猪链球菌病及其自家灭活疫苗的制备

摘 要：猪链球菌病是由多种致病性猪链球菌感染引起的一种人畜共患病，该病临床上常表现为败血症、脑膜炎、淋巴脓肿、关节炎等症状。由于链球菌血清型较多，较有效的预防方法是分离本场猪链球菌，制备成自家灭活苗进行免疫。

关键词：猪链球菌病 疫苗制备 自家灭活苗

一、猪链球菌病的特点

（一）病原特点

猪链球菌是一种革兰氏阳性球菌，呈链状排列，无鞭毛，不运动，不形成芽胞，但有荚膜。为兼性厌氧菌，但在无氧时溶血明显，培养最适温度为37℃。菌落细小，直径1～2mm，透明、发亮、光滑、圆形、边缘整齐，在液体培养基中呈链状。到目前为止，共有35个血清型（1～34，1/2型），最常见的致病血清型为2型。

（二）致病性

猪链球菌的主要毒力因子包括荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白、细胞外因子以及溶血素等。我国科研工作者研究比较多的是溶菌酶释放蛋白（MRP）和细胞外蛋白 因子（EF），二者均为阳性的菌株，一般具有较高的毒力，它们是评价猪链球菌2型毒力的重要指标。CPS是抵抗巨噬细胞吞噬的重要物质，是猪链球菌进行分型的标志，是目前唯一被确认的毒力因子。

（三）流行特点

1 病原广泛存在

猪链球菌常污染环境，可在粪、灰尘及水中存活较长时间。该病四季均可发生，但在炎热，潮湿季节多发。猪链球菌经呼吸道、消化道、伤口及黏膜感染，也可垂直传播，昆虫媒介在该病的传播中也起着重要作用。猪的链球菌是条件性致病菌，只有在它适宜的环境中，猪只抵抗力低下的情况下才能发病，多呈散发和地方性流行，偶有暴发。新疫区可呈暴发流行，发病率和死亡率较高。各种品种，各种年龄的猪均易感染。

2 仔猪发病死亡率高

仔猪多发生于1，2月龄，此时的母源抗体水平相对较低，本身抵抗力差，在应激，其他病原的侵袭等诱因下多发生；同时可通过小猪咬架的伤口，带菌者的唾液及血液传播，因此仔猪的发病率和死亡率较其他生长阶段要高。临床上仔猪多见于败血型和脑膜脑炎型。

二、自家灭活苗的制备

（一）病料采集

挑选有典型脑神经炎症状及有关节炎症状的产房仔猪及保育仔猪多头，要求为发病初期未使用任何抗生素治疗，且体温升高在41℃以上的病猪。剖检发现病猪的脑软膜、肺、肝、淋巴结有不同程度的出血点，心包、腹腔有纤维素性渗出物。关节腔内充满黄色胶样液体，有的形成干酪样物附着在关节面。无菌采取病猪的关节病变部位的关节液，进行细菌的分离和鉴定。

（二）病原分离与鉴定

1 细菌的分离培养

病料采集，主要采集病猪的关节液。将采集的关节液分别接种到血液琼脂平板培养基上和脑心汤液体培养基中，37℃培养12—24 h。该菌培养结果为有针头或针尖大小的灰白色、湿润、黏稠、周围隆起的半透明菌落，在血液琼脂平板上菌落周围有β溶血。革蘭染色镜检，镜下可见单个或成对排列的圆形或椭圆形革兰阳性小球菌。在培养基上很少形成链状，而在肉汤中可形成长链状。

2细菌的鉴定

对上述分离到的革兰阳性球菌进一步做生化反应鉴定，该菌能发酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、水杨苷、海藻糖和菊糖，产酸、不产气，过氧化氢触酶反应阴性。

3动物接种

将经分离鉴定挑选出的链球菌培养液分别给4只家兔腹腔注射，2 mL/只，接种后12—36 h内观察家兔是否死亡，如死亡则从死亡家兔的心、肝、脾等器官分离细菌。接种后12—36 h内家兔全部死亡。从死亡家兔的心、肝、脾等器官中能分离到纯化的致病性链球菌，可确定该病猪的关节炎主要由链球菌感染所致。（三）疫苗制备过程

将上述分离纯化的链球菌在无菌操作条件下接种脑心汤培养液增菌培养6—12 h，然后把每支试管培养物接种到3000 mL的脑心汤培养液中，37℃增菌培养18—24 h。菌液离心后，用灭菌的生理盐水将菌体沉淀稀释一定倍数，用0.3%体积的福尔马林将菌液灭活，福尔马林要逐滴加入，并且要一边加入一边振荡，然后放入培养箱中37℃恒温培养48 h。取灭活的培养物在血液琼脂、沙氏培养基、肝汤液体培养基中37℃恒温培养24 h，观察有无菌落生长。经检验无菌生长后，与氢氧化铝佐剂进行混匀及分装。

（四）杂菌检验和安全检验

杂菌检验取灭活的链球菌培养物在血液琼脂、沙氏培养基、肝汤液体培养基中37℃恒温培养24 h，观察没有菌落生长，说明链球菌培养物灭活完全，没有链球菌及其他细菌生长。

安全性检验疫苗制好后，选5头仔猪，每头猪分别注射5 ml自家苗，30 min内没有出现呕吐等异常症状，说明该批疫苗可以使用，若30 min内出现呕吐等异常症状者，该批疫苗不能使用。

三、其他

猪链球菌病对于我国养猪业来说并不是一个陌生的传染病，从1949年到现在临诊上一直有病例出现。之所以旧病新发并且来势凶猛，造成巨大的经济损失，甚至严重地威胁到人类的生命，笔者认为主要原因是人们对猪链球菌病的预防不够全面。猪链球菌是一种条件致病菌，所以外界环境的刺激是导致发病的一个重要的原因。事实上，几乎所有的动物疾病都有一个共同的发病原因，就是没有做好饲养管理工作。这包括饲料质量不佳，如饲料中存在黄曲霉毒素，会对肝脏造成严重的损害，动物免疫力也就下降。还有环境消毒不彻底，畜舍拥挤，通风不良，夏季温度过高等也会导致发病率增加。免疫失败的原因主要有猪蓝耳病、猪圆环病、伪狂犬病等猪的免疫抑制病存在。猪在接种疫苗之前就患病，也是导致免疫失败的重要原因。因此，只有综合解决上述的非疫苗因素的问题，再配合自家疫苗的免疫，才能减少或控制猪场链球菌病的发病率。

参考文献

[1] 蔡宝祥.家畜传染病学[M].北京： 中国农业大学出版社，2001： 91-95.

[2] 范忠军，柴虹，王永明，等.猪链球菌病及其疫苗研究进展[J].上海畜牧兽医通讯，2007年6期.

[3] 李成明，吕雷，姚金水，等.猪链球菌自家灭活疫苗的制备与应用[J].黑龙江畜牧兽医，2005年第11期.

作者简介：刘晨晨 ，1995年-，女，籍贯： 河南省商丘市，河南农业大学，牧医工程学院2015级动植物检疫（动物检疫）专业在读本科生。