俞霖洁,吴航俊,孙小波,庞雯斐,唐利斌,林梦佳
(浙江省化工研究院有限公司,杭州 310023)
四氟醚唑(tetraconazole)属三唑类杀菌剂,主要用于防治小麦白粉病、锈病,玉米丝黑锈病,苹果斑点落叶病和葡萄白粉病等[1]。嘧菌酯(azoxystrobin)是先正达公司于1997年上市的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂,用于防治白粉病、锈病、颖枯病、网斑病、霜霉病等,目前国内外登记防治的植物病害有400多种[2]。四氟醚唑和嘧菌酯复配,既可减少单剂成分用量,降低药害风险,又可以提高病害防治效果。
目前四氟醚唑的检测方法主要为气相色谱法[3-4],嘧菌酯的检测方法主要为气相色谱法[5]和液相色谱法[6],四氟醚唑和嘧菌酯复配制剂的分析方法尚未见报道。本试验采用Inertsil ODS-3色谱柱和二极管阵列检测器,建立了四氟醚唑和嘧菌酯同柱分离测定的高效液相色谱法。该方法操作简便、快速,分离效果好,准确度和精密度均能达到定量分析的要求,可为企业产品质量控制和质检机构质量检测提供参考。
Dionex U3000高效液相色谱仪(热电),具二极管阵列检测器、自动进样器和Chromeleon 7.0色谱处理工作站;色谱柱:Inertsil ODS-3不锈钢柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);甲醇(色谱纯),临海市浙东特种试剂有限公司;水:2次蒸馏水;四氟醚唑标准品(≥98.5%)、嘧菌酯标准品(≥98.9%)、18%四氟·嘧菌酯悬乳剂(8%四氟醚唑+10%嘧菌酯),杭州宇龙化工有限公司提供。
流动相:甲醇+水(体积比为80∶20);流速:1.0 mL/min;柱温:35 ℃;检测波长:225 nm;进样量:5 μL;保留时间:嘧菌酯约4.4 min、四氟醚唑约5.5 min。典型的标样及18%四氟·嘧菌酯悬浮剂样品液相色谱分离图见图1、图2。
图1 嘧菌酯、四氟醚唑标样液相色谱图
图2 18%四氟·嘧菌酯悬乳剂液相色谱图
1.3.1 标样溶液的配制
称取约15 mg(精确至0.000 2 g)四氟醚唑标样和20 mg嘧菌酯标样于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解稀释并定容,充分摇匀,静置,备用。
1.3.2 试样溶液的配制
称取约0.2 g(精确至0.000 2 g)18%四氟·嘧菌酯悬乳剂样品,置于100 mL容量瓶中,先用约5 ml水溶解样品,再用甲醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜过滤后待用。
1.4.1 测定
在上述操作条件下,待仪器稳定后,连续注入数针标准溶液。计算各针相对响应值,待相邻2针的相对响应值小于1.5%时,按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
1.4.2 计算
将测得的2针试样溶液以及试样溶液前后2针标样溶液中四氟醚唑(嘧菌酯)的峰面积分别进行平均。试样中四氟醚唑(嘧菌酯)的质量分数w(%)按下式计算。
式中:A1为标样溶液中四氟醚唑(嘧菌酯)峰面积的平均值;A2为试样溶液中四氟醚唑(嘧菌酯)峰面积的平均值;m1为标样的质量,g;m2为试样的质量,g;p为标样中四氟醚唑(嘧菌酯)的质量分数,%。
通过二极管阵列检测器的光谱数据采集功能,获得四氟醚唑与嘧菌酯的紫外吸收曲线。四氟醚唑在200~230 nm处有较强的吸收,嘧菌酯在200~270 nm处有较强的吸收。由于悬乳剂配方比较复杂,为兼顾2种有效成分的吸收强度与比例,减小溶剂、助剂等杂质干扰,经比对分析,最终确定以225 nm作为检测波长。在此波长下四氟醚唑和嘧菌酯峰形良好,紫外吸收比例合适,基本不受杂质干扰。
分别选用了甲醇+水、甲醇+乙腈+水、乙腈+水为流动相进行试验。试验结果表明,以甲醇+水(体积比为80∶20)、甲醇+乙腈+水(体积比为40∶40∶20)、乙腈+水(体积比为75∶25)为流动相时,均能将2种成分有效分离,获得的峰形尖锐对称。其中,以甲醇+水(体积比为80∶20)流动相获得的目标物峰形最为理想,分离效率最高,且用时较短。最终确定甲醇+水(体积比为80∶20)为流动相。
分别称取四氟醚唑和嘧菌酯标准品约10 mg(准确至0.000 2 g),置于100 mL容量瓶中,用甲醇超声溶解,稀释,定容,摇匀。用移液管分别准确移取5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 mL上述溶液于50 mL容量瓶中,用甲醇稀释,定容,摇匀。在上述液相色谱操作条件下进行测定。以四氟醚唑(嘧菌酯)质量浓度为横坐标,四氟醚唑(嘧菌酯)峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。计算得四氟醚唑线性回归方程为y=21.669x-0.174 2,相关系数为0.999 5,嘧菌酯线性回归方程为y=60.798x-1.051 4,相关系数为0.999 9。试验结果表明,四氟醚唑和嘧菌酯在测定的质量浓度范围内具有良好的线性关系。
任意称取一个18%四氟·嘧菌酯悬乳剂在上述方法下重复测定5次,分别获得四氟醚唑和嘧菌酯的标准偏差和变异系数,结果见表1。
由表1可知,样品中四氟醚唑质量分数为7.85%,标准偏差为0.010,变异系数为0.16%;嘧菌酯质量分数为9.46%,标准偏差为0.015,变异系数为0.06%。结果表明该分析方法精密度良好。
表1 方法的精密度实验测定结果
在已知含量的18%四氟·嘧菌酯悬乳剂样品,分别准确加入一定量四氟醚唑和嘧菌酯标样溶液,根据称取样品量和加入标样量计算出四氟醚唑和嘧菌酯的理论含量。按照上述色谱操作条件操作,分析结果见表2。四氟醚唑回收率为98.49%~100.98%,平均回收率为99.99%,嘧菌酯回收率为99.23%~100.37%,平均回收率为99.23%,均满足常量分析要求,方法准确度良好。
表2 方法的准确度实验测定结果
本方法以ODS-3 C18为分离柱,二极管阵列为检测器,225 nm为检测波长,测定18%四氟·嘧菌酯悬乳剂中有效成分的质量分数。该方法分离效果好,操作简便,定量准确,重复性、线性关系良好,满足产品质量分析要求。