RbAp48、miR-218、NF-κB在宫颈癌诊断及病情预测中的价值分析

耿雪红，贾艳利

(孟州市人民医院妇科，河南 孟州 454750)

宫颈HPV病毒感染是促进宫颈上皮恶性病变的重要因素，流行病学研究显示，宫颈癌的发病率可达 234－555/10万人左右[1，2]。 现阶段临床上宫颈癌的总体生存预后较差，治疗后的复发率较高，病情控制效果不理想[3]。在探讨宫颈癌的发病机制的过程中，越来越多的研究关注到了生物学因子改变在宫颈癌发生发展中的作用。微小RNA能够通过影响到宫颈上皮细胞的转录或者细胞的早期增殖调控，进而参与到恶性肿瘤的发生发展过程中。特别是miR－218等的表达变化，对于细胞核DNA复制调控、癌细胞的分化等病理过程均具有显著的影响[4，5]。 核转录因子 κB（NF－κB）能够促进癌细胞侵袭能力的增强，导致癌细胞突破宫颈基底膜上皮组织的风险明显升高[6]。视网膜母细胞瘤基因（Rb Ap48）不仅参与到了视网膜母细胞瘤的病情进展过程中，同时对于其他上皮来源恶性肿瘤的细胞周期的调控等均具有一定的作用。为了进一步揭示 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 在宫颈癌中的异常表达及其与患者病情的关系，本次研究选取我院在2015年12月至2017年8月期间收治的120例确诊为宫颈癌患者，探讨了相关指标的表达及其与患者临床病理特征的关系，报告如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 我院在2015年12月至2017年8月期间收治的120例宫颈癌患者，年龄33～67岁，平均年龄（45．52±5．57）岁；120 例宫颈癌患者均在我院行宫颈根治性切除手术，均由我院病理学证实为宫颈癌，其中鳞癌92例，腺癌28例；临床分期为IB2～IIA期，其中早期 （IIA期）27例，晚期（IB1/IB2 期）93 例；高分化（G1）11 例，中分化（G2）101例，低分化（G3）8例；淋巴结转移者 22例，无转移者98例。所有样本均在术中离体30min内取材，放入液氮保存。另选取行全子宫切除术子宫肌瘤患者24例，术前由我院液基细胞学检测无宫颈癌上皮细胞化生；年龄 33～68 岁，平均年龄（45．57±5．52）岁；HPV阳性10例，阴性14例。两组标本的年龄差异无统计学意义（P＞0．05）。本研究获我院伦理委员会批准、通过，患者及其家属签署相关知情同意。

1．2 病例选择 有完整的手术资料、病理资料；意识清晰；无严重凝血功能障碍；无肝肾功能障碍；无其它恶性肿瘤；在我院行宫颈根治性切除手术；接受本研究研究内容，具有良好依从性。

1．3 Rb Ap48、miR－218 及 NF－κB 检测方法 采用石蜡切片脱蜡至水，采用离子水进行反复洗涤，加入牛奶液体封闭抗体，封闭时间为5min，加入Rb Ap48、miR－218、NF－κB 抗体 （鼠来源，ABCUM 公司），37℃孵育2h，采用磷酸盐缓冲液洗涤3次，滴加荧光染色标记的二抗抗体 （购自abcum公司），37℃孵育30min，加入磷酸盐缓冲液进行洗涤，采用南京凯基生物制剂公司生产的显色剂进行显色，封片，镜下观察。

1．4 统计学方法 采用SPSS 22．0统计软件。采用χ2/Fisher确切概率法检验来计算计数资料的构成比的差异程度，采用Pearson分析相关性，P＜0．05则差异具有统计学意义。

2 结果

2．1 不同宫颈组织 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 表达分布情况 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 在正常宫颈组织及宫颈癌组织均有表达分布；宫颈癌组织Rb Ap48、miR－218、NF－κB 表达分布均高于正常宫颈组织，差异具有统计学意义（χ2=47．69、55．48、57．40，P＜0．01），见表 1。

表1 不同宫颈组织Rb Ap48、miR-218、NF-κB表达分布情况[n(%)]

2．2 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 与临床资料关系Rb Ap48低表达与FIGO分期有关，差异具有统计学意义 （χ2=3．94，P＜0．05）；miR－218 低表达与盆腔淋巴结转移、间质浸润深度及累及阴道壁有关，差异具有统计学意义 （χ2=4．79、7．53、7．89，P＜0．05）；NF－κB表达分布与病理分型、盆腔淋巴结转移、分化程度、肿瘤最大径及累及宫旁组织有关，差异具有 统 计 学 意 义 （χ2=26．89、47．89、17．81、38．51、13．12，P＜0．05）；Rb Ap48 低表达与患者年龄、病理分型、盆腔淋巴结转移、分化程度、肿瘤最大径、间质浸润深度、累及阴道壁、累及宫旁组织及累及血管间隙差异均无统计学意义（P＞0．05）；miR－218 低表达与患者年龄、病理分型、FIGO分期、分化程度、肿瘤最大径、累及宫旁组织及累及血管间隙差异均无统计学意义 （P＞0．05）；NF－κB 表达分布与患者年龄、FIGO分期、累及阴道壁及累及血管间隙差异均无统计学意义（P＞0．05），见表 2、表 3、表 4。

2．3 宫颈癌组织 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 相关性 经Pearson分析发现：NF－κB表达与Rb Ap48、miR－218 表 达 呈 正 相 关 关 系 （r=0．62、0．83，P＜0．01）；Rb Ap48 的表达与 miR－218 的表达呈正相关关系（r=0．53，P＜0．01），见表 5、表 6。

3 讨论

宫颈癌的病情进展，能够导致患者生存预后的恶化，增加患者的病死率[7，8]。现阶段临床上主要通过手术治疗宫颈癌，但单纯手术治疗的临床效果较为局限[9，10]。越来越多的研究认为，综合生物学靶向治疗能够在改善宫颈癌的生存预后、提高近期治疗效果等方面发挥积极的作用。本次研究通过对于宫颈癌患者血清中相关生物学指标的研究，可以为宫颈癌的生物学靶向治疗提供参考靶点，并可以为宫颈癌的早期诊断或者预后评估等提供参考。

非编码RNA对于细胞的生理功能、细胞周期调控或者细胞的早期异常增殖等过程均具有一定的影响。miR－218的高表达能够通过诱导糖蛋白磷酸化配体等方面发挥作用，促进细胞内第二信使的异常传导，增加早期细胞核DNA的病变风险。近年来临床上免疫组化分析研究表明，miR－218等微小RNA在促进癌细胞的变形能力、提高癌细胞对于淋巴结内皮细胞或者血管内皮细胞等的粘附能力等方面均具有一定的作用[11]。NF－κB对于核转录调控的影响主要通过细胞内的三磷酸腺苷或者钙离子的浓度调节，对于相关指标的影响能够显著促进上皮细胞的异常增殖，早期病变细胞的细胞周期如G1或者S期细胞比例明显上升[12]。Rb Ap48对于癌细胞的早期浸润深度的影响能够促进多种恶性肿瘤的临床分期的进展，干预癌细胞分化诱导凋亡抑制因子的表达，促进视网膜瘤、乳腺癌、卵巢癌等的发生。已有的相关研究证实了NF－κB在宫颈癌中的表达波动情况，但对于Rb Ap48或者miR－218的表达分析研究不足。

在本次研究中，通过免疫组化分析研究发现，在宫颈癌患者病灶组织中 Rb Ap48、miR－218、NF－κB等蛋白水平均呈现出了明显的高表达趋势，提示 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 等均可能参与到了宫颈癌的病情进展过程中，相关指标的异常表达可以通过下列几个方面的机制发挥作用[13]：⑴Rb Ap48的高表达能够通过促进宫颈癌上皮细胞内AKT或者NOTCH信号通路的激活，导致癌细胞的增殖调控异常，增加癌细胞的细胞核的异型性；⑵miR-218对于宫颈癌上皮细胞转录增强子或者启动子的诱导作用，增加了肿瘤干细胞的细胞活性，诱导癌细胞转移或者复发风险的提高；⑶NF-κB的异常表达，是促进宫颈癌上皮细胞浸润能力增强的重要因素，能够显著增加宫颈癌的临床病理分期的进展。曹学全等[14，15]研究者在探讨了83例样本量的宫颈鳞癌患者的资料发现NF-κB的阳性表达水平可平均上升26%以上，且患者的细胞异型性越差，细胞排列的极性越差，NF-κB等指标的异常高表达越明显。在探讨相关指标与宫颈癌临床病理特征的分期过程中发现，Rb Ap48表达与FIGO分期的表达密切相关，这主要考虑与Rb Ap48的异常表达对于癌细胞的浸润或者转移的影响有关，从而提升了临床分期，特别是Rb Ap48的异常表达对于宫颈上皮恶性肿瘤细胞浸润宫旁组织过程的促进作用，对于临床分期的影响更为显著，但本次研究并未发现Rb Ap48的表达与细胞分化或者淋巴结转移等的关系，这可能与Rb Ap48对于细胞分化诱导凋亡因子等的激活作用不足有关。miR-218表达与盆腔淋巴结转移、间质浸润深度及累及阴道壁有关，miR-218的异常表达能够促进癌细胞通过淋巴结转移，并进一步增加浸润阴道壁的风险，同时miR-218的异常表达对于宫颈间质成分的浸润，能够增加术后复发并影响宫颈癌的近期临床治疗效果。而NF-κB表达分布与病理分型、盆腔淋巴结转移、分化程度、肿瘤最大径及累及宫旁浸润均具有一定的关系，NF－κB对于宫颈癌的多种病理过程均具有一定的影响，这主要考虑与NF－κB对于癌细胞免疫逃逸、分化障碍、细胞粘附能力的影响有关。最后，Rb Ap48、miR－218、NF－κB具有一定的相关性，提示不同的生物学因子在宫颈癌的发生发展过程中可能具有一定的协同效应，但具体的内在机制仍然需要进一步的探讨。

表2 Rb Ap48与临床病理特征关系

表3 miR-218与临床病理特征关系

表4 NF-κB与临床病理特征关系

表5 宫颈癌组织NF-κB与Rb Ap48、miR-218相关性（例）

表6 宫颈癌组织Rb Ap48与miR-218（例）

综上所述，Rb Ap48、miR－218、NF－κB 在宫颈癌患者中异常表达，可作为宫颈癌诊断标记物，对宫颈癌病情预测具有潜在的重要价值。