6804例抗线粒体抗体检测的临床分析

崔星羽 ，梁从碧 ，陈慧芳 ，艾文倩 ，罗清

(1、南昌大学医学院，江西 南昌 330006；2、南昌大学第一附属医院，江西 南昌 330006)

抗线粒体抗体 （antimitochondrial antibody，AMA）是针对线粒体两层生物膜蛋白的抗体，多种组织（肝、肾、胃、心脏）细胞内都含有线粒体膜蛋白，但该抗体主要在原发性胆汁性胆管炎（primary biliary cirrhosis，PBC）病人中特征出现[1]。 PBC 是一种由自身免疫介导的胆汁淤积性肝病，组织学从最初的小叶间胆管炎逐步发展为汇管区周围炎、小叶间隔纤维化，最终进展为胆汁淤积性肝硬化[2]。该病多见于中年女性，患者血清中常常出现AMA，尤其以M2型抗体阳性为主要特征。自从AMA检测被广泛应用于临床后，发现PBC绝不是一种罕见疾病，近年来发现我国PBC发病率呈逐步增高趋势，且在自身免疫性肝炎、系统性红斑狼疮等其他自身免疫性疾病患者血清中陆续检测到AMA。本文通过间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence，IIF）和线性印迹法对6804例患者血清进行了AMA和AMA－M2检测，现报告如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 回顾统计分析南昌大学第一附属医院2015年1月1日至2017年6月26日住院和门诊6804例患者AMA检测结果以及2015年1月1日至2017年6月26日AMA阳性住院患者临床诊断，其中PBC确诊参照2015年更新的胆汁淤积性肝病诊断治疗专家共识[3]，自身免疫性肝炎确诊是依据2010美国肝病学会的诊疗指南[4]，其他自身免疫疾病如系统性红斑狼疮和类风湿关节炎均符合美国风湿病学会诊断标准[5，6]。

1．2 方法

1．2．1 血清抗AMA抗体检测 采用德国欧蒙医学实验诊断股份公司自身抗体检测抗原片 （肝脏马赛克）IIF检测患者血清AMA抗体。血清1：100稀释后与抗原基质片反应30min（同时设阳性和阴性对照），用磷酸盐缓冲液浸泡5min，加入荧光标记的二抗避光孵育30min，再同上浸泡5min，加甘油封片后荧光显微镜下判读结果。以抗体滴度≥1：100为阳性。

1．2．2 血清AMA－M2使用线性印迹法，检测试剂盒由德国欧蒙诊断公司生产。在第一次温育时，已稀释的血清(按试剂盒要求进行1：100稀释)标本与固定在膜条上的靶抗原反应，如果标本阳性，特异性抗体与相应抗原结合。在第二次温育时，结合的抗体与辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体反应，加入底物显色，肉眼直接观察结果，严格按试剂盒说明书要求操作。

1．2．3 统计学分析 用SPSS 17．0统计软件进行统计分析，计数资料采用四格表χ2检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 6804例患者的AMA总阳性率 在6804例患者中，AMA阳性率为2．35%。其中，男性AMA阳性率为0．65%；女性 AMA阳性率为5．27%，两组差异有统计学意义 (χ2=146．884，P＜0．001)， 见表 1。 在160例AMA阳性患者中，AMA亚型AMA－M2阳性 151 例，阳性率 94．38%(151/160)。

表1 6804例患者AMA阳性率性别分布比较[n(%)]

2．2 不同年龄组中AMA阳性率分析 本文将研究人群分为3个年龄组≤20岁组、21～49岁组和≥50岁组[7，8]，采用卡方检验分析各组以及男女之间AMA的阳性率，结果显示，不同年龄组阳性率差异具有统计学意义(χ2=52．278，P＜0．001)；21～49 岁组和≥50岁组中的不同性别间AMA阳性率差异同样有统计学差异(χ2=70．695、63．927，P＜0．001)，见表 2。

表2 AMA阳性患者不同性别、年龄组中AMA阳性率比较[n(%)]

2．3 160例AMA阳性者的科室分布 在各科室的送检标本中，中医科和普外科的阳性率最高，原因可能为送检标本数较少。风湿免疫科（6．63%）、神经内科（4．82%），消化科（5．40%）阳性率较高，见表 3。

2．4 88例AMA阳性患者临床诊断结果分析 在88例AMA阳性住院患者的临床诊断结果中，经过统计分析可得：56例AMA阳性患者确诊为PBC；10例AMA阳性患者确诊为自身免疫性肝炎；7例AMA阳性患者确诊为其他自身性免疫疾病；还可见于乙肝、肿瘤等其他疾病，经过比较，AMA在PBC中的阳性率最高，见表4。

表3 160例阳性患者的科室分布[n(%)]

2．5 88例AMA－M2阳性与阴性住院患者的临床诊断结果分析 结果显示，AMA－M2真阳性率在不同疾病中存在一定的差异。见表4。

表4 88例AMA阳性的临床诊断结果[n(%)]

3 讨论

6804份临床就诊患者AMA检测标本中的阳性率为2．35%，阳性患者中女性与男性的阳性率比为3．52：1。AMA总体阳性率与国内的报道结果一致[9]。且分析不同年龄阶段AMA阳性率发现≥50岁女性组的阳性率最高，这与该病常见于中年女性是相符的[10]。

本研究表明AMA阳性的患者除了出现在中医科 （8．89%）、 风湿免疫科 （6．63%）、 消化科（5．40%），其在普外科、干部病房和神经内科的阳性检出率也较高。其原因是在本院以AMA为特征性抗体的PBC主要纳入中医科、风湿免疫科和消化科就诊治疗[11]，而普外科、干部病房和神经内科检出率高是因为其送检率低。旨在提示临床工作者加大对AMA检测的关注，准确判断AMA阳性出现与PBC的关联性，以防误诊、漏诊。

通过对160例AMA阳性患者的分析，本研究发现AMA的亚型AMA－M2阳性的患者为151例，阳性率为94．38%，其原因是AMA存在M2、M4、M8等9个亚型，以M2特异性最高[12]，故临床上也以检测AMA-M2为主。此外，调查88例AMA阳性住院患者的诊断结果，发现56例AMA阳性患者确诊为PBC。虽然AMA阳性对PBC的确诊有一定的意义，但其诊断敏感性和特异性为90%～95%[13]。结合此次数据分析，AMA阳性对PBC预测倾向性不高。继而对上述88例AMA阳性住院患者中AMA亚型AMA-M2做进一步检测发现：在56例PBC确诊患者中，55例AMA-M2检测结果阳性，真阳性率达到98.21%。研究结果与其他研究报道是一致[14-16]，AMA-M2对于PBC的诊断较AMA更特异，疾病倾向性高。因此，AMA-M2对于PBC的早期诊断具有巨大的应用价值。故临床医生应结合临床表现和AMA、AMA-M2的联合检测来提高PBC的确诊率，有效地避免误诊和漏诊。

通过本次分析，了解了AMA在男女及其各年龄阶段中的分布，研究了AMA阳性患者在各科室中的分布及其阳性率的差异，探讨了AMA阳性住院患者的疾病类别及AMA和AMA-M2在不同疾病中的阳性率，检测AMA及AMA-M2在PBC的早期诊断与治疗具有重要意义，因此临床工作中应重视AMA及AMA-M2在疾病诊断中的临床价值。