再煎法可提高黄岑类成分的溶出，但方中皂苷类等成分的变化还需完善研究。

综上所述，小柴胡汤采取去滓再煎法更利于黄岑有效化学成分黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素的溶出。

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