甲状腺乳头状癌组织中mTOR的表达及其临床意义

闫斌 ,徐殿新 ，韩丽红，于跃利

近年来我国甲状腺癌的发病率有明显上升趋势，以沿海城市为甚，超过了其他恶性肿瘤的增长速度，对人类危害极大。甲状腺乳头状腺癌的研究水平日渐深入，寻找具有特异性的甲状腺癌相关的肿瘤标志物对甲状腺乳头状腺癌的早期诊断，术前诊断，以及进一步探讨其发生、发展及预后具有重要的意义，而且为甲状腺乳头状腺癌的治疗提供新的方向。随着肿瘤分子生物学研究不断的发展，靶向治疗研究的不断进步，能够推测mTOR在肿瘤的发生、发展中所能起到的作用变得尤为重要[1-5]。但mTOR与甲状腺乳头状癌的发生、发展的关系，目前在国内相关研究尚属于空白，未见相关报道。针对这一现状选择2014年3月—2016年2月于包头市肿瘤医院经手术根治切除的甲状腺乳头状癌标本，分别对60例甲状腺乳头状癌、30例甲状腺良性病变中mTOR的表达情况以及mTOR与甲状腺乳头状癌的相关性作了初步的研究。现将结果总结报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

实验标本材料选自内蒙古包头市肿瘤医院 （包头市第七医院）头颈外科及普外科术后常规病理组织标本（病理科甲状腺病变存档蜡块，患者家属及委托人术前均签署手术切除标本病理检查同意书），其中包括60例甲状腺乳头状癌标本，30例甲状腺良性病变标本（甲状腺腺瘤标本15例，结节性甲状腺肿标本15例）。甲状腺乳头状癌患者的年龄范围是16～72岁，甲状腺良性病变患者的年龄范围是27～69岁。所有标本均为外科手术切除，具体临床资料见表1、表2。甲状腺乳头状癌组标本选择时标本所属患者在采取甲状腺组织的采样 （甲状腺根治性切除治疗）前均未行相关药物治疗、化疗、放疗等。甲状腺标本采集后送病理科行石蜡包埋制备，并切片行病理学诊断，均经病理证实为甲状腺乳头状癌，不限制分期。甲状腺良性病变组标本选择时经病理科病理诊断证实为非正常甲状腺组织的。

1.2 方法

1.2.1 检测 该次实验全部标本经过充分的浸泡固定，取材，常规石蜡包埋。标本经5μm连续切片，60℃烘烤过夜，分别做HE和免疫组化染色。免疫组化染色采用Evision法，mTOR mAb采用1：100稀释。具体过程如下：将切片放置于37°C温箱内1 h。将切片经二甲苯两道，每道15 min，脱蜡处理。将切片经酒精三道，每道5 min，脱二甲苯处理，水化，制成切片备用。将已经冲洗完成的组织切片擦拭干净后，每张切片上加入第一抗体，放于湿盒内，并于37°C温箱中将组织切片孵育1 h。使用磷酸盐缓冲液充分冲洗切片。每张组织切片上加入第二抗体后，将组织切片放于湿盒内，然后置于温箱40～60 min。再次使用磷酸盐缓冲液充分冲洗切片。使用1 mL蒸馏水分别加入DAB显色液各1滴，以配制显色剂。染色剂配制完毕后，将显色剂均匀的滴加于组织切片上，约4～8 min，并于显微镜下监控显色情况，使用蒸馏水终止显色。将显色的组织切片于苏木精中1～2 min复染，使用盐酸酒精酸化，然后使用氨水蓝化。蓝化完成，将组织切片置于两道酒精5 min/次，二甲苯两道10 min/次。最后使用树脂胶封片。

表1 实验中甲状腺乳头状癌标本患者的临床资料统计

表2 实验中甲状腺病变（良性）标本患者的临床资料统计

1.2.2 染色结果的判定 采用双盲法读片，由两位具有多年病理科工作经验的病理科医生进行读片，每张组织切片选择不少于10个具有代表性的高倍镜视野。参照Naoki标准， 阳性细胞数 0%为 (-)，0%～20%为 (±)，20%～80%为(+)，＞80%为(++)；(-)和(±)为阴性，(+)和(++)为阳性。

1.3 统计方法

数据采用SPSS 19．0统计学软件分析。组间阳性率比较采用χ2检验，计数资料采取百分比（%）表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

甲状腺乳头状癌与甲状腺良性病变的染色结果存在较为明显的差异。在甲状腺乳头状癌中，mTOR的染色阳性部分主要集中于甲状腺乳头状癌细胞的细胞胞浆部分，呈棕色、弥漫性的分布于细胞胞浆当中，在对照组的甲状腺良性病变中，染色的阳性部分主要集中于细胞胞浆，呈棕色，但比较甲状腺乳头状癌细胞染色不同的是甲状腺良性病变的染色为颗粒状，大小不等，分布较散在如。 图1、图2。

图1 甲状腺乳头状癌中mTOR的阳性表达（左图：×100，右图：×400）

图2 甲状腺良性病变中的mTOR的阳性表达（左图：×100，右图：×400）

该次实验中的60例甲状腺乳头状癌细胞中，mTOR在甲状腺乳头状癌60例患者中的阳性表达的例数为54例，甲状腺良性病变30例患者中mTOR阳性表达的例数为 16 例，差异有统计学意义（χ2=15.557，P=0.000＜0.05）。详见表3。

3 讨论

现已发现，许多肿瘤均伴mTOR信号通路调控异常，与肿瘤发生密切相关的细胞生长增殖、细胞周期调控、细胞迁移等均受mTOR的调控[6-8]。该次实验中的60例甲状腺乳头状癌细胞中，阳性表达的例数为54例（阳性率为90.0%），作为对照的30例甲状腺良性病变的细胞中，阳性表达的例数为16例（阳性率百分比为53.3%），从甲状腺乳头状癌中mTOR表达的阳性率与甲状腺良性病变中mTOR表达的阳性率上可以看出甲状腺乳头状癌的mTOR表达的阳性率较高，将两者的数据进行比较，二者差异有统计学意义。

表3 甲状腺病变中mTOR的表达

该次的研究结果与已有的一些研究结果一致。Anna等[9]对53例甲状腺髓样癌标本进行免疫组化分析，结果显示，在甲状腺髓样癌中PI3K/Akt/mTOR通道被激活，特别是发生在有淋巴转移的患者中。PI3K/Akt/mTOR通路支持了甲状腺髓样癌细胞模型的恶性特点，并对mTOR靶向治疗晚期甲状腺髓样癌的效果进行了肯定的推测。Tamburrino A[10]等在mTOR通路的激活与甲状腺髓样癌和淋巴结转移的关系的研究中，通过免疫组化的方法对53例甲状腺髓样癌的染色表达进行观察，发现PI3K/Akt/mTOR信号通路在甲状腺髓样癌中被激活，特别是在有淋巴结转移的甲状腺髓样癌中，这一途径维持了甲状腺髓样癌癌细胞的增殖，表明针对mTOR的靶向治疗可能是具有一定潜力的。Saji等[11]研究发现，PI3K/Akt/mTOR信号通路在甲状腺癌的发展和恶化中扮演了重要角色，并通过大量临床相关数据和体外研究证明了这一结论，经对该研究进行统计分析，得出该研究能应用于临床治疗的可能性推论。二甲双胍的抗肿瘤机制除了涉及抑制AKT/mTOR信号通路，还诱导 AMPK的活化，从而抑制 mTOR信号通路[12]。

综上所述，mTOR信号的异常表达与甲状腺肿瘤的发生、发展密切相关。然而，在不同类型的癌细胞中，与mTOR相关 信 号 系 统 如 AMPK、PTEN是否参与调控该过程还有待进一步探索。如能明确上述信号分子是否参与甲状腺癌的发生、发展及其具体机制，则针对其作用靶点的治疗将为预防和治疗甲状腺癌提供新的思路。