大蒜提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果观察

郭永刚，胡立磊，樊克锋，陈志明，朱小龙

（1.河南牧业经济学院，郑州450011；2.河南医学高等专科学校，郑州451191；3.江西省动物疫病预防控制中心，南昌330096；4.江西省永新县畜牧兽医局）

大蒜属于百合科葱属植物蒜的鳞茎，味辣、性温，在我国种植广泛，在人们日常生活中是一种常用的调味品，广泛应用于食品行业[1]。目前，随着对于大蒜及其提取物研究的深入，该类物质也逐渐开始应用于医药和畜禽、水产养殖等行业[2-3]。研究表明，大蒜中所含的抗菌成分如大蒜素对多种细菌和寄生虫等均有抑制和杀灭作用，而且该类物质无药物残留、无耐药性，可替代部分临床使用的抗生素及合成抗菌药物。本试验通过研究大蒜提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果，旨在为临床合理使用大蒜提取物防治细菌感染性疾病提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 大蒜产自河南省郑州市中牟县，购于陈寨蔬菜市场。

1.1.2 菌种大肠杆菌（ATCC25922），金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，购自中国兽医药品检查所，由河南牧业经济学院药剂学实验室保存。

1.1.3 试剂无水乙醇、MH营养肉汤培养基、普通琼脂培养基。

1.2 方法

1.2.1 大蒜提取物液的制备选取成熟、干燥的大蒜剥皮清洗干净并晾干表面水分，准确称取100g，用研钵捣成糊状，加入95%的乙醇400mL，室温萃取2h,以3500r/min离心20min，取上层清液于烧杯中，转入旋转蒸发仪中以转速60r/min，温度50℃浓缩至浓度为1g/mL的大蒜提取液，提取液用微孔滤膜过滤，所得滤液于4℃避光保存备用。

1.2.2 菌液制备 将本实验室分离保存的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别接种于琼脂培养基，37℃培养24h，选择典型菌落接种于MH营养肉汤培养基中，37℃培养24h后，采用平板计数法进行菌落计数，将菌液稀释至浊度为1x108cfu/mL备用。

1.2.3 抑菌试验采用牛津杯法测定抑菌圈直径。取灭菌后45℃左右的琼脂培养基15mL，导入已灭菌的平皿中，培养基厚度约为4mm，待冷却凝固后，将制备好的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌液分别稀释至1x105cfu/mL，分别取150μL用L形玻璃棒均匀涂布琼脂平板。以无菌操作将灭菌的牛津杯放置在涂菌后的平皿培养基上，轻加按压使其与培养基之间没有空隙，分别向牛津杯中滴加大蒜提取液0.1mL，将平皿置37℃培养箱中培养24h，用游标卡尺测定抑菌圈直径，取平均值，每株菌做3次重复。牛津杯试验结果的判定标准：抑菌圈直径大于20mm为非常敏感，15-20mm为高度敏感，10-15mm为中度敏感，小于10mm为低度敏感，0为不敏感。

1.2.4 MIC、MBC测定采用试管二倍稀释法，向灭菌试管中加入MH营养肉汤培养基1mL，依次编号，在第1管中加入大蒜提取液1mL，混匀后吸取1mL至第2管，依次类推至第9管，弃去最后吸取的1mL，然后于每管中加入0.1mL浓度稀释至1x108cfu/mL菌液，第10管加入菌液不含药液作为阳性对照，第11管只加营养肉汤作为阴性对照，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌依次分别测定最小抑菌浓度。第1至9管大蒜提取液浓度分别400、200、100、50、25、12.5、6.3、3.11.6mg/mL，37℃培养24h，观察结果。当阳性对照管有细菌生长（浑浊），阴性对照管无细菌生长（透明），试验组以肉眼观察无菌生长，无菌生长的最高稀释度即为本大蒜提取液的MIC。从无菌生长的各试管中吸取培养物0.1mL接种到普通琼脂培养基上，37℃培养24h，以菌落数少于5个视为无细菌生长，以无细菌生长的药物最低浓度作为本药物的MBC。为减少误差，本试验重复3次，取2次结果相近的值作为最终值。

2 结果

2.1 抑菌试验结果

表1 大蒜提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径（mm）

由表1可知，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对大蒜提取物均为高度敏感，其中大蒜提取液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果优于大肠杆菌。

2.2 最小抑菌浓度试验结果

大蒜提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别见表2和表3。

表2 大蒜提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC

表3 大蒜提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MBC

由表2可知，本试验所用大蒜提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC值分别为50mg/mL和25mg/mL；由表3可知，大蒜提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MBC值分别为50mg/mL和25mg/mL。

3 讨论

大蒜提取液中有抗菌作用的主要有效成分是大蒜素，其主要成分为二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚等有机硫化合物。大蒜提取有效成分方法不同，其提取物主要成分也有差异，本试验参考其他学者的试验方法[4]，采用95%乙醇作为提取溶剂，通过浸提大蒜研磨液并浓缩制得大蒜提取液。结果表明，本试验所得提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较好的抑菌效果，该结果与其他文献报道的研究结果基本一致[5-7]，表明大蒜及其提取物可以应用于临床动物细菌感染性疾病的防治。