气相指纹图谱在加味藿香正气制剂质量评价中的应用

高晓艳 吴 翠 毕宇安 凌 娅*

（江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222047）

藿香正气散一方出自《太平惠民和剂局方》，用于治疗寒湿型疾病[1-3]，加味藿香正气制剂是由藿香正气散加减得来，处方由广藿香、紫苏叶、白芷、炒白术、陈皮、半夏（制）、姜厚朴、茯苓、桔梗、甘草、大腹皮、生姜、大枣几味药材组成，具有解表化湿，理气和中之功效[4-5]。君药藿香，芳香辛温，理气而宣内外，和中而治吐泻；辅以紫苏、白芷两药辛温发散，助藿香外散风寒，芳化湿浊，为臣药；挥发性成分是制剂主要药效成分之一，目前中国药典及相关文献对加味藿香正气制剂的质量控制主要是采用HPLC法测定和厚朴酚与厚朴酚的含量、橙皮苷、甘草苷含量、GC法测定百秋李醇含量[6-10]等，为了更全面的评价加味藿香正气制剂的挥发性成分，本实验采用GC法测定加味藿香正气制剂的指纹图谱。

1 仪器与试药

Agilent 6890气相色谱仪，FID检测器，METTLER TOLEDO AL104电子分析天平；加味藿香正气软胶囊（江苏康缘药业股份有限公司生产，批号为160101，160102，160301，160401，160402，160403，160404，160512，160513，160518）；加味藿香正气丸（水蜜丸，李时珍医药集团有限公司，批号为201603002）；加味藿香正气丸（大蜜丸，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂，批号为14011915）；正己烷（分析纯，南京化学试剂有限公司）；百秋李醇（批号110772-201206，中国药品生物制品检定研究院）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：色谱柱：100%聚二甲基硅氧烷为固定相的非极性毛细管柱（30 m×250 μm，1 μm，Agilent HP-1）；柱温为程序升温：初始温度150 ℃，保持8 min，以每分钟2 ℃的速率升温至180 ℃，保持5 min，再以每分钟2 ℃的速率升温至220 ℃；保持10 min，流速：1.0 mL/min；进样口温度280 ℃；检测器温度280 ℃；分流进样，分流比10∶1；进样量2 μL。

2.2 对照品溶液的制备：精密称取百秋李醇对照品适量，加正己烷，制成每1 mL含百秋李醇1 mg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备：分别称取加味藿香正气软胶囊内容物约2.0 g，加味藿香正气丸（水蜜丸）约6.0 g，分别加正己烷25 mL，超声处理1 h，作为供试品溶液。取加味藿香正气丸（大蜜丸）约10.0 g，加水100 mL使溶解，用正己烷萃取2次，每次25 mL，合并正己烷溶液，回收至25 mL ，作为供试品溶液。

2.4 系统适用性试验：取对照品溶液、供试品溶液各2 μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，结果供试品溶液中各峰分离较好，见图1。

图1 加味藿香正气软胶囊图谱

2.5 方法学考察

表1 加味藿香正气软胶囊相似度结果

2.5.1 精密度试验：取加味藿香正气软胶囊（批号160301）内容物约2.0 g，按2.3项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图，以百秋李醇峰为S峰，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD。结果各共有峰相对保留时间的RSD均＜0.90%，相对峰面积的RSD均＜3.0%，表明仪器精密度良好。

2.5.2 重复性试验：取加味藿香正气软胶囊（批号160301）内容物约2.0 g，按2.3项下方法制备供试品溶液6份，按2.1项下色谱条件进样分析，记录色谱图，以百秋李醇峰为S峰，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD。结果各共有峰相对保留时间的RSD均＜0.90%，相对峰面积的RSD均小于3.0%，表明方法的重复性良好。

2.5.3 稳定性试验：取加味藿香正气软胶囊（批号160301）内容物约2.0 g，按2.3项下方法制备供试品溶液6份，分别于0、2、4、8、12、24 h进样分析，记录色谱图，以百秋李醇峰为S峰，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD。结果各共有峰相对保留时间的RSD均小于0.90%，相对峰面积的RSD均＜3.0%，表明加味藿香正气软胶囊供试品溶液在24 h内稳定。

2.6 指纹图谱的建立与共有峰的确定：按2.3项下方法分别制备10批加味藿香正气软胶囊指纹图谱供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图，根据10批样品的气相指纹图谱的检测结果，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2.0版），剪切去3 min之前的图谱，多点校正，全谱峰匹配，时间窗0.1，生成共有模式的对照指纹图谱，见图2。共标定15个分离度、峰型、重复性均较好的共有峰。

图2 对照指纹图谱

2.7 指纹图谱的相似度评价：采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2.0版），以对照指纹图谱为参照，剪切去3 min前的图谱，多点校正，全谱峰匹配，时间窗0.1，计算10批加味藿香正气软胶囊的相似度，结果见表1；测定2批加味霍香正气丸的气相指纹图谱，结果见图4。结果表明，10批加味藿香正气软胶囊的相似度均大于0.98，相似度良好，不同批次间挥发性成分稳定，质量一致性较好；加味霍香正气丸的共有峰较少，相似度仅为0.721、0.304。

3 讨 论

3.1 不同剂型的对比：通过采用气相指纹图谱对加味藿香正气软胶囊和加味藿香正气丸的挥发性成分分析，可以看出软胶囊制剂在保存挥发性成分上较丸剂具有巨大的优势，而挥发性成分（广藿香、紫苏、白芷、苍术、厚朴、陈皮含挥发性成分）又为该药的主要有效组分之一，发挥解表化湿、理气和中、清热解毒的功效，因此加味藿香正气软胶囊相较加味藿香正气丸更能发挥出药物的整体疗效。

图4 加味霍香正气丸指纹图谱

3.2 质量一致性评价的思路：无论是藿香正气系列还是其他系列制剂[11-12]，各剂型在研发阶段单从使用方便、携带方便、服用方便的角度考虑是不足的；中药制剂不同于化学药，中药组分复杂、作用靶点多元、药效成分与质量控制成分不完全一致，中药品种目前很难通过化学等效性评价及生物等效性来进行质量一致性评价，而采用临床有效性研究评价则势必带来临床资源的大量浪费，而目前的中药品种质量标准还不够完善，产品检验合格还不能完全代表其临床疗效一致性。因此，开展中药制剂的质量一致性评价只能先从完善质量评价标准入手，除了进行各药味鉴别和含量测定，还要摸索采用多成分指纹图谱、多介质溶出曲线对比等方法进行质量一致性评价。