不同因素对胚胎生产效率的影响

奥旭东 ，陈大勇 ，石新宇 ，何杰辉 ，马云慧 ，李建慧 ，王建国

（1.内蒙古大学省部共建草原家畜生殖调控与繁育国家重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010021；2.内蒙古赛诺草原羊业有限公司，内蒙古 集宁区 011800；3.翁牛特旗农牧业局，内蒙古 翁牛特旗 024500）

现代繁殖生物技术是提高优质肉用种羊的利用率、缩短生产周期、加速良种肉羊扩繁、促进肉羊产业化发展的必经之路。超数排卵、腹腔镜人工输精、子宫角冲胚和胚胎移植等技术在生产实践中得到了一定的推广应用，但目前还没有完全达到产业化阶段，这是因为上述技术比较复杂，影响因素比较多[1]。供、受体的个体和遗传差异、生理生殖状况、环境及营养状况、不同超数排卵方案、不同的药物和操作者的技术水平等[2-3]都可能影响胚胎移植的整个过程。

表1 供体羊手术冲胚次数不同对胚胎生产效率的影响 次，只，个

该研究选取2～3岁繁殖性能正常的经产纯种杜泊母羊作为供体，统一饲养管理，并使用相同的超数排卵和腹腔镜输精方案，系统地比较不同的操作人员、不同种公羊及不同手术冲胚次数（供体重复冲胚经历的手术次数）对供体羊胚胎生产效率的影响。通过对这些因素的比较分析为提高杜泊羊母羊的胚胎生产效率提供试验依据和经验，同时也为提高企业胚胎移植规模化生产效率及完善胚胎移植体系建设提供一些实践指导。

1 材料

1.1 供体羊

选取2～3岁繁殖性能正常的经产纯种杜泊羊母羊作为供体羊，供体羊由内蒙古赛诺草原羊业有限公司提供。

1.2 药品

注射用血促性素（孕马血清，PMSG）购自宁波第二激素厂；氯前列烯醇购自上海市计划生育科学研究所；阴道海绵栓、胚胎保存液、O-FSH超数排卵药、冲胚液全部为新西兰进口。

1.3 器械

主要器械有外科手术器械、手术保定架、体视显微镜、冲卵管、检卵针、移植管等。

2 方法

2.1 供体羊超数排卵处理

在放置阴道海绵栓的第12天开始对供体羊进行超数排卵处理。超数排卵处理采用递减法连续肌肉注射超数排卵药物O-FSH 4 d，每天上、下午肌肉注射各1次，总剂量为10 mL。超数排卵处理的第4天，即放置阴道海绵栓的第15天取出阴道海绵栓，同时用加双抗（8×105IU青霉素+1×106IU链霉素）的生理盐水冲洗供体羊的阴道。

2.2 供体羊试情、配种

取栓的第2天对供体羊进行试情，对发情母羊于发情当天进行腹腔镜输精。

2.3 冲胚

冲胚操作由5位操作熟练的冲胚操作人员（A、B、C、D、E） 进行。 于供体羊腹腔镜输精后 6～7.5 d采用手术法收集胚胎：将子宫暴露于创口表面后，用套有胶管的肠钳夹在子宫角分叉处；使用注射器吸入预热的冲卵液20～30 mL（每侧用液50～60 mL），将钝形冲卵针头从子宫角尖端插入，确认针头在管腔内且进退通畅时，将硅胶管连接于注射器上，推注冲卵液；当子宫角膨胀时，将回收卵针头从肠钳夹基部的上方迅速扎入，将冲卵液经硅胶管收集于杯内；最后用拇指和食指将子宫角捋一遍。另一侧子宫角用同样方法冲洗。

2.4 数据分析

试验数据采用SPSS 19.0统计软件进行统计分析和显著性检验。

3 结果与分析

3.1 供体羊手术冲胚次数对胚胎生产效率的影响

供体羊的手术冲胚次数对于胚胎生产效率具有明显的影响。第5次手术冲胚，供体羊所获的平均冲胚数和平均可用胚数显著（P＜0.05）低于其他组（见表 1）。

3.2 种公羊对胚胎生产效率的影响

由表2可以看出，种公羊不同对于胚胎生产效率是有影响的。种公羊317的平均冲胚数为4.38个，平均可用胚数为4.11个；而种公羊D1402的平均冲胚数为5.44个，平均可用胚数为3.88个。同一种公羊配种不同手术冲胚次数的杜泊母羊对胚胎生产效率的影响与供体羊不同手术冲胚次数对胚胎生产效率的影响相同：第5次手术冲胚供体羊所获得的平均冲胚数和平均可用胚数显著低于其他组（P＜0.05）。

表2 种公羊不同对供体胚胎生产效率的影响 次，只，个

表3 冲胚操作人员不同对胚胎生产效率的影响 只，个

3.3 冲胚操作人员对胚胎生产效率的影响

由表 3 可以看出，A、B、C、D、E 5 位操作熟练的冲胚操作人员所获得的平均冲胚数和平均可用胚数没有显著性差异（P＞0.05）。

4 讨论与结论

超数排卵、人工输精、胚胎移植等现代繁殖技术应用于肉羊的规模化生产，不仅提高了种畜的使用效率，缩短了优良种畜扩繁的周期，而且极大地提高了企业生产效率，同时也为企业带来了丰厚的收益。

对优良种母畜进行重复超数排卵，是充分挖掘良种母畜的遗传潜力和向肉羊产业提供大量优质胚胎的重要手段[4]。该研究对杜泊羊母羊进行重复超数排卵处理并进行手术冲胚，结果表明，第5次手术冲胚处理的杜泊羊母羊所获的平均回收胚胎数和平均可用胚数显著低于其他组 （P＜0.05），这与 Ptak 等[5]报道的羊卵巢卵泡的反应能力随超数排卵重复次数增加而下降相一致。通常，供体羊经过手术冲胚后，会发生一定比例的手术粘连，而粘连不但影响羊的生理状况，还会对供体的排卵和盆腔环境造成一定的影响而影响其生殖性能[6-7]。该研究结果也在提示手术次数过高的供体，应该积极淘汰，不能再用于冲胚，否则会增加生产成本和降低生产效率。

种公羊不同也会对胚胎生产效率造成很大的影响[6]，因此，通过对不同种公羊冲胚结果的统计，可以对种公羊的繁殖机能进行评估，对之后的生产起到很重要的指导作用。这也提示，在规模化生产中，需要对不同种公羊进行评估，选取优良种公羊利用，可以在很大程度上提高生产效率和收益。

胚胎移植过程中的每一个技术环节，与最后得到的结果都息息相关，因此，需要对生产过程中的细节做到严格把控。对企业的规模化生产来说，需要大量的胚胎操作人员，他们对胚胎移植技术的掌握程度，直接关系到胚胎移植的成败[6-7]。因此，在规模化的生产过程中，通过对不同人员的胚胎移植操作情况进行统计，有助于了解操作人员的技术水平，并区分不同的操作水平。该研究中，5名操作人员所获得的冲胚数和平均可用胚数没有显著差别，技术水平相当，并且比较稳定，都可以参与到今后的生产中。除此之外，供体羊的生理、生殖状况也是影响胚胎移植的关键因素。

该研究以企业为依托，研究了不同操作人员、不同种公羊、不同手术冲胚次数等对供体羊胚胎生产效率的影响，不仅有助于企业自身规模化生产效益的提高，也为羊胚胎移植技术体系的完善提供一定参考。