两种孵化温度对中华鳖性别分化的影响

（1.河南师范大学水产学院,河南新乡 453007；2.洛阳市渔业船舶检验与水产技术推广站，河南洛阳 471000）

中华鳖（Pelodiscus sinensis），俗称团鱼、甲鱼等，主要分布在越南、日本、朝鲜、俄罗斯等国，我国主要分布在长江、黄河流域[1]。中华鳖营养价值较高，具有一定药用价值，其深受消费者喜爱。在养殖过程中，雄性中华鳖较雌性中华鳖生长速度快，因此培育全雄鳖是提高养殖效益的途径之一[2-3]。

爬行动物的性别决定机制有染色体性别决定型和环境性别决定型。研究表明，温度对龟鳖目中许多物种的性别有决定性影响，其中乌龟（Chinemys reevesii）[4]，中华条颈龟（Mauremys sinensis）[5]，黄喉拟水龟（Mauremys mutica）[6]等性别决定方式均属温度依赖型性别决定。关于中华鳖的性别分化机制，早期研究认为其温度对中华鳖性别分化有较大的影响[7-8]。Mu等[9]对不同孵化温度条件下的个体染色体进行了分析，发现不同个体的表型性别与性染色体类型均一致，表明温度未影响中华鳖的性别分化。因此特设计试验，以求探明孵化温度与中华鳖性别比例间的关系，为人为控制中华鳖性别分化提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

实验所用中华鳖卵来源于信阳固始县晨源水产养殖公司同一日收集的受精鳖卵。孵出后的稚鳖前期投喂鱼糜，后期以投喂鳖类专用饲料为主。

1.2 试验方法

1.2.1 孵化

将中华鳖卵均匀埋在装满蛭石的塑料盆中，分别置于温度为27℃、32℃的恒温孵化箱中进行孵化。定期向蛭石表面喷水，维持环境湿度在80%左右。并定时翻动鳖卵保持透气，以免鳖卵表面堵塞导致变质。

1.2.2 稚鳖饲养

出生后稚鳖体重约3～5 g，于盆中暂养2～3 d后选择生理状态相近、体形匀称的健康个体，浸浴低浓度高锰酸钾水溶液消毒并放入稚鳖池继续培养，放养密度以50只/m2为宜。

不同温度下孵出的稚鳖在相似环境下隔离培养，设投饲台以供稚鳖取食。日常管理过程中保证不同孵化温度的稚鳖生存环境相似，并及时清除剩余饵料、定期消毒，防止水质污染。

1.2.3 性别鉴定

雌鳖体较厚，背甲圆形，裙边较宽，尾部不外露。腹甲后缘略向内凹入,尾部钝锥体形,末端骤然变细呈点状或者内卷，泄殖孔小且靠近尾部末端，后肢间距大；雄鳖体薄，背甲椭圆形，裙边较窄，尾端露出裙边。腹甲后缘弧形，尾部尖呈锥体形，泄殖孔距尾部末端有小段距离，后肢间距小[10]。

当稚鳖第二性征不易辨别时，可通过性腺组织切片辨别其性别。方法如下：取稚鳖性腺-中肾复合体（AKG），Bouin′s试剂固定18－24 h后用70%的酒精洗涤去颜色。梯度酒精洗涤脱水，每浓度处理10-30 min。将脱水后的性腺组织依次浸没二甲苯无水酒精混合液（二甲苯：无水酒精=1∶1）10-30 min、二甲苯溶液10-30 min，使之透明。将透明处理的性腺组织依次用二甲苯：石蜡（体积比1∶1） 处理 10-20 min、56-70℃熔点的石蜡处理20-40 min，重复两次后，将脱水透蜡的组织样品进行包埋。使用石蜡切片机切片，于37℃水浴展片后置于50℃左右的烤片机上烤片固定。染色采用苏木精-伊红复染法，然后用中性树胶封片。

2 结果与分析

2.1 孵化结果

不同温度下中华鳖的孵化率不同（表1）。在一定温度范围内，随着温度升高，中华鳖的孵化率升高。32℃下孵化率达95.3%，27℃下孵化率较低，约为91.25%。

表1 两种孵化温度下受精卵孵化情况Tab.1 The situation of the fertilized eggs which hatched at two different temperature

2.2 性别鉴定结果

雄性稚鳖的精巢切片可观察到精巢壁分外层腹膜和内层白膜，其中不规则的精细管是由白膜向内部延伸形成的。精细管间被滤泡细胞分隔，雌性稚鳖的卵巢切片可观察到卵巢膜和基质将卵巢分成数个小室，原始的卵泡在此发育。卵原细胞无滤泡[10]。

图1 中华鳖稚鳖精巢与卵巢比较Fig.1 Comparison of the nests and ovaries of the juvenile P.sinensis

孵化温度对中华鳖性别分化有影响（表2）。在一定温度范围内，雄性孵化比例随孵化温度变化而改变。27℃下孵化的中华鳖雌性个体多于雄性个体，雄性个体只占36.17%；而32℃孵化的中华鳖雄性比例明显提升，达到49.06%。

表2 两种孵化温度下稚鳖的性别比例Tab.2 The sex ratio of juvenile P.sinensis at two incubation temperatures.

3 讨论

3.1 不同环境因素对中华鳖性别比例、孵化率及后续生长发育的影响

Georges等[11]研究表明，不同于由基因决定性别的哺乳动物和鸟类，爬行动物的性别由遗传物质和环境因子共同决定，孵化过程中温度是影响最大的环境因子。同时Ji等[12]认为，孵化温度对中华鳖的性别没有影响。本次实验结果表明：32℃下雄性比例较高，达49.06%，27℃下雄性比例较低，为36.17%，这与朱道玉等[7]，聂刘旺等[8]的研究结果一致。本次实验还发现，爬行动物的孵化成功率受到孵化温度的影响。在一定温度范围内，孵化温度越高，孵化成功率越高。另外王玲等[13]研究表明环境湿度对中华鳖卵的孵化率也有一定影响。中华鳖卵失水速率与孵化期环境湿度相关，受精卵内容物过于干燥将会影响胚胎成活率。环境湿度控制在80%～82%左右时，孵化率可达95%以上，且可有效缩短中华鳖孵化时间。

此外，本实验过程中发现，同一温度下不同直径的中华鳖卵孵化出的稚鳖在后续生长发育过程中，稚鳖的生理状态、质量与孵化前鳖卵的形态存在关联。直径、重量大的鳖卵比较小的鳖卵孵化期略长（平均长1～2 d），其孵化出的稚鳖生长速度快、存活率高。推测原因，可能是较小的鳖卵中所含营养物质有限，虽能供给正常孵化，但胚胎发育后期营养不足会影响稚鳖生长。这种特性为生产实践中筛选中华鳖卵提供了依据，为保证稚鳖体内积存营养物质足够供其后续健康发育及顺利越冬，应选择大小适中、外观均匀的受精卵（卵重3 g以上，直径1.8 cm左右）进行孵化。

研究孵化温度对中华鳖性别分化的影响，不仅为爬行动物性别决定机制的研究提供资料，在生产实践上也具有重要意义。养殖者可通过控制孵化温度获得自己所需性别的中华鳖，从而有目的地进行人工育苗。