正常妊娠女性血细胞分析生物参考区间的建立

贺江，郭永灿，刘育欣，邱厚兵，钟毓洁，王春，马彦纳

(1.泸州市中医医院检验科；2.西南医科大学附属中医医院检验科，四川 泸州 646000)

血细胞分析对筛查血液性疾病，了解机体感染、贫血状况及常规止血功能，尤其是对评估孕妇的健康水平及监测胎儿的生长发育有着不可替代的作用。然而，目前大多数实验室血细胞分析都是引用仪器厂家或《全国临床检验操作规程》的生物参考区间，这类参考区间都是以正常成年人为研究对象确立的，由于妊娠期女性血液分布发生了明显的变化，若采用一般人群的生物参考区间去判断妊娠女性的血细胞分析结果往往容易导致误判。本研究依据美国临床和实验室标准协会(CLSI)文件C28-A3《医学实验室参考区间的定义、建立和确认》以及我国卫生行业标准WS/T 402-2012《临床实验室检验项目参考区间制定》[1]，对不同孕期妇女的血细胞分析结果进行分析，旨在建立正常妊娠女性血细胞分析的参考区间，为临床诊断和评估提供可靠的依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

为减小个体差异，本研究采用纵向序贯研究的方法[2]，选择2016年6月至2016年12月到本院定期进行产前检查并顺利分娩的589例孕妇为研究对象，纳入标准：无内、外科和妇科疾病，无妊娠并发症，追踪其整个妊娠结局，剔除439例不符合本次研究范围的检测对象，最终筛选出150例正常孕妇作为本次最终研究对象，年龄18～37岁，平均(26.9±4.1)岁，孕期其它实验室指标均正常，未使用过药物，孕期顺利，无明显的贫血症状，无明显的内科感染指征。按照孕周不同将其分为孕早期(≦12周)和孕晚期(≧28周)两个实验组，对上述最终确定的150名正常孕妇，分别在孕早期、孕晚期各采一次静脉血进行血细胞分析，同时随机选取150例同期到本院进行健康体检的非孕健康育龄妇女作为对照组，入围对照组人群无内、外科和妇科疾病病史，且在非月经期内，年龄19～39岁，平均(27.3±4.2)岁，年龄与妊娠女性组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有受试对象均签署知情同意书，将两个实验组和对照组的所有血细胞分析数据双人核对录入Excel 2007，以备导入SPSS 19.0软件统计使用。

1.2 主要试剂与仪器

使用 Sysmex XS-1000i 全自动血液分析仪及原装配套试剂，使用美国伯乐公司生产的质控品，采血所用的乙二胺四乙酸二钾(K2 EDTA)真空采血管，由江苏康健医疗用品有限公司生产。

1.3 检测方法

仪器按规定由厂家每6个月进行1次校准，使用的仪器和检测项目操作均按本室制定的标准操作程序(SOP)文件执行，检测系统参加卫生部临床检验中心的室间质评合格，室内质控各评价指标的变异系数均在允许范围内，同时对本实验室不同的血细胞分析仪进行定期的比对试验，使不同仪器间的结果具有可比性。每日开机后，使用双水平全血质控品进行质控检测，测定的质控结果在规定范围内才开始检测临床标本。采用K2 EDTA抗凝真空采血管空腹采集静脉血2 mL，立即充分混匀，置室温(25 ℃左右)保存，2 h内完成测定。检测项目包括：白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分数(NEU%)、淋巴细胞百分数(LY%)、嗜酸性粒细胞百分数(EOS%)、嗜碱性粒细胞百分数(BASO%)、单核细胞百分数(MO%)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞比容(Hct)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度标准差(RDW-SD)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板比容(PCT)、血小板体积分布宽度(PDW)、大血小板比率(P-LCR)等19项参数。

1.4 参考区间的验证

根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)C28-A2 文件，随机选取20名正常孕妇的孕早期及孕晚期血细胞分析结果验证两组生物参考区间，若各项检测结果不超过2个数值(10%)落在新建参考区间以外，则表明验证有效，接受所建立的参考区间[3]。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 正态性检验

经统计分析，对照组的LY%、RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MCHC、PLT、MPV、PCT；孕早期组的NEU%、LY%、PLT、MPV；孕晚期组的NEU%、LY%、RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MPV、P-LCR数据呈正态分布，其它数据呈非正态分布。WBC、NEU%、LY%、EOS%、RBC、Hb、Hct、MCHC、RDW-SD、MPV、P-LCR3组之间两两比较，差异有统计学意义(P<0.05)；BASO% 、MCV、PCT、PDW孕早期组与对照组之间比较，差异有统计学意义(P<0.05)；BASO%、MO%、MCH、RDW-CV、PCT孕晚期组与对照组之间比较，差异有统计学意义(P<0.05)；MO%、MCH、RDW-CV、PDW孕早期组与孕晚期组之间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 150例正常孕妇不同孕期血细胞分析检测结果[正态分布数据非正态分布数据(P2.5～P97.5)]

*：数据呈正态分布；P1：孕早期组与对照组比较；P2：孕晚期组与对照组比较；P3：孕早期组与孕晚期组比较。

2.2 各参数参考区间的确定方法

表2 孕早期、孕晚期组19项血细胞分析参数参考区间

2.3 参考区间验证结果

本研究建立的正常孕妇孕早期、孕晚期组血细胞分析19项参数参考区间均通过验证，验证结果见表3、表4。

表3 孕早期组血细胞分析参考区间验证结果

表4 孕晚期组血细胞分析参考区间验证结果

3 讨论

妊娠期母体血液系统会发生一系列生理变化以适应胎儿生长发育，血液总容量增加并有一定程度的血液稀释。本研究结果显示，RBC、Hb、Hct逐渐降低，差异有显著统计学意义(P<0.05)，与张雪琳[5]报道的结果相同，很好的印证了妊娠女性这一生理变化过程。

近年来，血红蛋白、红细胞比容、甲状腺功能等因素对妊娠结局及胎儿的影响越来越受到关注，血细胞分析等检测项目已成为常规产前检查内容。妇女在妊娠期间，母体体重和血液容量会增加，相对稀释了血液，会出现生理性贫血[6]，但不会造成不良的妊娠结局[7]。孙德华等[8]研究发现，妊娠妇女当中，孕早期Hb<100 g/L的比例为7.14%，孕中期为25.10%，孕晚期时则达到了45.36%。本研究结果显示，正常孕妇孕晚期的Hb参考区间为92.8～131.2 g/L，而目前我国临床仍普遍采用Hb<100 g/L[9]作为诊断妊娠期贫血的标准，忽视了妊娠期生理性贫血的存在，就会把一部分处于生理性贫血的孕妇归于贫血组，容易造成误诊和不必要的治疗。同时，妊娠期高浓度Hb也会对妊娠结局有不利影响，一些学者以 Hb>130 g/L作为妊娠期高浓度Hb的判断标准[10]，高浓度Hb常常被误认为机体处于良好的血铁状况而没有得到足够重视，Little等[11]对妊娠妇女进行研究发现，高浓度Hb与围生期死亡率、早期新生儿死亡率和死产有关。另外，Hct增高对孕妇妊娠并发症的发生也有重要关系，罗雪娟等[12]研究发现，孕晚期Hct≥35% 提示存在明显的易栓症趋势，从而增加深静脉血栓形成、肺栓塞的发生风险。吴曼祯等[13]报道，孕晚期Hct≥35%，发生妊娠高血压综合征的几率将大大增加。此外，俞琳等[14]研究发现，妊娠期糖尿病(GDM)的发生率也随着RBC、Hb、Hct水平的增高而增加，利用血细胞参数对GDM进行早期预测和筛选，可以早发现早治疗，是减少不良妊娠结局发生的有效手段。由此可见，建立妊娠女性红细胞相关参数参考区间，对于筛查妊娠贫血患者，预测妊娠并发症、监测胎儿的生长发育有非常重要的作用。

利用地贫的初筛标准：MCV<82 fL和/或MCH<27 pg[15]，可有效地筛查出妊娠期地贫携带者[16]，但应考虑妊娠期生理性贫血因素的存在，否则会将部分正常孕妇纳入地贫组，造成误诊和不必要的治疗。同时关注MCV、MCH变化幅度，可以发现妊娠期间的β地贫女性MCV、MCH较正常妊娠及缺铁性贫血女性均有明显变化，如果联合网织红细胞(Ret)监测，还能够明显地提高鉴别诊断β地贫妊娠和缺铁性贫血妊娠的能力[15]。因此，建立妊娠女性红细胞相关参数参考区间，对于鉴别贫血类型、及时采取相应的治疗措施、促进胎儿的生长发育有非常重要的作用。

外周血WBC对于感染、炎症、白血病等诊断和疗效评估有一定的临床价值，妊娠女性WBC从怀孕7～8周开始增加，30周达高峰，有时可达15.0×109/L，主要为NEU %增多[17]。WBC在孕期的增高机制目前尚不清楚，但有研究表明孕期外周血WBC 升高的现象，可能与边缘池的WBC释放相关[18]。本次研究结果显示，从孕早期到孕晚期，孕妇WBC、NEU %逐渐升高，LY%相对降低，差异有统计学意义(P<0.05)，因此，建立正常妊娠妇女WBC相关参数的参考区间能有效的区分生理性和病理性增高，帮助临床医生作出及时有效的判断及处理。

本研究发现，对照组、孕早期组与孕晚期组PLT结果差异无统计学意义(P>0.05)，整个妊娠过程PLT变化不明显，而孙德华等[8]调查发现，妊娠期间，PLT水平升高；石艳艳等[19]研究显示，随着孕期的增长，PLT水平逐渐下降。有文献报道，孕妇机体处于生理保护性高凝状态会导致PLT升高，而血液稀释性减少以及妊娠期雌激素水平升高增加肝脏对血小板吞噬和破坏作用，会导致PLT降低[8]。孕妇PLT水平受多因素调节处于动态平衡，维持孕期凝血状态。本次PLT研究结果与其他学者报道不完全一致，目前已有的研究报道多为横断面研究[8,19]，即不同孕期的研究对象为不同的孕妇，受个体差异影响较大，而本研究采用纵向序贯研究方法，可以消除因个体差异带来的误差。但由于受样本量与单一实验室的局限，且影响PLT检测因素较多，研究不同孕期PLT的变化规律还需要多中心多样本不同检测系统检测数据予以验证。

本研究建立的正常妊娠女性孕早期和孕晚期血细胞分析生物参考区间，更符合孕期的生理变化特点，有利于临床更好的评估正常妊娠妇女的健康水平，可作为正常孕妇的血细胞分析生物参考区间。