2017年北京市区级兽医实验室间检测能力比对结果分析

吴 迪， 杜 鹃， 巴洪宇， 吴惠明， 周德刚

(北京市动物疫病预防控制中心， 北京 大兴 102629)

兽医实验室间检测能力比对是农业部加强实验室管理与建设的重要举措[1]，是实验室质量控制的重要手段[2]。近年来，我国动物疫病防控工作取得了重要成效，公共卫生安全保障水平不断提高[3]，但仍面临国内外各种新发动物疫病的严峻挑战, 研究表明，口蹄疫、高致病性禽流感等重大动物疫病仍在部分区域呈流行态势，存在免疫带毒和免疫临床发病现象；布鲁菌病发病率呈上升趋势，局部地区甚至出现暴发流行[4]。因此，兽医实验室在开展动物疫病防控工作中的地位显得尤为重要，这就要求兽医实验室保持较高的检测水平。区级兽医实验室主要职能为动物疫病检测、监测工作，对养殖业的持续健康发展起着重要作用。根据《农业部办公厅关于开展2017年兽医系统实验室检测能力比对工作的通知》[5]及《北京市农业局关于开展2017年兽医系统实验室检测能力比对工作的通知》[6]，为确认北京市区级兽医实验室动物疫病检测能力水平, 2017年7月，北京市动物疫病预防控制中心[7]组织北京市13个区级兽医实验室，通过口蹄疫、高致病性禽流感与布鲁菌病3种动物疫病进行比对工作，以期为基层兽医实验室建设与质量控制提供科学理论依据。

1 材料与方法

1.1 比对范围 2017年北京市13个区级兽医实验室参与了实验室检测能力比对工作。

1.2 比对项目 根据北京市农业局关于开展2017年兽医系统实验室检测能力比对工作通知的相关要求，本次区级兽医实验室比对共设置3个比对项目，分别为H7N9亚型禽流感抗体血凝抑制试验、口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试验、动物布鲁菌病抗体检测试验。

1.3 比对方法 3个比对项目所采用的比对方法、标准依据及试剂耗材，见表1。

表1 比对项目的标准、方法和试剂

1.4 比对样品 禽流感配套盲样血清样品由哈尔滨国生生物科技股份有限公司制备与标定，口蹄疫配套盲样血清样品、布鲁菌配套盲样血清样品，由中国农业科学院兰州兽医研究所制备与标定，北京市动物疫病预防控制中心实验室管理科负责完成样品的分装和编号，并将样品在统一时间发放给参与比对的各个实验室。

1.4.1 禽流感血清样品 禽流感血凝抑制试验检测样品共准备70份，其中强阳性样品21份，抗体效价标定为8 log2,弱阳性样品35份，抗体效价标定为6 log2，阴性样品14份。

1.4.2 口蹄疫O型血清样品 强阳性样品32份，抗体效价标定为1∶720；弱阳性样品32份，抗体效价标定为1∶180；阴性样品16份。

1.4.3 布鲁菌病盲样血清样品 盲样血清共80份，其中阳性样品64份，阴性样品16份。

1.5 结果评判标准 结果评判标准详见表2。

2 结果与分析

表2 检测项目结果判定标准

2.1 总体结果 北京市13个实验室参加区级兽医系统实验室检测能力比对，比对设置H7N9亚型禽流感抗体血凝抑制试验、口蹄疫病毒抗体检测试验、动物布鲁菌病抗体检测试验3个检测项目，9个实验室比对项目全部正确，符合要求，4个实验室的1个检测项目(口蹄疫病毒抗体阻断ELISA试验)共11份检测样品检测结果与参考值不一致。

2.2 H7N9亚型禽流感抗体血凝抑制试验检测能力比对结果 13个区级实验室在H7N9亚型禽流感抗体血凝抑制试验比对项目中检测结果全部正确，检测结果与参考值偏差不超过上下1个滴度，符合率为100%。具体结果见图1。结果显示，北京市各区级实验室对H7N9亚型禽流感抗体血凝抑制试验(HI)比对项目已能够熟练操作，并具备出具正确检测报告的能力，实验室检测结果重复性较好(12/13)。其中实验室6在同一抗体滴度样品检测过程中，出现了不同的结果，需进一步提升该项目的检测水平，以确保实验的稳定性。

图1 H7N9亚型禽流感抗体血凝抑制试验检测结果

2.3 口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试验比对结果 13个实验室中有9个实验室比对结果完全正确，其中7个实验室(实验室1、3、5、7、8、9、10)强阳性、弱阳性与阴性5份样品的抗体效价与标定值完全符合，实验室4与实验室12的检测结果一致，均在标定参考范围之内，但与7个实验室的抗体效价结果不一致，原因为计算最终抗体效价时没有按照试剂盒说明书的计算方法，而采用了抗体效价取平均值的计算方法。13个实验室中有4个实验室的11份样品结果不正确，其中实验室6的强阳性与弱阳性4份样品的检测结果均不正确，分析原因为病毒抗原在稀释过程中未按试剂盒说明书中指定稀释倍数进行稀释。实验室2、11、13也在不同样品的检测中出现问题。具体结果见图2。总之，口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测项目出现较多的问题，说明区级实验室在半定量检测项目中还有待加强。

图2 口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测结果

2.4 动物布鲁菌病抗体检测试验比对结果 13个实验室共检测阳性样品4份，阴性样品1份，检测结果全部正确，结果见表3。北京市13个区级实验室在动物布鲁菌病抗体检测项目上具备成熟的检测技术，能够出具正确的检测报告。

表3 动物布鲁菌病抗体检测比对结果

3 讨论

本次兽医实验室比对共设置3个比对项目，分别是H7N9亚型禽流感抗体血凝抑制试验、口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试验、动物布鲁菌病抗体检测试验。3个比对项目均为基于血清学方法建立的检测试验，一是血清学检测在基层兽医实验室的重要地位，二是13个实验室并未全部具有病原学检测的能力。这3种动物疫病在农业部动物疫病分类名录中属于一、二类动物疫病[8]，对评估基层兽医实验室能力水平具有重要意义。

本次比对试验共检测本市13个区级兽医实验室的3个项目，其中9个实验室比对项目全部符合，4个实验室的一个检测项目(口蹄疫病毒抗体阻断ELISA试验)共11份检测样品检测结果与参考值不一致，禽流感比对项目检测值均在参考值上下1个滴度范围内，动物布鲁菌病抗体检测结果全部正确，说明我市兽医实验室动物疫病检测能力水平比较稳定，在定性检测项目中结果正确率较高，但仍在半定量检测项目中出现一些问题。对于本次口蹄疫病毒抗体阻断ELISA试验中出现较大偏差的4个实验室，北京市动物疫病预防控制中心组织人员对4个实验室的操作进行了检查与指导，分析了问题产生的原因，从源头把控，使该项目的检测准确性稳步提升，实验室比对复测结果全部正确。

从实验室的原始记录和检测结果报告上看，有些实验室存在实验记录与检测报告书写不规范的现象，尤其在检测结果表述方面存在一定的问题。以期通过比对试验，查找兽医系统实验室在检测过程中存在的问题，全面提高从业人员素质，提高我市兽医系统实验室动物疫病防控水平与检测能力。