尼卡地平对脑缺血再灌注损伤的影响

孟 茜，吕晓虹

（徐州医科大学临床医学系，江苏 徐州 221000）

1 实验原理

随着社会经济的发展，缺血性脑血管病已经成为危害人类健康的最主要疾病之一，他的治疗方式原则是及时有效的恢复缺血区的血液再次灌注。然而在有些情况下脑缺血之后血流的再灌注不仅没有能够使得使组织功能恢复，反而使缺血所导致的功能的障碍和结构的破坏进一步加重，这种现象就是缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury），抑制脑的缺血再灌注损伤已成为了缺血性脑损伤治疗的重要环节[1]。常见的药物治疗主要是以下方面：自由基清除剂、钙通道阻滞剂、抑制兴奋性氨基酸毒性作用、制过量NO生成、抑制白细胞作用等[1]。

尼卡地平能够加快动脉血流速度，由于尼卡地平对基底动脉及冠状动脉药理反应十分灵敏，因此在临床应用中对脑缺血患者使用尼卡地平类药物，不仅具有降低血压的作用，还可以改善心，脑等重要脏器的血流量[2]。尼卡地平作为二氢吡啶类钙离子拮抗药在抗脑缺血再灌注损伤方面，国内外研究较少。有研究表明：尼卡地平为一种比较新型的L型Ca2+拮抗剂，它能减少脑缺血之后细胞Ca2+内流，从而降低脑缺血再灌注损伤过程中的细胞内Ca2+浓度，可能有脑保护作用[3]。

2 技术设计

沙土大鼠30只

实验组：20只，采用栓线法制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型阻断2 h，于再灌注前20 min，再灌注后1 h，3 h，6 h，分别给予腹腔内注射尼卡地平（1 mg/kg）

假手术组：5只，除不插栓线外其余步骤同上。并于再灌注前20 min，再灌注后12 h、1 d、2 d、3 d给予腹腔注射等量的等渗生理盐水。

对照组：5只，采用栓线法制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，于再灌注前20 min，再灌注后12 h、1 d、2 d、3 d给予腹腔注射等量的等渗生理盐水。

取脑组织做以下检查：

1、脑组织大体病理变化

2、脑组织显微镜下的病理变化

3、正常、凋亡神经元计数

2.1 模型的制备

选取沙土鼠30只，制备大鼠右侧MCAO模型采用Zealonga改良线栓法。

沙土鼠用10%水合氯醛采用腹腔内注射麻醉。以仰卧位来固定，采用颈部正中线切口，沿着胸锁乳突肌的内侧缘分离肌肉和筋膜，分离出左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA），在CCA的远心端和近心端ECA处来挂线备用。采用微动脉夹暂时性的夹闭ICA，然后在近心端处结扎CCA、ECA，然后再在距CCA分叉部大约4 mm处剪开一个小口，将栓线插入到ICA处，这时用绕在CCA远心端处的细线轻轻的系牢栓线。用眼科镊来轻轻推动栓线，从血管的分叉处来开始算距离，在插人深度为18 mm的时候，紧紧的系牢CCA远心端处的细线。阻断其血流2 h后，再抽出栓线，从而实现再灌注。

2.2 标本的采集

对照组和尼卡地平处理组在缺血再灌注前20 min，再灌注后1h 3h 6h分别处理。

以0.5%戊巴比妥钠40 mg/kg对于实验动物进行腹腔注射麻醉后，打开胸腔，从而暴露心脏，然后先以生理盐水150 mL来快速的冲洗，再把血液全部冲洗掉，接着可以用4%的多聚甲醛（0.1 mmol/L，pH7.4）150 mL来缓慢的灌注，从而充分固定脑组织。接着取下脑组织，用4%的多聚甲醛来再固定12～24 h，从而在前囟后1 mm处冠状切取2 mm的脑组织块，来常规石蜡包埋做病理的切片（5微米）。按照需要挑相邻的两片，其中一片用于HE染色，另外一片用于TUNEL染色。

3 数据收集

表1 脑缺血再灌注后海马CA1区正常锥体神经元数（n个/mm）

4 结果结论

尼卡地平对脑缺血再灌注损伤有一定抗凋亡作用。尼卡地平处理组正常锥体细胞数最多，受损细胞数量较少。原因可能是：脑缺血再灌注会损害脑组织，而采用尼卡地平可以避免这种情况发生；脑缺血症状缓解后钙离子会快速回流到细胞内，从而促进细胞新陈代谢，恢复大脑正常供血。

[1] 王向慧,王 迪.尼莫地平对大鼠急性脑缺血再灌注损伤NF-κB和caspase- 3蛋白表达的影响[J].中国生化药物杂志,2015(1):10-13.

[2] 刘 赋,张 强,张 宇,等.脑缺血再灌注后不同时间点病理变化与细胞凋亡的研究[J].陕西医学杂志》,2007,36(4):395-397.