UPLC-Triple TOF MS∕MS技术分析打箭菊总黄酮部位的化学成分

泽仁达瓦林朝展

（1.西藏藏医学院，西藏拉萨850000；2.广州中医药大学临床药理研究所，广东 广州 510405）

藏药“阿夏塞尔郡”又名打箭菊，为菊科匹菊属植物川西小黄菊 Pyrethrumta tsienense（Bur.Et France.）Ling的干燥花序，主产于中国青海、四川、云南和西藏等地，是藏族常用药，具有活血散瘀、祛风除湿、消炎止痛的功效，临床上常用于治疗头痛、头伤、跌扑损伤、湿热、疮疡、伤口流黄水、黄水疮、肝炎等［1-2］。打箭菊具有抗缺氧［3］、保肝［4］、抗炎镇痛［5］等药理活性，目前报道较多的成分主要是黄酮类化合物，建立打箭菊总黄酮部位化学成分的分析方法对于其质量检测和控制具有重要的意义。

1 仪器与试剂

AB Sciex Triple TOF5600+（美国Sciex公司），Peak View数据处理系统。乙腈为色谱纯（德国Merck公司），甲酸为色谱纯（北京Dikma公司），实验用水为超纯水。打箭菊于2014年6月采自西藏林芝地区，并经西藏藏医学院康萨·索朗其美教授鉴定为菊科匹菊属川西小黄菊Pyrethrumta tsienense（Bur.Et France.）Ling，凭证标本（PT-201406）现保存于广州中医药大学临床药理研究所。

2 方法与结果

2.1 样品提取

取打箭菊药材粗粉2.0 kg，依次加入20倍量和15倍量80%乙醇，加热回流提取两次，合并提取液，减压回收至无醇味，湿法上样于4.0kg大孔树脂柱（内径15cm，装柱高35cm，柱体积约3L），水洗6个柱体积后用30%乙醇洗脱，洗脱至流出液澄清，收集30%乙醇洗脱液，回收溶剂，冷冻干燥备用，用紫外分光光度法［6］测定总黄酮纯度为65.94%.

取30%乙醇洗脱部位适量，加甲醇溶解，配置成10μg∕mL的供试品溶液，待测。

2.2 色谱及质谱条件

色谱条件：phenomenex Luna 5μm C18（2）100A 150mm×2.0mm色谱柱；流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱程序：0-5 min，80%A 20%B；5-10 min，70%A 30%B；10-15 min，60%A 40%B；15-20 min，40%A 60%B；20-25 min，20%A 80%B；25-30 min，0%A 100%B 保持 5 min。流速 0.5 ml∕min；进样量：5 μl，柱温：25 ℃。

质谱条件：电喷雾离子源（ESI），负离子扫描模式；喷雾电压为4500 V；干燥器温度：500℃，干燥气流速：5 L∕min；雾化气压力：45 psi；毛细管电压：3500 V；碎裂电压：100 V；一级碰撞能量：5 V，二级碰撞能量：45 V。质谱扫描范围为m∕z 100-1000。

2.3 UPLC-Triple TOF MS∕MS分析

打箭菊总黄酮部位的UPLC-Triple TOF MS∕MS分析的总离子流色谱图如图1所示，18个主要的色谱峰得到较好的分离。由于打箭菊中主要的化学成分是黄酮类化合物，用负离子电喷雾做质谱检测所得的总离子流图有较好的信噪比，对应化合物的一级质谱图都呈现出很强的准分子离子峰。根据一级质谱给出的准分子离子峰信息，和二级质谱的结构碎片信息，并结合UPLC的保留时间以及参考文献报道，共推测出了13个化学成分的可能结构，这些成分在打箭菊及菊科植物化学成分分析中都曾有报道［7-12］。其中通过与对照品的保留时间、一级质谱和二级质谱信息进行比对，5号、6号、9号、10号、15号和18号峰得到了确证，分别是7，8-二羟基香豆素、咖啡酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、木犀草素或山奈酚，对照品色谱图见1，图2为6个对照品的质谱图。其余推测化合物信息见表1。表1给出已鉴定和已推测的化合物的保留时间、一级质谱、二级质谱和分子式信息。

表1 打箭菊总黄酮的化学成分分析

3 讨论

打箭菊是藏药中最常用的药材之一，其黄酮类成分是其主要药效成分类群之一，实验研究了打箭菊总黄酮的化学成分，建立了UPLC-Triple TOF MS∕MS分析打箭菊总黄酮的方法。UPLC-Triple TOF MS∕MS联用方法能够在线获得准确的分子量信息和化合物的结构信息，从而能快速、准确对打箭菊药材进行成分分析检测，为该药材的进一步研究提供了参考依据。

图1 总离子流色谱图

图2 对照品质谱图