CYP19A1基因多态性与乳腺癌患病风险的相关性

何三军，韩亦非

(1.汉中市中心医院检验科，陕西 汉中 723000；2.汉中市疾病预防控制中心，陕西 汉中 723000)

乳腺癌是女性常见的癌症类型，近年来，其发病率呈上升趋势[1]。根据2015年发布的全球癌症统计数据，全世界共有170万人被诊断患有乳腺癌，其中52.19万人死于该病[2]。乳腺癌的发病与遗传、环境因素等多方面有关[3-4]，单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)在乳腺癌的发生和发展中起重要作用[5]。CYP19A1基因编码的酶是细胞色素P450超家族的成员，其催化过程涉及药物代谢、胆固醇、类固醇和其他脂质合成的许多反应[6]。CYP19A1蛋白质定位于内质网，并催化雌激素生物合成的最后步骤[7]。据报道，CYP19A1基因多态性与雌激素受体阳性乳腺癌患者的生存率有相关性[8]。然而，关于CYP19A1基因多态性与乳腺癌患病风险相关性的研究结果并不一致[9]。本研究旨在探讨CYP19A1基因上rs4646、rs6493487、rs1062033、rs17601876和rs3751599共5个SNP与乳腺癌患病风险的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2014年3月至2018年3月汉中市中心医院收治的女性乳腺癌患者为研究对象，入选条件：(1)经组织病理学检查确诊为乳腺癌；(2)未接受过放射治疗、化学治疗。排除条件：(1)并发其他类型肿瘤；(2)语言障碍、难以交流者；(3)受试者之间无血缘关系。本研究共纳入乳腺癌患者300例(乳腺癌组)，年龄41～78(59.55±8.65)岁；绝经206例，未绝经94例；生育次数1～6(3.2±1.3)次。另选择同期体检健康女性作为对照，入选条件：(1)既往无肿瘤、慢性疾病、严重代谢性疾病及内分泌失调等病史；(2)受试者之间无血缘关系。排除条件：(1)有家庭乳腺癌病史；(2)语言障碍、难以交流者。该研究共纳入健康者300例(对照组)，年龄41～78(58.45±9.45)岁；绝经205例，未绝经95例；生育次数1～6(3.5±1.5)次。2组受试者的年龄、月经情况及生育次数比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究符合医学伦理学规定，并通过医院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2试剂与仪器全血基因组纯化试剂盒、DNA扩增试剂盒(德国Thermo fisher公司)，GeneAmp 9700聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)仪(美国ABI公司)；电泳仪(美国Bio-rad公司)，ABI 3500 dx测序仪(美国ABI公司)。

1.3血样采集及DNA提取采集受试者外周静脉血5 mL，置于乙二胺四乙酸二钾抗凝管中，-70 ℃冰箱保存；采用全血DNA纯化试剂盒进行DNA提取，操作步骤严格按照说明书进行。

1.4SNP分型采用Sanger测序技术对rs4646、rs6493487、rs1062033、rs17601876和rs3751599位点进行基因分型。

2 结果

2.12组受试者CYP19A1基因上5个候选SNP的最小等位基因频率比较结果见表1。5个候选SNP均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。乳腺癌组CYP19A1基因上rs4646位点的等位基因C、rs6493487位点的等位基因G及rs17601876位点的等位基因A频率低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表1 2组最小等位基因频率比较

2.22组受试者CYP19A1基因上5个候选SNP的基因型频率比较结果见表2。乳腺癌组CYP19A1基因上rs4646位点的AA基因型、rs6493487位点的AG和GG基因型、rs17601876位点的AG和AA基因型频率低于对照组，而rs1062033位点的GG基因型频率高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表2 2组受试者CYP19A1基因上5个候选SNP的基因型频率比较

注：“-”为无数据。

2.3候选SNP在遗传模型下与乳腺癌患病风险的相关性结果见表3。rs4646和rs6493487在显性遗传模型和加性遗传模型下与降低乳腺癌患病风险有相关性(P<0.05)；rs1062033在隐性遗传模型下与增加乳腺癌风险有相关性(P<0.05)；而rs17601876在3个遗传模型下均与降低乳腺癌风险有相关性(P<0.05)。

表3 不同遗传模型下候选SNP与乳腺癌患病风险的相关性

3 讨论

近年来，越来越多的研究表明，遗传因素在乳腺癌发生、发展中起重要作用。迄今为止，基于欧洲人群、非裔美人和东亚裔人群的全基因组关联研究已经确定了多个基因位点与乳腺癌患病风险相关[10-12]。然而，上述研究结果存在显著异质性，这可能与不同人群的遗传背景差异较大有关。因此，对乳腺癌患病风险位点的筛查仍然需要针对各个人群的精准研究。本研究对中国汉族人群CYP19A1基因多态性进行检测，探讨CYP19A1基因的多态性与乳腺癌患病风险的相关性。

绝经期对于女性雌激素的产生来源是一个分水岭，绝经期之后，女性的内源性雌激素产生从主要的卵巢来源转变为外周来源。CYP19A1基因编码的芳香酶是催化雌激素生物合成过程中雄烯二酮和睾酮对雌酮和雌二醇的芳构化的最终和限速步骤的主要酶。研究显示，芳香酶直接影响乳腺中原位雌激素的合成[13]，相对于正常乳腺组织，乳腺肿瘤组织中芳香酶表达水平显著升高[14]，表明CYP19A1基因在乳腺癌的发生和发展中的潜在作用。芳香酶在乳腺癌发病机制中的重要性也已得到证实，芳香酶抑制剂已应用于治疗绝经后乳腺癌[15]。此外，还有研究表明，芳香酶抑制剂可能比雌激素受体调节剂更能够有效地减缓肿瘤进展[16]。总之，CYP19A1基因与乳腺癌的发生、发展密切相关。

本研究从SNP的角度研究CYP19A1基因与乳腺癌的相关性，主要检测了rs4646、rs6493487、rs1062033、rs17601876和rs3751599共5个SNP。MAZZUCA等[9]研究显示，CYP19A1基因的rs4646位点多态性变异可能影响基于芳香酶抑制剂疗法的乳腺癌患者出现相关不良反应的易感性。SHAO等[17]认为，CYP19A1基因的rs4646位点多态性与早期乳腺癌的无进展生存期有关，并且，其AA基因型携带者的预后可能与绝经状态有关。本研究结果显示，rs4646多态性与降低乳腺癌风险有相关性，笔者推测，rs4646可能是乳腺癌早期筛查与预测预后的一个潜在标志物。KOPP等[18]研究显示，CYP19A1基因的rs6493487位点多态性与性激素结合球蛋白水平有相关性。然而，遗传决定的性激素水平差异并不能明确表示与乳腺癌风险相关联。本研究结果显示，rs6493487多态性与降低乳腺癌患病风险相关，但该结果需要在更大样本研究中进一步验证。关于rs1062033和rs17601876多态性的报道较少，本研究结果显示，rs1062033多态性与增加乳腺癌患病风险有相关性，rs1062033可能成为潜在的乳腺癌早期筛查易感性位点；rs17601876多态性与降低乳腺癌患病风险相关，然而其具体机制仍待进一步探索。HAO等[19]研究显示，rs3751599位点多态性与人类身高具有相关性，而无其他研究报道其与疾病发生、发展的相关性，本研究也未发现rs3751599与乳腺癌发生的相关性。

综上所述，CYP19A1基因上的rs4646、rs6493487、rs17601876位点多态性与降低乳腺癌患病风险相关，而rs1062033位点多态性与增加乳腺癌患病风险相关。