HPLC法同时测定胃康灵胶囊中芍药苷和甘草次酸含量

龙玉琼

（吉安市食品药品检验检测中心化学室，江西 吉安 343000）

胃康灵胶囊由白芍、白及、甘草等八味中药提取加工制成，具有柔肝和胃，散瘀止血，缓急止痛，止痛生新的功效[1]。其是急慢性胃炎，胃、十二指肠溃疡，胃出血常用药，是近几年治疗胃炎、胃溃疡很好的一种中药复方制剂，其处方出自张仲景《伤寒论》中记载的芍药甘草汤，经过现代工艺加工而成。其中臣药甘草具有抗炎、抗菌作用，也具有抗溃疡、解痉和促进胰腺分泌的作用，因此很有必要保证胃康灵中甘草的含量[2]。其现行国家检验标准为2015年版药典，其标准中仅针对君药白芍的芍药苷成分进行含量测定，为提高药品质量，保证用药安全，且同时提高检验效率，参考文献[1-5]建立本HPLC方法，同时检测了君药白芍中芍药苷和臣药甘草中甘草次酸的含量，获得了满意的结果。

1 仪器与试药

Agilent 1260 InfinityⅡ高效液相色谱仪（安捷伦公司）；BP211D电子分析天平（赛多利斯公司）；AR2140电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；KW-1000DC恒温水浴锅 (金坛市中大仪器厂)；色谱柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm ，4.6×150 mm；DAD检测器；芍药苷对照品（中国科学院成都生物研究所，批号MUST-17031901，纯度99.3%），甘草次酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号110723-201514，纯度99.3%），乙腈为色谱纯；水为超纯水；磷酸为分析纯；胃康灵胶囊样品共3批，均由当地药店购买。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5μm，4.6×150 mm；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；进样量：5μL；流动相：0.1%磷酸溶液-乙腈梯度洗脱（见表1）；检测器：二极管阵列检测器，检测波长：230 nm，以及190～400 nm紫外扫描光谱。此色谱条件下，2种待测化学物质的对照品分离度大于1.5，拖尾因子符合要求，典型的色谱图见图1。

表1 0.1%磷酸溶液-乙腈梯度洗脱

2.2 供试品溶液的制备 取样品内容物，研细，混匀，精密称取0.8 g，置50 mL烧瓶中，加入盐酸1 mL，氯仿20 mL，水浴回流提取1 h，过滤，滤液蒸干，用乙醇10 mL溶解，即为A液，备用。取上述滤渣挥干后，转移置烧瓶中，加乙醇15 mL，回流1 h，滤过，即为B液，合并A液和B液置25 mL量瓶中，用乙醇定容，混匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3 混合对照品溶液的制备 取各对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1 mL中含芍药苷0.25 mg、甘草次酸0.26 mg，即得混合对照品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 按处方量制备不含芍药和甘草的阴性样品，按2.2项下方法制得。

2.5 测定法 分别精密吸取上述混合对照品溶液，供试品溶液、阴性对照溶液、按2.1项下色谱条件分别进行检测，结果表明混合对照品分离度好，阴性对照溶液无干扰，阳性对照溶液能达到分离 (见图1～3)。

图1 混合对照品溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图

图3 阴性溶液色谱图

2.6 线性关系的考察 分别精密称取芍药苷，甘草次酸2种对照品，加乙醇稀释成一系列标准溶液，以对照品浓度为横坐标X，各自对应的峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，2种化学成分的线性回归方程、r值及线性范围见表2。

表2 2种成分的线性范围、r值及回归方程

2.7 精密度试验 精密吸取2.3混合对照液，按2.1项下色谱条件和方法，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定芍药苷和甘草次酸的峰面积，并以芍药苷和甘草次酸的峰面积分别计算相对标准偏差RSD为1.36%和1.17%。2.8重现性实验 取批号201609014供试品，分别多次进行含量的测定，考察实验的重现性，并以芍药苷和甘草次酸含量测定结果分别计算相对标准偏差RSD为1.42%和1.21%。

2.9 加样回收率试验 取已知含量的制剂（批号：201609014；芍药苷含量：0.439%；甘草次酸含量：0.234%）约0.8 g样品9份，精密称定，分别精密加入精密称定的对照品，照2.2项下方法制备成供试品溶液，按上述方法进行测定芍药苷、甘草次酸，分别计算其回收率（见表3），平均回收率分别99.5%和98.8%，其RSD分别为0.43%和0.82%。

2.10 稳定性试验 取2.3项下混合对照液，按2.1项下色谱条件和方法，于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h分别进样测定，记录色谱图，测得芍药苷、甘草次酸2种成分的峰面积在24 h内无明显变化，并以芍药苷和甘草次酸峰面积计算相对标准偏差RSD分别为1.73%和1.47%。

2.11 样品的测定 取市售3批胃康灵胶囊，分别按2.2项下方法提取各样品供试品溶液，按2.1项下色谱条件及方法测定，结果见表4。

表4 样品中芍药苷、甘草次酸含量测定

3 讨论

3.1 提取方法的选择 本研究对样品的提取条件进行了考察，因甘草次酸显弱酸性，采用盐酸酸化后用氯仿提取，提取回收率高，重现性好，芍药苷直接用溶剂乙醇提取，有良好的回收率和重现性。故本法用盐酸酸化后用氯仿提取后滤过，滤渣再用乙醇提取，该提取方法甘草次酸和芍药苷均有良好的回收率和重现性。

表3 芍药苷、甘草次酸回收率

3.2高效液相色谱法检测波长的选择 参照中国药典2015年版一部及有关文献报道[2-5]，芍药苷在230 nm处有最大吸收，甘草次酸在249 nm处有最大吸收，本实验采用DAD检测器，同时选取230 nm和249 nm两个参比波长进行比较，通过光谱图对比，230 nm两个成分峰型较好，峰高响应值相当，最后选定检测波长为230 nm。

3.3 流动相的选择 参照中国药典2015年版一部及有关文献报道[2-5]，用0.1%磷酸溶液-乙腈为流动相按不同时间、不同比例分别实验记录图谱，比较图谱，结果以表1的梯度洗脱得到的图谱最为满意，两种化学成分在15 min内均出峰，且有良好的峰型及分离度。

3.4 本方法的实用性 该方法在一个色谱条件下，可同时检测胃康灵胶囊中的芍药苷和甘草次酸两种成分，且重现性好，灵敏度高，方法简便快捷，可以作为胃康灵胶囊的质量控制。