生乳体细胞检测试剂盒方法与现有方法的比较

梁春梅，喻东威，常建军，宋晓东，解鑫，吴玉秋，赵媛，许璐

（内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司中心实验室，呼和浩特011500）

0 引 言

体细胞计数是目前较常用的鉴别乳区、牛只和牛群乳房健康状态的有效方法，生乳中体细胞数量高低对乳产品的质量和风味有很大的影响，特别是乳房炎乳（体细胞含量高）中有含量较多的蛋白酶和脂肪酶，会使长保质期的产品提前变质。本试验采用间接测定乳中体细胞数(SCC)来诊断隐性乳房炎的方法。其原理是在表面活性物质和碱性药物作用下，乳中体细胞被破坏，释放出DNA，进一步作用，使乳汁产生沉淀或形成凝胶,将其收集到透明塑料管中，将内容物体积与生乳中体细胞数量（显微镜检测）建立关系，直接通过管壁上的刻度（数量）得出体细胞数量,以体细胞数量的多少来间接诊断乳房炎和炎症的程度。该方法，操作简单，结果准确，判断客观，可在牛体旁完成。

1 实验

1.1 材料与设备

生乳样品。

尼康E200正立显微镜，电子天平，电热恒温培养箱，SCC-100体细胞检测仪，FOSS体细胞快速检测仪，体细胞（SCC）试剂盒，(包括20个一次性移液管、20个分析试管、20个带有排水孔的官帽、20根搅拌管、1瓶试剂)。

1.2 检测方法

（1）直接镜检法该法采用农业部行业标准NY/T 800-2004。操作时将待测的生乳样品涂抹在载玻片上成样膜，干燥、染色，显微镜下对细胞核可被亚甲基蓝清晰染色的细胞计数。

（2）SCC-100体细胞检测仪法和FOSS体细胞快速检测仪法按照厂家说明书进行操作。

（3）体细胞试剂盒法测试步骤

①向试管中加入2 m L试剂2 m L奶样,把搅拌管沿试管壁慢慢滑至试管底部，然后提至试管顶部，进行混合。在30秒内重复20次。（请勿摇晃试管，勿将搅拌管的顶部盖住。）

②牢固的盖上试管，听到两声咔哒声后将试管倒置30秒，排除液体。将试管恢复直立位置，等待几秒钟，待液体稳定，读取剩余牛奶的水平刻度。

③解读结果：试管上牛奶的水平刻度读数表示体细胞的预计数量（以千数计）。例如水平刻度读数为205，表示体细胞数为205 000 m L-1。

1.3 准确度实验

选取大量生乳样品分别用体细胞（SCC）试剂盒法、NY/T800-2004生鲜牛乳中体细胞测定方法、SCC-100体细胞检测仪和FOSS体细胞快速检测仪法检测体细胞数，分析体细胞（SCC）试剂盒法检测结果与其它检测方法是否存在显著性差异。

1.4 精密度实验

选取5个不同生乳样品，采用体细胞（SCC）试剂盒法方法进行精密度检测试验，进而验证体细胞（SCC）试剂盒的精密度试验是否符合要求。

1.5 数据分析

将菌落计数结果转化成常用对数值后，对每类样品进行统计学分析。对对数平均偏差进行配对t检验以确定不同方法之间微生物菌落总数是否有显著性差异。结果分析采用SPSS软件进行配对t检验分析。统计学分析中，P＜0.05表明有显著性差异。重复性试验用相对标准偏差进行分析。

2 结果与讨论

2.1 准确度试验

2.1.1 试剂盒法和标准方法以及仪器方法的比对结果

选取生乳样品，分别用4种方法进行检测体细胞，共做73个样品实验，检测结果如图1～图3和表1～表2所示。

本研究选择73个生乳样品进行实验,共得到292组实验数据并对数据进行统计分析。从图1、图2、图3可知体细胞（SCC）试剂盒法与国标方法保持很好的一致性，相关系数达到了0.95以上（表1）；与FOSS仪器法之间相关系数为0.925,与SCC-100仪器法之间相关系数为0.919，说明体细胞（SCC）试剂盒法与仪器快检方法的检测结果也有很高的相关性。由表2可以看出，体细胞试剂盒方法与标准方法和两种仪器方法之间均无显著性差异（P＞0.05）。

表1 成对样本相关系数

图1 试剂盒法与NY/T800-2004法对比结果

图2 试剂盒法与FOSS法对比结果

图3 试剂盒法与SCC-100法对比结果

2.1.2 快速仪器方法和标准方法的比对

由表3可以看出，标准方法与FOSS仪器方法，标准方法与SCC-100法，FOSS法与SCC-100法之间相关系数均在0.95以上；由表4可以看出，标准方法与FOSS仪器方法，标准方法与SCC-100法，FOSS法与SCC-100法之间均无显著性差异（P＞0.05）。仪器方法检测生乳样品准确度符合要求，与国标方法一致性较好。

表2 成对样本检验

表3 成对样本相关系数

表4 成对样本检验

2.2 精密度实验

随机选取5批生乳样品，采用IDEXX体细胞（SCC）试剂盒法对不同的生乳样品进行实验分析，按照四(1)的操作步骤每个样品重复测定10次计算相对标准偏差（RSD%）结果如表5所示。

由表5可以明显得到方法精密度的结果，样品相对标准偏差均小于10%，样品1到样品5相对标准偏差分别为6.18%，4.21%，6.56%，7.20%，8.15%，说明体细胞（SCC）试剂盒法精密度满足要求。

3 结 论

本研究是对体细胞（SCC）试剂盒法和《NY/T 800-2004生鲜牛乳中体细胞测定方法》中的显微镜法，以及市场上现行常用的SCC-100和FOSS快速仪器法进行对比研究，可知该方法的准确度和精密度均符合要求，且相对于其他方法操作简单，结果准确，特异性强，判断客观。

表5 不同体细胞水平生乳样品重复测定的结果(×104）m L-1

体细胞试剂盒法具有很高的精密度和准确度，能够满足生乳中体细胞数快速、准确检测。可定量测定生乳中的体细胞数，对生乳的质量检测和监测牛乳房炎都有重要作用。该方法成本低实验材料携带方便，而且不需要复杂的操作，所以既适用于大型奶牛场的专业监测，也同样满足奶农对牛奶的日常检测。