以药测证法对大鼠寒凝血瘀证关键证素的研究

徐小荟，熊丽辉

（长春中医药大学，长春 130117）

寒凝血瘀证主要原因是寒邪侵袭，损伤阳气；寒性凝滞，阳虚不运，导致气血运行不畅，瘀血内生，从而形成寒凝血瘀证。寒凝血瘀证是临床中血瘀证常见的亚型之一，存在于多种疾病中[1-6]，多涉及内、外、妇、儿、肿瘤等各科疾病，尤其以东北寒冷的气候条件下，该证较多。临床以冷痛、肿块、颜色紫暗、脉沉迟或沉涩等为主要表现，治疗以温阳活血行气为主，但三者的权重鲜有提及。在健康需求日益提高的今天，人们的要求不仅是治好病，而是要以最小的投入获得最大的治疗效果。为此，本研究以证素的权重为切入点，探讨寒凝血瘀证的关键病机，为准确治疗提供依据。

药物的筛选以古籍整理的结果为线索，通过对《中华医典》（5版）的检索，筛选出治疗寒凝血瘀证的高频药物，前3味药物分别为：附子（温阳）、当归（活血）、香附（行气）；以3味药及其不同组合对大鼠寒凝血瘀证的不同疗效，从而判断寒凝血瘀证的关键证素。

1 材料与方法

1.1 药物 当归、香附、附子药物均购于长春中医药大学附属医院农本方颗粒药房。将药物分别加10倍量沸水浸泡，制成1 g/mL生药量，自然凉后置于冰箱保存[2]。1.2 动物 Wester雌性大鼠60只，体质量（200±10）g，由长春市亿斯实验动物技术有限公司提供。在长春中医药大学动物实验室内适应性饲养7 d，室温22～25 ℃。1.3 方法

1.3.1 分组 大鼠随机分为6组，分别是正常对照组、病理模型组、附子组、香附附子组、当归香附组、香附当归附子组，每组10只。

1.3.2 造模方法 本实验根据中医的病因病机冷冻致寒凝建立寒凝血瘀证的动物模型[7-8]。正常对照组大鼠正常饲养，其他组均采用冰水冷冻法造模[9-10]，每天（于每晚6: 00 — 7: 00）将大鼠全身置于0 ℃冰水中10 min，持续刺激30 d，直到大鼠出现明显“寒凝血瘀”表征，每早8: 00去观测大鼠的活动度、饮水量、心率、二便情况等，具体表现为：蜷缩少动、反应迟钝、喜扎堆、呼吸微弱、唇周发黑、耳色暗红、爪尾部紫暗、舌暗红、被毛蓬松竖立无光泽、心率减慢、饮水量少、小便色清、大便湿烂等症状；出现蜷缩少动、反应迟钝、皮毛无光泽、耳廓紫暗或紫黑、皮肤呈现青紫瘀斑等症状，确定造模成功（该寒凝血瘀模型为感寒致瘀的实证模型）[11]。

1.3.3 实验过程 所有大鼠进行3 d的适应性喂养，第3天测量每组大鼠体质量，第4天开始造模，每天（于清晨7: 00—8: 00）对大鼠进行观测，观察大鼠的状态、皮毛颜色、耳廓颜色、爪甲颜色、二便情况；测量大鼠的活动度、饮水量、心率，活动度以cm为单位，测量时间为15 s，每早8: 00把每组灌满水的水瓶进行称重，晚上6: 00再进行称重，每天把早晚水瓶的重量做差；心率每天7: 30进行测量，做好记录。每天（于每晚6: 00—7: 00）将大鼠全身置于0 ℃冰水造模实验，除正常组大鼠不进行冰泳造模外，其他6组大鼠都进行冰泳造模实验，将大鼠全身置于0 ℃冰水中10 min，持续刺激30 d，观测大鼠10 d后逐渐出现寒凝血瘀表征，测量每组大鼠活动度、饮水量、心率，30 d后大鼠寒凝血瘀证的表征明显，表明造模成功。造模成功后的第2天对各组大鼠进行灌胃（除正常组与病理组外），第3组大鼠用附子灌胃，第4组用附子当归灌胃，第5组用附子香附灌胃，第6组用附子当归香附灌胃。每天早晚7: 00进行灌胃1次，持续15 d，观察各个不同给药组大鼠的表征变化及量化指标的改变。

1.3.4 检测指标 观察并测量表征指标及量化指标的变化，包括大鼠活动度、皮毛色泽、毛发形态、耳廓边缘血管颜色、爪子颜色、二便、舌质颜色、心率、饮水量、TNF-α、IL-1β 等。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0统计分析软件，计量资料以均数±标准差（x± s ）表示，进行方差齐性检验，组间比较采用χ2分析。

2 结果

2.1 大鼠造模前后定量表征情况比较 从活动度、皮毛色泽、周身有无紫斑、耳廓颜色等几个方面进行定量及定性评价。其中，活动度以每次在大鼠笼里（545 cm×395 cm×200 cm）的爬行距离（cm）为指标，每天测量3次取平均值；皮毛光泽分有光泽（皮毛光亮柔顺）、少泽（毛色暗，尚柔顺）、无光泽（毛色暗滞，成穗）3个等级；检测每只大鼠心率取平均值；定性指标的判断以每组发生率在60%以上者为阳性，用“有”“无”描述。结果见表1。

表1 大鼠造模前后定量表征情况比较（x± s ，n = 10）

第1天2组在活动度、心率、饮水量、耳廓颜色方面比较，差异无统计学意义（P＞0.05），第15、30天2组在活动度、心率、饮水量方面比较，差异有统计学意义（P＜0.05），表明造模成功。

2.2 各组大鼠给药后定量表征情况比较 见表2。

2.3 大鼠给药结束后各组TNF-α、IL-1β情况比较 见表3。

3 讨论

寒凝血瘀证是由于寒邪所引起的血脉不通、血行迟缓涩滞、血液壅阻于脉中或离经停聚的病理状态，表现为“血凝而不流，气血不至，血不归经，血瘀滞不行，血泣不通”，是多种疾病的发病基础或病变结果，并且也成为了近代医学研究活跃的领域之一[12-13]。

寒凝血瘀证在胸痹中出现的比率相对较高，许多学者[14-20]认为，西医的急性冠脉综合征属于中医的胸痹心痛，为本虚标实证，其中血瘀为主要标实证，血清中TNF-α、IL-1β参与机体的炎症反应，值的高低与寒凝血瘀证的轻重有密切联系，寒凝血瘀证越重TNF-α、IL-1β的值越高，反之越低。

表2 各组大鼠给药后定量表征情况比较（x± s ，n = 10）

表3 大鼠给药结束后各组TNF-α、IL-1β情况比较（x± s ，n = 10）

从实验中大鼠的表征和TNF-α、IL-1β值的高低来看，单味药附子对大鼠的各个表征缓解效果最佳，TNF-α、IL-1β值最低，其次是附子香附组。因此，温阳、行气、活血三法中，应重用温阳，或者可以理解为温阳单法可能替代三法同用的效果，对临床中减少不必要的投入提供了有益的启示，说明寒凝血瘀证的关键证素为阳虚。结合《素问·调经论》的论述：“气血者，喜温而恶寒，寒则泣而不行，温则消而去之”，由此也说明温阳对治疗寒凝血瘀证的重要性，这些研究结果能够为临床准确辨证提供有力的依据。本研究结果也为临床不必要的投入提供了依据，为小投入大收益的健康治疗原则研究探索了思路。