参黄养阴胶囊质量标准研究

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1.延边大学，吉林 延吉 133000；2.吉林省中医药科学院，吉林 长春 130021

参黄养阴胶囊主要由人参、黄芪、黄精、麦冬、丹参、苦参、甘草等7味中药组成，具有益气养阴，活血化瘀的功效，用于气阴两虚兼血瘀证冠心病的辅助治疗[1-6]。其制法为人参、丹参粉碎成粗粉，其余黄芪等五味加水煎煮三次即得。黄芪为方中君药之一，具有补气升阳，行滞通痹之功效[7]，黄芪甲苷为其主要成分。研究采用HPLC - ELSD 法测定参黄养阴胶囊中黄芪甲苷的含量，为参黄养阴胶囊的质量控制提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津2010C高效液相色谱仪(Alltech ELSD 2000ES检测器)；METTLER AG245 十万分之一天平。

1.2 材料 对照品丹参酮ⅡA、黄芪甲苷、苦参碱、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf人参皂苷Rg1、甘草酸单铵盐购自中国药品生物制品检定所；对照药材麦冬、黄精购自中国食品药品检定研究院；试验中所用乙腈、甲醇均为色谱纯，水为双蒸水自制，其它试剂均为分析纯；参黄养阴胶囊由吉林吉尔吉药业有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 采用岛津VP-ODS色谱柱(4.6×150 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(32∶68)；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；ELSD参数：漂移管温度105 ℃，气体流量2.8 L/min。

2.2 对照品溶液制备 取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含黄芪甲苷0.2 mg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备 取本品5 g，精密称定，加甲醇50 mL，加热回流2 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水50 mL，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取5次，每次50 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤3次，每次50 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀即得。

2.4 线性及范围 精密吸取对照品溶液2、4、8、16、32、64 μL，按“2.1项”的方法进样分析，测定其峰面积。以黄芪甲苷进样量和峰面积的Log值为横、纵坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归计算。经计算，回归方程为y=1.880x+4.974，相关系数r=0.999，线性范围为0.4024～12.8768 μg。结果显示，在线性范围内，其对数值和峰面积对数值呈良好线性关系。

2.5 精密度考察 精密吸取上述同一对照品溶液，连续进样6次，记录黄芪甲苷峰面积，计算其RSD值为2.20%，说明仪器精密度良好。

2.6 稳定性考察 取根据“2.3项”下方法制得的同一供试品溶液，于0、2、4、6、8h下测定，记录黄芪甲苷峰面积，计算RSD值为1.65%，表明8 h内黄芪甲苷稳定性较好。

2.7 重复性考察 称取同一批供试品6份，精密称定，按“2.3项”下方法制成供试品溶液，按“2.1项”色谱条件进样分析，测定其峰面积，计算黄芪甲苷的含量，得RSD值为3.90%。表明该方法重复性良好。

2.8 准确度试验 取同一批供试品6份，精密称定，加入一定量对照品，按“2.3项”下方法制成供试品溶液，并进行分析，计算加样回收率，黄芪甲苷的平均回收率为98.67%，RSD为0.87%，证明以上方法准确度良好，符合要求。

表1 准确度实验结果

2.9 样品含量测定 取三批样品，每批各2份，按“2.3项”下方法制成供试品溶液，按“2.1项”的方法进样分析，计算黄芪甲苷的含量，结果见表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

对于参黄养阴胶囊处方中七味中药进行定性鉴别后，结果显示丹参、黄芪、苦参、人参薄层鉴别具有专属性，麦冬、黄精、甘草薄层鉴别不具有专属性，所以本研究建立了参黄养阴胶囊中所含的4味中药材的薄层色谱鉴别方法，为参黄养阴胶囊的质量控制提供参考。

由于中药复方的成分多样且复杂，待测的目标成分经常会受到一些其他杂质的干扰，使观察到的结果不清晰，因此，应选择合适的处理方法，既能保证结果清晰，又能去除背景干扰，如黄芪的供试品制备时，水饱合正丁醇萃取后，又用正丁醇饱和的0.3 mol/L氢氧化钠溶液提取3次，再以正丁醇饱和的水洗涤至中性，后又通过D101型大孔吸附树脂柱，得到供试品溶液。

在黄芪甲苷供试品溶液的制备中，先后考察了不同的提取方法(超声提取方法、加热回流提取方法和索氏提取方法)发现加热回流方法黄芪甲苷损失较少，方法操作简便。供试品去除杂质干扰的方法考察了萃取与大孔树脂洗脱的方法，发现萃取方法较为适合。

《中华人民共和国药典》中黄芪含量测定采用的流动相为乙腈-水(32∶68)，按药典流动相色谱峰分离效果均好，无干扰，故选其作为含量测定流动相。