高效液相色谱法测定鸡蛋中磺胺类药物残留

马世柱 陈楠 黎小鹏 周嘉诚 梁锦填 高文彬 林俊杰

摘要 本文应用高效液相色谱法检测鸡蛋全蛋中磺胺嘧啶（SD）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺地索辛（SDM）和磺胺喹噁啉（SQ）7种磺胺类药物（SAs），并对提取、净化等前处理条件以及检测条件进行优化。结果表明，鸡蛋样品中的磺胺类药物适宜采用乙酸乙酯进行提取，35 ℃减压旋蒸浓缩至近干，经水饱和正己烷洗涤净化或碱性氧化铝SPE净化均可以除去大部分鸡蛋中的干扰物，满足检测要求；以0.1%磷酸∶乙腈（V∶V=80∶20）作为流动相，20 min内7种磺胺类药物均能达到基线分离。本方法提取效果良好，结果重复性及回收率满足实际检测需求，2种净化方法使用灵活，适合于鸡蛋中7种磺胺类药物残留量的测定。

关键词 高效液相色谱法；鸡蛋；磺胺类药物；残留

中图分类号 O657.7+2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）11-0235-02

Abstract In this paper，7 kinds of sulfonamides（SAs），such as pyrimidine（SD），sulfamethazine（SM2），sulfamethoxypyridazine（SMP），sulfa-monomethoxine（SMM），sulfamethoxazole（SMZ），sulfadimethoxine（SDM） and sulfaquinoxaline（SQ）were detected by HPLC method，and the extra-ction and purification conditions and testing conditions were optimized.The results showed that the sulfonamides in egg samples were suitable to be extracted by ethyl acetate，decompressed and evaporated to dryness at 35 ℃.Water saturated hexane scrubbing or alkaline alumina SPE purification could remove most of the interferents in eggs and meet the detection requirements.Using 0.1% phosphoric acid ∶ acetonitrile（V∶V=80∶20）as the mobile phase， 7 kinds of sulfonamides were able to achieve the baseline separation in 20 min.The extraction effect was good by this method，and repeatability and recovery rate of the result met the actual detection requirements.The 2 kinds of purification methods were flexible and suitable for the determination of 7 kinds of sulfonamides residues in eggs.

Key words HPLC；egg；sulfonamides；residue

随着人们生活水平的日益提高，人们对动物性食品的卫生质量与安全的要求也越来越高，不仅对营养与味道要求高，还要求食品卫生且经济。一方面，兽药（其中包括添加剂）除保障动物健康生长以外，还可以降低动物发病率以及死亡率，同时提高饲料的利用率，促进动物的生长发育并改善动物产品的品质；但是另一方面，兽药的使用又会导致动物性食品中含有兽药残留，这种残留会给人体的健康带来不可逆转的危害。因此，兽药残留问题也日益受到了世界各国的重视。

磺胺类药物（Sulfonamides，SAs）是一种化学合成抗生素，其基本母核是对氨基苯磺酰胺，是具有这一类共同母核的药物总称[1]。随着经济的日益增长，供过于求的市场现状促进了现代农业的集约化、规模化以及标准化发展，这使得兽药特别是磺胺类药物在水产品养殖等行业的使用量大大加大。而在我国，限用药物、非法药物滥用现象屡见不鲜，这引发了我国食品安全事件频发的严重后果[2]。因此，研究动物性兽药残留的检测方法变得尤为重要，我国也在继续改进相关方面的技术检测，以防止重大食品安全事故的发生。因此，对SAs的化学性质、作用机理及其残留与检测方法的研究是关系到畜牧业健康发展的重要问题之一[3]。本文应用高效液相色谱法，对鸡蛋全蛋中磺胺嘧啶（SD）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺地索辛（SDM）和磺胺喹噁啉（SQ）7种SAs的前处理及仪器检测条件进行了研究。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent高效液相色谱仪（HPLC-DAD）；多功能超纯水系统（S20，Spring）；旋转蒸发仪（含真空泵，IKA-RV10，IKA）；臺式冷冻高速离心机（A2316R，上海安戈仪器有限公司）；固相萃取装置（天津奥特赛思仪器有限公司）；多功能超纯水系统（Spring-S20，厦门锐思捷科学仪器有限公司）；百分之一电子天平（CP2102，Ohaus）。

样品前处理采用的乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、无水硫酸钠、盐酸均为分析纯，广州化学试剂厂生产；流动相采用的0.1%磷酸水溶液和乙腈混合液均为色谱纯，德国默克化学试剂有限公司生产；0.22 μm有机滤膜，天津津腾实验室设备有限公司生产。标准品均由农业部环境保护科研监测所生产，浓度均为100 mg/L，使用前用甲醇将其稀释成所需浓度的混合标准溶液。

1.2 试验方法

1.2.1 样品的提取与净化。

（1）取鸡蛋5.00 g±0.05 g于50 mL离心管，加入20 mL乙酸乙酯和8 g无水硫酸钠，涡旋振荡2 min（或摇床振荡15 min），5 000 r/min冷冻离心5 min，用一次性塑料吸管取上层清液移入50 mL圆底烧瓶。鸡蛋残渣中加入20 mL乙酸乙酯重复提取，用玻璃棒搅匀结块残渣，并用少量乙酸乙酯洗涤玻璃棒，之后倒入离心管，涡旋振荡2 min（或摇床振荡15 min），5 000 r/min离心5 min，合并乙酸乙酯层，35 ℃减压旋蒸至近干[4]。

（2）向圆底烧瓶中加入5.00 mL 流动相[0.1%磷酸水溶液∶乙腈（V∶V=80∶20）]，混匀超声1 min，移入15 mL离心管，向离心管中加入8 mL水饱和正己烷，涡旋混匀1 min，5 000 r/min离心5 min，弃去上层正己烷，重复上述操作1次后取2 mL下层清液，过0.20 μm滤膜，弃去前几滴溶液后转入2 mL样品瓶供HPLC-DAD分析。

1.2.2 色谱条件。色谱柱为ZORBAX SB-C18柱，150 mm×4.6 mm，粒径5.0 ？滋m；流动相为0.1%磷酸水溶液∶乙腈（V∶V=80∶20）；柱温为25 ℃；流速为1.0 mL/min；进样量取50 ？滋L；检测器使用DAD检测器，检测波长为270 nm，采集时长为20 min。

2 结果与分析

2.1 标准色谱图

水产品中SAs残留检测的流动相一般采用乙酸水与甲醇或乙腈按一定比例混合[5]。根据文献报道的测定磺胺类药物的反相HPLC流动相体系[6-7]、农牧发〔2001〕38号《动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法-高效液相色谱法》[8]的磷酸水-乙腈体系，同时参考多个流动相体系进行色谱方法优化试验，并比较了不同浓度及比例的磷酸、乙酸、甲酸水与乙腈流动相体系。结果表明，水相pH值越低或有机相比例越高，均会提前目标物的出峰位置，但同时也造成部分药物基线分离较差，甚至保留时间重叠，对比多组数据结果，选取了0.1%磷酸水溶液∶乙腈（V∶V=80∶20）作为流动相，在25 ℃柱温条件和1 mL/min流速下，7种SAs能达到基线分离，峰型尖锐，峰对称性较好。7种SAs的标准色谱图见图1。

2.2 线性范围和检出限

在20～500 μg/L浓度范围内，以峰面积（y）为纵坐标，以标准品浓度（x）为横坐标，根据五点校正法绘制标准曲线，拟合得出标准曲线在20～500 μg/L浓度范围内7种SAs的线性回归方程及相关系数，以3倍信噪比来确定检测限，10倍信噪比来确定定量限，结果见表1。

由表1可知，该仪器方法测定7种SAs在20～500 μg/L内线性优异，SAs的相关系数在0.999 63～0.999 99之间，其线性响应范围完全满足检测的要求，说明该仪器方法用于定量检测具有很好的可靠性。

2.3 回收率和精密度

通过在空白样品中添加不同浓度的SAs，以样品加标回收率和样品结果重复性来评价方法的可靠性。选择100、40、20 μg/kg共3个添加浓度进行试验，按照2种净化方法同时进行同一添加浓度的前处理试验，每个添加浓度做6个平行加标样，计算结果扣除样品空白，测定结果用平行测定后的算术平均值表示，保留3位有效数字，并计算求得平均回收率和相对标准偏差，见表2。

由表2可知，2种净化方法总体上均获得了良好的回收率，RSD值均<10%，说明2种方法的重现性符合要求，结果准确可靠，可以满足鸡蛋中SAs含量检测的要求。

3 结论

本文应用高效液相色谱法，对鸡蛋全蛋中磺胺嘧啶（SD）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺地索辛（SDM）和磺胺喹噁啉（SQ）7种SAs的前处理及仪器检测条件进行了研究。结果表明，鸡蛋样品中的SAs采用乙酸乙酯振荡提取，无水硫酸钠脱水盐析，提取液经35 ℃减压旋蒸浓缩，复溶物通过水饱和正己烷洗涤或碱性氧化铝SPE净化后，均可以除去鸡蛋样品中大部分的色素、蛋白质及脂肪，满足HPLC-DAD检测要求；色谱条件以0.1%磷酸∶乙腈（V∶V=80∶20）作为流动相，7种SAs均能达到基线分离，2种净化方法的回收率良好，其中SPE净化法检测限为3.35～17.84 μg/kg，定量限低于60 μg/kg。本方法提取效果良好，结果重复性及回收率满足实际检测需求，适合于鸡蛋中7种SAs残留量的测定。

4 参考文献

[1] 张艳，李彦文，莫测辉，等.高效液相色谱-荧光测定蔬菜中喹诺酮类抗生素[J].广东农业科学，2009（6）：176-180.

[2] 于淼.养殖业中磺胺类药物残留的危害及现状[J].现代畜牧科技，2015（2）：133-134.

[3] 姜正军，霍兰芝.我国蛋品加工业的现状与对策[J].食品科技，2011（3）：4-6.

[4] 国家质量监督检验检疫总局，国家标准化管理委员会.畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法：GB/T 20759-2006[S].北京：中国标准出版社，2007.

[5] 农业部，卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定 高效液相色谱法：GB 29694-2013[S].北京：中国标准出版社，2014.

[6] JIANG S，ZHAO Y，JIN Y，et al.UHPLC-MS/MS Determination of Resi-dual Amounts of 19 Veterinary Drugs in Animal Tissues[J].Physical Test-ing & Chenmical Analysis，2010，46（11）：1319-1322.

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[8] 農业部.鸡蛋中磺胺喹噁啉残留检测高效液相色谱法：农业部1025号公告-15-2008[S].北京：中国标准出版社，2008.