42%氟茚唑菌胺·嘧菌酯悬浮剂高效液相色谱方法研究

狄凤娟，江忠萍，王胜翔，姜宜飞*

(1.山东省农药科学研究院，山东 济南 250000；2.农业部农药检定所，北京 100125)

1 前言

嘧菌酯化学名称为(E)-2-{2-[6-(2-氰基苯氧基)嘧啶-4-基氧]苯基}-3-甲氧基丙烯酸甲酯，是一种新型甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂。此类化合物的作用机制是抑制菌体细胞内线粒体的呼吸作用，破坏细胞中能量的合成，从而对致病菌体孢子的萌发、菌丝的生长和孢子的形成等生长过程产生抑制作用[1]。氟茚唑菌胺属于琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHI)类杀菌剂，杀菌谱广泛。此类化合物具有内吸性，通过抑制病原菌线粒体呼吸作用中的琥珀酸脱氢酶而发挥作用[2]。由于SDHI类杀菌剂作用位点单一，易产生抗性，与同为线粒体呼吸作用抑制剂的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂复配，因两者作用位点不同，不易产生交互抗性而很好的解决这一问题[3]。

目前氟茚唑菌胺·嘧菌酯悬浮剂的分析方法未见报道。本文采用反相高效液相色谱法，在同一色谱条件下对42%氟茚唑菌胺·嘧菌酯悬浮剂进行分析，该方法操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液 乙腈：色谱纯；超纯水：电阻率18.2MΩ·cm(25℃)；磷酸：分析纯；磷酸水溶液：ψ(H2O∶H3PO4)=1 000∶1；氟茚唑菌胺标样：已知质量分数99.2%；嘧菌酯标样：已知质量分数99.7%；均由农业部农药检定所提供；42%氟茚唑菌胺·嘧菌酯悬浮剂(由某公司提供)。

2.2 仪器 高效液相色谱仪：Agilent 1100，具有二极管阵列检测器和自动进样器；Agilent色谱工作站；Millipore超纯水制备系统；色谱柱：250mm×4.6mm(id)不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C18、5μm填充物； 过滤器：滤膜孔径约0.45μm。

2.3 液相色谱操作条件 流动相：ψ(乙腈∶磷酸溶液)=60∶40；流量：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：254nm；进样体积：5μL；保留时间：氟茚唑菌胺约6.9min，嘧菌酯约9.6min。

42%氟茚唑菌胺·嘧菌酯悬浮剂的高效液相色谱图(图1)。

图1 42%氟茚唑菌胺·嘧菌酯悬浮剂高效液相色谱图

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制 称取氟茚唑菌胺和嘧菌酯标样各0.015g(精确至0.000 02g)，置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.4.2 试样溶液的配制 称取含氟茚唑菌胺0.015g的试样(精确至0.000 02g)，置于100mL容量瓶中，先加入5mL水使试样分散，再用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤。

2.4.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.4 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中氟茚唑菌胺(嘧菌酯)峰面积分别进行平均。试样中氟茚唑菌胺(嘧菌酯)的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

(1)

式中：

A1──标样溶液中氟茚唑菌胺(嘧菌酯)峰面积的平均值；

A2──试样溶液中氟茚唑菌胺(嘧菌酯)峰面积的平均值；

m1──标样的质量，g；

m2──试样的质量，g；

P——标样中氟茚唑菌胺(嘧菌酯)的质量分数，%。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择 通过Agilent 1100高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得氟茚唑菌胺、嘧菌酯的紫外波长扫描图(图2)。从图中可以看到氟茚唑菌胺最大吸收波长在205nm附近，嘧菌酯最大吸收波长在195nm附近，为了能兼顾这两种化合物的检测，同时减少溶剂的干扰，因此将检测波长定为254nm。

图2 氟茚唑菌胺和嘧菌酯紫外吸收谱图

色谱柱选择常用的ZORBAX SB-C18反相柱。依据氟茚唑菌胺、嘧菌酯物化性质，用乙腈作为溶剂溶解样品，并选择乙腈和水作为流动相，为了得到更好的分离效果和峰形，在1 000mL水里加入1mL磷酸。将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，最终确定流动相为ψ(乙腈∶磷酸溶液)=60∶40，在流速1.0mL/min时，有效成分与杂质能得到很好的分离，峰形对称，基线平稳，并且分析时间较短，提高了工作效率。

3.2 分析方法的线性相关性试验 按2.4.1分别配制5个不同质量浓度的氟茚唑菌胺(嘧菌酯)标样溶液，使氟茚唑菌胺的质量浓度分别为0.556 0、0.278 0、0.139 0、0.069 50、0.034 75mg/mL，嘧菌酯的质量浓度分别为0.655 5、0.327 8、0.163 9、0.081 95、0.040 98mg/mL。在上述色谱操作条件下进行分析，以氟茚唑菌胺(嘧菌酯)质量浓度(mg/mL)为横坐标，峰面积(mAU)为纵坐标，绘制校正曲线。得到氟茚唑菌胺线性方程为y=7 202.3x+13.392，其线性相关系数为1.000 0；嘧菌酯的线性方程为y=10 752x+31.349，线性相关系数为1.000 0。

3.3 分析方法的精密度试验 从同一产品中准确称取5个试样，在上述色谱操作条件下进行分析。测得氟茚唑菌胺的标准偏差为0.09，变异系数为0.43%；嘧菌酯的标准偏差为0.09和变异系数为0.42%。

表1 分析方法的精密度试验结果

3.4 分析方法的准确度试验 从已知质量分数的42%氟茚唑菌胺·嘧菌酯悬浮剂中称取5个试样，分别加入一定量的氟茚唑菌胺标样(99.2%)和嘧菌酯标样(99.7%)，在上述色谱操作条件下进行分析，测得氟茚唑菌胺的平均回收率为100.0%，嘧菌酯的平均回收率为99.97%(表2)。

表2 分析方法的准确度试验结果

4 结论

试验建立了高效液相色谱法检测氟茚唑菌胺·嘧菌酯悬浮剂中有效成分的分析方法。试验结果表明，在一定的质量浓度范围内线性关系良好，方法准确度和精密度较高，具有操作简便，快速的特点，是产品质量控制和应用研究中较为实用的方法。