自拟射麻汤对哮喘模型豚鼠气道炎症干预的研究

林黄果 张烈元 李楚天 蔡 彦 陈伯钧

（广州中医药大学第二临床医学院，广东省中医院，广东 广州 510120）

支气管哮喘简称哮喘，是由多种炎症细胞（嗜酸性粒细胞、肥大细胞、淋巴细胞、中性粒细胞等）和细胞组分参与的气道炎症性疾病[1]，此种炎症常伴随引起气道反应性增高，导致反复发作的喘息、气促、胸闷和（或）咳嗽等症状，多在夜间和（或）凌晨发生，此类症状常伴有广泛而多变的气流阻塞，可以自行或通过治疗而逆转。目前其发病率和死亡率呈现逐年上升态势。一般认为哮喘基本特征为气道慢性炎症、气道高反应性和气道重塑，并认为气道炎症是哮喘最重要发病机制，是导致哮喘气道高反应性和气道弥漫性、可逆性阻塞的病理基础，而嗜酸性粒细胞和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）是其中重要的炎症细胞和炎症因子[2-3]。中医对于治疗哮喘有一定疗效，尤其是不少研究均揭示[4]射干麻黄汤治疗支气管哮喘能抑制气道重塑来减轻哮喘症状和气道重塑[5-6]，影响嗜酸性粒细胞的凋亡[7-8]，减轻气道炎症反应[9-10]，改善肺功能，提高临床疗效。笔者在临床应用自拟方射麻汤，宣肺祛痰，下气止咳，兼以健脾利湿治疗哮喘，收到良好的疗效。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 符合动物实验伦理要求情况下，选用SPF级健康豚鼠24只，均由广州市花都区花东信华实验动物养殖场提供，合格证号SCXK（粤）2009-0023，体质量300～400 g，雌雄各半，给予普通饲料进行适应性饲养 （饲料的加工及饲养工作均由广东省医学实验动物中心完成）。

1.2 实验药物 自拟射麻汤（射干、炙麻黄、紫菀、款冬花、法半夏、薏苡仁、北杏仁、桑白皮、大枣），上述中药材均来自广东省中医院中药房，并由主管中药师进行鉴定，确定为纯正中药材。上述药物等分量按成年人60 kg体质量剂量的4倍水煎浓缩至含生药1 g/mL，高压灭菌，于4℃冰箱保存备用。地塞米松磷酸钠注射液（湖北天药药业股份有限公司，批号：20100336）；鸡卵白蛋白（美国Sigma公司，批号：A5253）由广州市威佳科技有限公司提供；粤华WH2-2000型超声雾化仪（广东）；水平离心机；徕卡石蜡包埋机；徕卡型生物组织脱水机（德国）；徕卡2245石蜡切片机（德国）；徕卡5020型石蜡染色机（德国）；DK-600S水浴箱；图像分析系统。

1.3 分组与造模 适应性饲养1周后，将24只豚鼠分为3组：射麻汤组，模型组和地塞米松组，每组8只，雌雄各4只。参照国际通用方法，以卵蛋白致敏和攻击加以复制造模[11]，在相同环境下先将豚鼠饲养3 d适应环境后开始造模。第4日，采用鸡卵白蛋白致敏，常规消毒后一次性腹腔注射10%鸡卵白蛋白0.9%氯化钠注射液1 mL，使豚鼠处于致敏状态。致敏后第7日将动物置特制激发箱内，以1%鸡卵清蛋白溶液喷雾激发，按个体差异每次2～10 min，直至“哮喘”发作（腹式呼吸明显，呼吸频率加快且节律不整、活动减少等症状），连喷 4 d。

1.4 给药方法 造模成功后隔日开始给药，射麻汤组予射麻汤灌胃，每次5 mL，地塞米松组予地塞米松0.1 mg兑入0.9%氯化钠注射液5 mL灌胃，模型组给予0.9%氯化钠注射液5 mL灌胃。均每日1次，7 d为1个疗程。

1.5 标本采集与检测 取材于末次治疗后的第2日，将各组动物以3%戊巴比妥钠1.5 mL/kg腹腔注射麻醉后处死，取出右肺，标本用10%多聚甲醛固定，从固定部位切取右肺组织块。常规石蜡包埋和切片，片厚3 μm，分别行HE染色。采用图像分析系统，每张切片在400倍放大的显微镜下，分别测取其嗜酸性粒细胞数值，每个支气管各测5次，取其均值。ECP测定采用荧光酶标记法检测仪测定，具体操作按说明书执行。

1.6 统计学处理 应用SPSS16.0统计软件。计量资料以（±s）表示，进行单因素方差分析的SNK检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组肺组织大体改变 模型组豚鼠肺组织肿胀明显，表面可见瘀紫色暗区，颜色略显苍白，切面可见浑浊分泌物渗出。射麻汤组、地塞米松组有上述改变，但程度轻微。

2.2 各组肺组织病理学改变 见图1。模型组豚鼠肺组织支气管黏膜肿胀水肿、充血，气道内肥大细胞、肺泡巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞与中性粒细胞等炎症细胞浸润，支气管壁和基底膜增厚，支气管管腔变窄，其内可见炎症细胞和分泌物渗出。射麻汤组、地塞米松组豚鼠肺组织炎症细胞浸润等病理改变较模型组减轻，且地塞米松组要稍优于射麻汤组。

图1 各组气道病理切片（HE染色，200倍）

2.3 各组间嗜酸性粒细胞值及ECP水平比较 见表1。射麻汤组和地塞米松组嗜酸性粒细胞值及ECP与模型组比较均有降低（P＜0.05），且地塞米松组较射麻汤组更低，但两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 各组豚鼠肺组织中EOS总数及ECP水平比较（±s）

表1 各组豚鼠肺组织中EOS总数及ECP水平比较（±s）

与模型组比较，*P＜0.05

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3 讨 论

目前认为哮喘是多种细胞（如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾患，其基本特征为气道慢性炎症、气道高反应性和气道重塑。嗜酸性粒细胞浸润在哮喘气道炎症的形成中发挥着重要的作用。激活的嗜酸性粒细胞释放多种毒性蛋白，致哮喘气道上皮损伤脱落，破坏周围组织，暴露传入神经末梢，引起气道高反应性。尤其是ECP活化的程度，与哮喘的严重程度呈显著的正相关，哮喘病情的加重或缓解与嗜酸性粒细胞的变化密切相关[12-13]。

射干麻黄汤为治疗哮喘的经典名方，诸药相配，融解表、温肺、利气、开痰于一方以分解病邪，共奏温肺散寒、化痰平喘之功，其疗效已被临床及实验所证实[14-15]，是治疗呼吸系统疾病的良方[16]。但笔者在临床使用中发现，大部分哮喘患者使用射干麻黄汤后容易出现咳嗽迁延难以断根，口干舌燥，大便干结不爽。经过反复思考，总结经验发现，患者都是身处岭南地区，其炎热潮湿的气候全国闻名，正如国医大师邓铁涛教授所认为的岭南人具有其地区特异性的体质，即脾气虚弱兼有湿热体质[17]，可能与射干麻黄汤中的生姜、细辛、五味子等偏温燥收敛[18]有关，故笔者临床上常在原方中去生姜、细辛、五味子等温燥之品，加薏苡仁、北杏仁、桑白皮等健脾利湿、泻肺止咳，自拟射麻汤：射干10 g，炙麻黄 10 g，紫菀 10 g，款冬花 10 g，法半夏 10 g，薏苡仁30 g，北杏仁10 g，桑白皮10 g，大枣10 g。 组方思想为宣肺祛痰，下气止咳，兼以健脾利湿，在临床上收到良好的疗效。为进一步提供可靠的理论基础，并比较与西药地塞米松对哮喘的疗效，所以并本实验设计随机分3组，通过射麻汤组与模型组和地塞米松组对哮喘模型气道炎症反应及肺组织嗜酸性粒细胞和ECP的影响，来证实自拟方射麻汤对哮喘治疗的确切效果，实践中也已证明射干、麻黄等中药治疗哮喘具有良好作用[19-20]。

本实验在机理上进一步表明，自拟射麻汤可使哮喘模型豚鼠肺组织内的EOS减少，抑制肺组织中ECP含量，使哮喘模型豚鼠气道壁变薄，降低了哮喘豚鼠炎症反应，表明自拟射麻汤对哮喘模型豚鼠气道炎症干预作用的机制可能是通过上述过程实现的。ECP是嗜酸性粒细胞活化指标之一，对哮喘的发作、预后判断和疗效评价均具有重要的作用。有研究证明，与嗜酸性粒细胞相比，ECP与哮喘患者气流受限关系更为密切[21]。也佐证了射麻方的药理作用及在临床使用中效果良好的原因。特别是哮喘尚不能完全根治，目前一般通过长期吸入糖皮质激素等药物的方法来抑制气道炎症反应，从而控制哮喘的临床症状，减少急性发作，但副作用较多，而且费用较贵，部分患者治疗依从性差，尤其是轻度发作者或经济不好的患者。挖掘我国中医药宝藏，发挥中医药文化优势特色，保障人民群众身心健康是我们中医药医疗工作者的重任。