结核感染T细胞斑点试验在淋巴结结核中的诊断意义

郭琪，胡娇，张毅

（西安市胸科医院外科，陕西 西安 710000）

淋巴结结核是一种十分常见的肺外结核病，据以往文献报道，在儿童中约占全部肺外结核的52.9%，在成人中发病率略低于儿童，且大多都合并有肺部结核感染[1]。单纯的淋巴结结核的诊断往往十分困难，尤其在早期更加困难，主要是因为典型的临床表现不明显，影像学缺乏特异性等。既往的结核诊断方法主要有抗酸染色、细菌培养、结核抗体三项检测、PPD试验（tuberculin skin test，TST）等，但上述测方法的特异性和灵敏性尚不令人满意，给结核早期诊断带来了困难。近年来，随着科学技术的进步，结核感染T细胞斑点试验广泛用于结核病的诊断中，且具有较好的临床效果[2-3]。但是，既往尚无研究针对单纯淋巴结结核进行结核感染T细胞斑点试验（T-cell spot of tuberculosis，T-spot.TB）实验的相关性分析，旨在进一步排除肺部结核感染等的影响，单纯分析T-spot.TB对于淋巴结结核的意义。

本文通过对2015年9月1日～2017年2月1日就诊于西安市胸科医院的单纯淋巴结肿大的患者（合并有肺部感染灶的排除）进行T-spot.TB和TST实验，分析比较不同方法对于疾病诊断的灵敏度和特异性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年9月1日～2017年2月1日就诊于西安市胸科医院的单纯淋巴结肿大（合并有肺部感染的排除，既往有结核接触史的排除），并经手术、淋巴结活检或者穿刺病理进行疾病确诊的患者，共计148例。且所有儿童既往均行基础卡介苗等免疫。

1.2 T-spot.TB实验 使用肝素抗凝管采集患者5 ml的外周静脉血，用密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞。在已包被抗γ-干扰素抗体微量板的4孔板中，分别加入4种不同的对照物进行对比：阳性对照物为植物血凝素、阴性对照物为AIM-V细胞培养液、结核杆菌特异混合多肽A[早期分泌抗原靶蛋白 6（early secreted antigenic target，ESAT-6）抗原]、结核杆菌特异混合多肽B[培养滤液蛋白10（culture filtrateprotein 10，CFP-10）抗原]，后在上述4孔中每孔中加入含2.5×105个外周血单个核细胞，再将微量板放入二氧化碳培养箱培养16～20 h（环境为37℃，5%CO2），用PBS洗板4次后，加入碱性磷酸酶标记的γ-干扰素抗体，PBS洗脱，显色，PBS终止，最后计数斑点数，以测量孔点数是阴性对照的2倍以上或者比阴性对照多5个点为判定阳性。

1.3 TST实验 选取0.1 ml含5个单位的结核杆菌纯蛋白衍生物（purified protein derivative，PPD）对患者行前臂尺侧皮内注射，72 h后观察结果。硬结的直径≥10 mm或合并有水泡、双圈考虑为TST阳性。

2 结果

根据病理结果，单纯淋巴结肿大的患者分为淋巴结核组（48例），急慢性淋巴结炎组（90例），转移性肿瘤（7例），恶性淋巴瘤（3例）。而在淋巴结结核组内，根据淋巴结肿大位置分组：颈部（30例），腋下（15例），腹股沟（3例）；根据年龄分组，小于14岁（11例），大于14周岁（37例）；根据性别分组，男性20例，女性28例。

根据病理分组，淋巴结核组的TST及T-Spot.TB阳性率均明显高于非结核组，根据卡方检测，差异具有明显统计学意义（p＜0.01）；根据配对卡法检测，比较淋巴结核组患者TST与T-Spot.TB阳性率（分别为66.7%和87.5%），T-Spot.TB阳性率明显高于TST，差异具有统计学意义（p＜0.05）。

T-spot.TB对于单纯淋巴结核诊断的灵敏度和特异性分别为87.5%和98%；而TST对于诊断的灵敏度和特异性分别为66.7%和85%，差异均具有统计学意义，见表1和表2。

表1 不同疾病的TST及T-Spot.TB结果Table 1 The result of TST and T-spot.TB in different disease

表2 淋巴结核患者TST与T-Spot.TB阳性率比较Table 2 Comparison of positive rates of TST and T-Spot.TB in patients with lymphatic tuberculosis

根据年龄性别等分组，患者的T-Spot.TB阳性率与性别、包块位置、年龄等均无相关性，具体见表3。

表3 不同分组的淋巴结核患者的T-Spot.TB阳性率比较Table 3 Comparison of T-Spot.TB positive rates in different groups of patients with lymphoid tuberculosis

3 讨论

结核病目前仍是危害公共卫生安全的全球问题之一，仍有较高的发病率和致残致死率，且近年来仍有逐渐升高的趋势，文献报道可能与免疫抑制性疾病发病率增高有关[4-5]。目前结核病诊断的金标准仍是病原学或病理学诊断，但是在疾病发病初期很难获得。

淋巴结结核是肺外结核中发病率最高的一种，且国内有学者报告其患病率高达80%～90%，且大部分均合并有肺部感染[1]。但是，单纯的淋巴结结核因缺少特异性表现，往往早期在临床上很难诊断，甚至会影响治疗。所以，探讨单纯淋巴结结核早期诊断的意义就至关重要，并且具有十分重大的意义。

既往文献曾有报道T-Spot.TB对于肺外结核的诊断的研究：Youden等报道T-spot.TB对于淋巴结核的灵敏度为55%[6]，这低于本实验的报道，这可能与国外环境、饮食生活习惯及治疗监测水平有关；国内鲁曦、李王平等曾报道γ-干扰素释放实验对于全部肺外结核诊断的整体灵敏度和特异性分别为81%和53%，但对于淋巴结的灵敏度88%[7],这与本研究报道的灵敏度相同，但特异性不如本研究报道，这可能与研究的入院条件有关，本研究单纯研究T-Spot.TB实验与淋巴结结核的相关性，排除肺结核等感染。而这些结果均显示，T-Spot对于淋巴结核的诊断具有很好的准确性和特异性。

同时，本研究还针对年龄、淋巴结部位、性别等进行分层研究，结果显示T-Spot对于不同年龄、部位及不同性别的患者均具有相似的诊断准确率。而本次研究入选的所有儿童均接受基础免疫，说明T-spot研究不受卡介苗免疫的干扰。

综上所述，结核感染T细胞斑点试验在诊断淋巴结结核中具有良好的敏感性和特异性，对于单纯淋巴结肿大的患者具有重要临床应用价值。