ELISA法和胶体金试纸条法在乙肝表面抗原检测中的应用研究

邬剑 李慧玲

摘 要：目的 研究ELISA法和胶体金试纸条法（GICA）在乙肝表面抗原检测中的准确度和特异性，分析方法的应用价值。方法 选取本院妇幼保健院检验科在2016年5月～2017年12月收集的共计460例血样标本，分别运用ELISA法及GICA法进行检测，比较检测结果。结果 ELISA法乙肝表面抗原阳性率为47.61%，GICA法阳性率为41.96%，差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA法及GICA法在对乙型病毒性肝炎表面抗原检测结果上具有密切的相关性（P<0.05）。ELISA法灵敏度和特异度均高于GICA法（P<0.05）。结论 ELISA法在阳性率、特异度及灵敏度等指标上均较GICA法高，但由于GICA法器材更为小巧、简洁直观，且无需大型设备辅助，较为广泛地应用于普查及急诊前检查中。

关键词：乙肝表面抗原；胶体金；乙型病毒性肝炎

中图分类号：R446.6 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.09.050

文章编号：1006-1959（2018）09-0155-02

Abstract：Objective To study the accuracy and specificity of ELISA and colloidal gold strip method in the detection of hepatitis B surface antigen.Methods A total of 460 blood samples were collected from laboratory Department of Maternal and Child Health Hospital from May 2016 to December 2017.ELISA and GICA methods were used to detect and compare the results.Results The positive rate of HBsAg in ELISA was 47.61%，and the positive rate in GICA was 41.96%，the difference was statistically significant （P<0.05）.The ELISA method and GICA method have close correlations on the results of surface antigen detection of hepatitis B virus（P<0.05）.The sensitivity and specificity of ELISA were higher than those of GICA（P<0.05）.Conclusion The ELISA method is more accurate than the GICA method in terms of positive rate，specificity，and sensitivity，but the GICA method is more compact，simple，and intuitive，and does not require large-scale equipment，and is widely used in census and pre-emergency tests.

Key words：Hepatitis B surface antigen；Colloidal gold；Viral hepatitis type B

乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B）是由乙型肝炎病毒引起的以肝臟病变为主的一种传染病，简称乙肝，在全球的发病率呈逐渐增高趋势，据统计，全球大约存在20亿乙肝病毒携带者[1]，乙肝是目前世界范围感染率最高的疾病。目前对乙肝的检测主要采用时间分辨荧光免疫法、酶联免疫吸附法、微粒子酶免疫分析法以及胶体金免疫层析法。在检测方法的准确度方面，尚未达成共识。我院采用酶联免疫吸附测定ELISA法与胶体金免疫层析法GICA进行检测，为比较两种方法的检测准确性，现对我院搜集的460例乙肝样本进行回顾性分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 本研究选取佳木斯市妇幼保健院检验科在2016年5月～2017年12月收集的共计460例血样标本，标本收集后分别采取ELISA法，以及GICA，在结果得出之前，血样标本存放于-20 ℃的医用冰柜中。

1.2仪器与方法

1.2.1仪器与设备 GICA试剂：艾博生物医药有限公司生产的乙肝表面抗原试剂盒（20121215）；ELISA试剂：上海科华生物技术有限公司生产的乙肝表面抗原试剂盒（20121107）；血液分析仪：原子高科股份有限公司生产Sysmex4500血液分析仪；混匀器：上海医用分析仪器厂生产75-2型微量搅拌器；微粒子酶免疫分析仪：贝克曼库尔特UniCel DxI800免疫分析系统；酶标仪：美国Molecular Devices；水浴箱：日本希森美康株式会社生产HH-W600恒温水浴箱；生化分析仪：美国nova生化分析仪；洗板机：雷杜RT-3900自动洗板机

1.2.2操作方法 全血标本离心10 min后，吸取适量血清进行检测。①GICA法将检验温度维持在20～25 ℃，温度平衡，此后将胶体金试纸条进行标记并置于工作台上。样本温度平衡后，取80 μl标本滴于试纸上。若样本中存在乙肝表面抗原，凝聚显色，两条红线为阳性，一条红线为阴性。若无红色条带出现，应重新进行试验。②ELISA法：取出试剂盒，反应条和试剂，进行室温平衡（30 min左右），样本加入微孔反应条，封存，置于37 ℃环境下1 h。将20 ml洗涤液加入480 ml蒸馏水中混匀配置洗涤液。打开反应条，将洗涤液注满反应条，静置5 s后甩干，重复5次。取试剂盒内A、B液各50 μl滴入反应条内，反应条封板，使用微量搅拌器对反应条进行混匀，置于37 ℃恒温水浴箱内保存30 min。读取450 nm波长，零值校队，后详细读取OD值。

判断值（CO）计算方法，判断值=阴性对照结果OD平均值/3+0.100。若样本血清检测发现CO值

1.3统计学方法 利用SPSS16.0软件进行数据分析，计量资料采用（x±s）表示，通过两独立样本t检验统计分析两组间均数比较，P<0.05表明差异有统计学意义。

2 结果

2.1两种方法检测乙肝表面抗原阳性率比较 GICA法测得的阳性率41.96%， 低于ELISA法测得的阳性率为47.61%，具有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2两种方法检测乙肝表面抗原的灵敏度和特异度比较 随访患者229例。ELISA法及GICA法的灵敏度及特异度不存在完全一致性，进行χ2分割检验，ELISA法灵敏度和特异度均高于GICA法，见表2。

3 讨论

我国是乙肝疾病高发国家，乙肝患者中的病毒血清学标志物对于判断病变活动状况具有重要意义。研究表明[2]在感染乙肝病毒之后血液中检测可以发现一种病毒型病毒学标志物就是乙肝表面抗原，简称为HBsAg，可在感染乙型肝炎病毒后的早期出现，该物质本质无传染性，但常与乙肝病毒伴随出现，因此临床将其视为是否感染乙肝病毒的标志。

临床采用ELISA和GICA法检测乙肝患者的血清学标志物，酶联免疫吸附实验（ELISA）即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术[3]。胶体金免疫层析法GICA通过显示样品中的分析物与结合垫上的免疫胶体金相互作用并形成复合物，出现的红色胶体金，进行检测[4]。

通过对我院应用两种方法進行检测患者血清标记物发现，GICA法检测阳性率为41.96%， ELISA法检测阳性率为47.61%，具有统计学意义（P<0.05），随访患者229例，ELISA法及GICA法的灵敏度及特异度不存在完全一致性，χ2分割检验后，ELISA法灵敏度和特异度均高于GICA法（P<0.05）。

ELISA法具有较高的诊断阳性率，并具有较高的灵敏度和特异度，同时ELISA法可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。但GICA法器材更为小巧、简洁直观，且无需大型设备辅助，可以较为广泛地应用于普查及急诊前检查中。

参考文献：

[1]李伶俐，孙俊聪.400例乙肝表面抗原胶体金试条法与ELISA法检测结果分析[J].中国医学创新，2014，28（28）：35-36.

[2]郝青华.胶体金试纸条法和ELISA法在乙肝表面抗原检测中的效果分析[J].医学信息，2014，27（34）：57-57.

[3]李小云.ELISA法和胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原结果分析[J].医学美学美容，2015（3）：225-225.

[4]曾妮，叶兴，黄河浪.乙肝免疫球蛋白联合乙肝疫苗阻断乙型肝炎母婴传播的系统评价[J].中华疾病控制杂志，2017，21（1）：48-51.

收稿日期：2018-3-10；修回日期：2018-3-20

编辑/王朵梅