MUM1/IRF4联合β2微球蛋白检测与外周T细胞淋巴瘤预后的相关性研究

张琳 ，夏建胜 ，韩方征 ，董巧凤

1.泰山医学院，山东泰安 271000；2.菏泽市立医院，山东菏泽 274000

外周T细胞淋巴瘤是一组罕见且具有异质性的临床侵袭性疾病，预后不良[1]。在欧美国家中PTCL约占非霍奇金淋巴瘤（NHL）的10%，而在亚洲国家这一比例达到了20%～35%，且常发生于青壮年男性[2]，治疗反应差异大，治疗效果总体较差，使其逐渐得到更多的重视。1993年制定的侵袭性非霍奇金淋巴瘤的国际预后指数（IPI）评分被用来指导NHL的分层治疗、判断预后转归已超过20年[3]。但IPI主要对弥漫大B细胞性淋巴瘤有较好的预测价值，由于PTCL异质性较强，相同IPI评分的淋巴瘤患者其生存状态也不尽相同[2]。因此，寻找准确识别PTCL预后的指标成为学界关注的热点。随着研究的进展，某些蛋白分子水平标志对PTCL预后的价值已初步显现。很多文献[4-5]报道多发性骨髓瘤癌基因-1/干扰素调节因子-4（MUM1/IRF4）的表达与B细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤的侵袭性有关，但它的表达与PTCL预后的关系研究较少，此外，国内外有研究表明血清β2-微球蛋白（β2-MG）水平与NHL患者预后有一定的关系，但这些研究对象多限于B细胞淋巴瘤[6-7]，鲜见血清β2-MG与PTCL预后的专项报道[8-9]。该研究探讨2007年1月—2016年12月菏泽市立医院79例PTCL患者标本中MUMl/IRF4与β2-MG的表达，尤其是MUMl/IRF4与β2-MG同时表达，并分析其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

调取菏泽市立医院病理科外周T细胞淋巴瘤石蜡包埋标本79例，所有标本均依次经过10%福尔马林固定、常规脱水、石蜡包埋切片、HE染色，经两名病理科主任医师独立进行病理学确诊，并按照WHO（2008年）血液和淋巴系统肿瘤分类进行病理分型。其中结外NK/T细胞淋巴瘤 (ENKL)共32例为40.5%，血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤(AITL)共10例为12.7%，外周T细胞淋巴瘤NOS(PTCL-NOS)共18例为22.8%，间变大细胞淋巴瘤 (ALCL)共6例为7.6%，成人T细胞白血病/淋巴瘤 (ATLL)共5例为6.3%，肠病相关性T细胞淋巴瘤(EATCL)共5例为6.3%，肝脾T细胞淋巴瘤(HSTCL)共 2例为 2.5%，皮下脂膜炎样T淋巴瘤(SPTCL)共1例为1.3%

1.2 实验试剂

MUMl/IRF4单克隆抗体购自北京中杉金桥生物公司产品，β2微球蛋白所用试剂盒由天津九鼎医学生物工程有限公司提供。

1.3 检测方法

MUMl/IRF4的测定应用免疫组织化学EnVision二步法，血清β2微球蛋白的测定采用放射免疫分析法，操作方法均按其说明书进行。

1.4 结果判断

MUMl/IRF4所有染色标本均为由单一病理学家独立审查，他们均不了解患者的临床信息。①阴性：无肿瘤细胞显色或显色数＜30%；②阳性：肿瘤细胞显色数≥30%。测定β2微球蛋白的灵敏度为0.15 mg／L，在该研究中超过3 mg/L时为阳性。

1.5 疗效评价

近期疗效评价采用WHO实体瘤疗效评价标准分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)和进展(PD)。以CR＋PR定义为有效，以SD＋PD定义为无效。总生存时间（OS）为自确诊后至死于任何疾病时间或末次随访时间。

1.6 随访

随访方式包括查阅病历和电话等，末次随访时间为 2017年6月，79例PTCL病例中66例有完整的生存和随访资料，其中13例失访。

1.7 统计方法

采用SPSS 18.0统计学软件行Kaplan-Meier法计算生存率，Log-rank法单因素预后分析，百分数的比较用χ2检验及Fisher精确检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MUM1/IRF4在各型PTCL中阳性结果及病理图片

79例PTCL患者中，MUM1/IRF4表达的阳性率为64.6%（51/79）。其中ALCL阳性率最高为83.0%（5/6），AITL共 7例为 70.0%，ENKL共 22例为 68.0%，PTCL-NOS共12例为67.0%，ATLL共2例为40.0%，EATCL共2例为40.0%，HSTCL共1例为50.0%。见图1。

图1 MUM1/IRF4在PTCL中的阳性表达与对照（×400）

2.2 MUM1/IRF4和β2-MG在PTCL患者中的表达及其与临床资料的相关性

51例MUM1/IRF4阳性表达的PTCL患者中42例同时表达β2-MG，占其总数的82.3%。将患者按年龄、行为状态、Ann Arbor分期、结外受侵部位数目、LDH高低以及IPI评分分组，结果显示MUM1/IRF4与β2-MG同时表达与Ann Arbor分期、结外受侵部位数目、LDH 高低以及 IPI评分相关（P＜0.05），而与年龄、行为状态评分无关，见表1。

表1 MUM1/IRF表达和β2-MG同时表达与PTCL临床资料的相关性

2.3 MUM1／IRF4蛋白及β2MG的表达与近期疗效关系

79例中66例患者可获得治疗信息，66例患者均接受了不少于2次CHOP方案进行化疗，其中CR18例，PR21例，SD15例，PD12例，CR 率为 27.3%，有效（CR＋PR）(RR)率为 59.0%。MUMl/IRF4阳性表达者治疗有效率为50.0%(23/46)；MUMl/IRF4阴性表达者治疗有效率80.0%(16/20)，两者比较差异有统计学意义(χ2=5.190，P=0.023，P＜0.05)。 β2微球蛋白阳性表达者治疗有效率为44.4%(20/45)；β2微球蛋白阴性表达者治 疗 有 效 率 90.5%(19/21)(χ2=12.551，P=0.000)。MUM1＋/β2-MG＋、MUM1-/β2-MG＋、MUM1＋/β2-MG-、MUM1-/β2-MG-表达的有效率分别为42.1%、57.1%、87.5%、92.3%（χ2=13.344，P=0.003）， 各组间差异有统计学意义，见表2。

表2 MUM1/IRF4蛋白及β2MG的表达与近期疗效的关系

2.4 MUM1／IRF4蛋白及β2微球蛋白表达与远期生存关系

79例患者中66例可进行生存分析，患者随访2～33个月，中位随访时间18个月，66例中，死亡33例，其余33例仍在随访中。全组中位OS为16个月(95%CI：12～20 个 月)， 中 位 数 OS Mum1/IRF4 阴 性 和Mum1/IRF4 阳性组为 20和 13个月（P=0.000）(图 2)。进一步比较MUM1＋/β2-MG＋中位数OS为 13个月，MUM1＋/β2-MG-中位数 OS 为 15 个月，MUM1-/β2-MG＋中位数 OS 为 18 个月，MUM1-/β2-MG-中位数OS为20个月，按照Log Rank检验的结果，当MUM1/IRF4和β2-MG同时表达时生存率最低，而MUM1/IRF4和β2-MG同时阴性时，与其他组相比较显示出较高的生存率（OS,P=0.000）（图 3）。

图2 MUM1/IRF4蛋白不同表达PTCL患者OS的生存曲线

图3 MUM1、β2-MG分别表达及共表达PTCL患者OS的生存曲线

3 讨论

PTCL是一组异质性肿瘤，诊断时多为晚期，通常具有更强的临床侵袭性，预后不良，许多学者都从各方面积极寻找能提示预后的因素。Gallamini等[10]的一项前期研究基于4个简单的临床变量：年龄，ECOG评分，LDH水平和BMI，提出了一种新的PTCL-NOS预后模型，称为PIT。然而，这种模型对PTCL的预后价值尚待进一步研究。T细胞淋巴瘤在国内NHL的比例又高于国外。目前，国内也有许多研究探讨其预后因素，结果不尽相同。

Mum1/IRF4是干扰素调节因子IRF家族中的一员，通过一系列信号转导作用参与免疫调控，介导淋系、髓系及树突细胞(DC)等免疫相关细胞的发育和分化。它的癌基因功能最先在多发性骨髓瘤中被识别，又被称为多发性骨髓瘤癌基因1[11]，并且是活化的B细胞如弥漫性大B细胞淋巴瘤的生物标志物[12]，在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用[4]。该研究通过MUM1/IRF4在各类PTCL中阳性表达的结果表明，在所有患者中，MUM1/IRF4阳性表达者51例（64.6%），存在高表达性，这与孙妍等[11]的研究结果一致。在该研究中，MUMl/IRF4阳性表达者治疗有效率为50.0%，MUMl/IRF4阴性表达者治疗有效率80.0%（P＜0.05），推测MUMl/IRF4可能参与PTCL的发病过程，MUMl/IRF4高表达可能与PTCL预后不良有关。成人T细胞白血病/淋巴瘤在各类PTCL中的MUMl/IRF4表达率最低为40.0%，由此推测MUMl/IRF4在T淋巴细胞的活化中也起到重要作用。MUMl/IRF4蛋白抑制剂有可能成为PTCL新的治疗靶点。

已有很多研究证明血清β2-MG水平与大多数类型NHL的预后相关，主要包括慢性淋巴细胞性白血病、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、和弥漫性大细胞淋巴瘤[6,7,13]。有观察表明血清β2-MG高水平与肿瘤负荷相关[7,8,14]，也有研究表明，血清β2-MG高水平对预后的影响有限[15]。该研究中，β2-MG阳性表达者治疗有效率为44.4%，β2-MG阴性表达者治疗有效率90.5%，两者比较差异有统计学意义(P＜0.05)。说明血清β2-MG高水平在PTCL中亦提示不良预后。

但对于血清β2-MG水平和MUM1/IRF4蛋白联合表达对PTCL的研究目前尚未有人报道。该研究通过比较 MUM1/IRF4＋和 MUM1/IRF4-，MUM1＋/β2-MG＋和 MUM1-/β2-MG＋、MUM1＋/β2-MG-、MUM1-/β2-MG-组的治疗有效率、中位数OS、Kaplan-Meier生存分析均显示MUM1／IRF4、β2-MG蛋白表达的不良预后价值，证明了其表达对外周T细胞淋巴瘤预后的负面作用，反映了肿瘤多基因异常导致的更为不良的疾病后果。

这是一项回顾性研究，尽管仅从已被证实为PTCL患者的石蜡包块的中选择病例，但我们的研究仍表明MUM1/IRF4、β2-MG蛋白联合表达的不良预后价值，证明了其表达对外周T细胞淋巴瘤疾病预后的负面作用，有助于临床工作中更精确判断PTCL的预后，制定更合理的治疗方案。此后将以前瞻性的设计，在多中心、大样本的前提下进行临床相关性研究，获得更加稳定、客观的数据，指导外周T细胞淋巴瘤预后的判断及分层精准治疗。

[1]Hsi ED,Horwitz SM,Carson KR,et al.Analysis of Peripheral T-cell Lymphoma Diagnostic Workup in the United States[J].Clin Lymphoma Myeloma Leuk，2017，17:193-200.

[2]张慕晨,许彭鹏,钟慧娟,等.NCCN-IPI对外周T细胞淋巴瘤患者化疗后的预后评估价值[J].中华血液学杂志,2017,38(9):772-777.

[3]Montalbán C,Díaz-López A,Dlouhy I,et al.Validation of the NCCN-IPI for diffuse large B-celllymphoma(DLBCL):the addition of β-microglobulin yields a more accurate GELTAMO-IPI[J].Br J Haematol，2017，176:918-928.

[4]张森森,陈丽娟.MUM1/IRF4在淋巴系统肿瘤中的表达及意义[J].中华血液学杂志,2013,34(10):907-909.

[5]Satou A,Asano N,Kato S,et al.Prognostic Impact of MUM1/IRF4 Expression in Burkitt Lymphoma (BL):A Reappra isal of 88 BL Patients in Japan[J].Am J Surg Pathol 2017，41:389-395.

[6]Kang J,Yoon S.Relevance of prognostic index with β2-microglobulin for patients with diffuse large B-cell lymphoma in the rituximab era[J].Blood Res，2017，52:276-284.

[7]Kanemasa Y,Shimoyama T,Sasaki Y,et al.Beta-2 microglobulin as a significant prognostic factor and a new risk modelforpatients with diffuse large B-cell lymphoma.Hematol Oncol，2016.

[8]Xie W,Hu K,Xu F,et al.Significance of clinical factors as prognostic indicators for patients with peripheral T-cell non-Hodgkin lymphoma:A retrospective analysis of 252 cases[J].Mol Clin Oncol，2013，1:911-917.

[9]潘战和,黄慧强,苏安,等.外周T细胞淋巴瘤血清β2-微球蛋白水平与国际预后指数的关系及预后分析[J].白血病·淋巴瘤，2012(9):528-530.

[10]Gallamini A,Stelitano C,Calvi R,et al:Peripheral T-cell lymphoma unspecified (PTCL U):a new prognostic model from a retrospective multicentric clinical study[J].Blood，2004，103:2474-2479.

[11]孙妍,张清媛,张明辉,等.外周T细胞淋巴瘤MUM1/IRF4蛋白的表达及其临床意义[J].临床肿瘤学杂志，2012，17(3):215-218.

[12]Heo MH,Park HY,Ko YH,et al.IRF4/MUM1 expression is associated with poor survival outcomes in patients with peripheral T-cell lymphoma[J].J Cancer 2017，8:1018-1024.

[13]Wang XL,Wang XL,He S.Association of β2-microglobulin with the prognosis of non-Hodgkin's lymphoma:a meta analysis[J].Int J Clin Exp Med 2015，8:3992-3999.

[14]Chen Y,Neelapu S,Feng L,et al.Prognostic significance of baseline peripheral absolute neutrophil,monocyte and serum β2-microglobulin level in patients with diffuse large b-cell lymphoma:a new prognostic model[J].Br J Haematol，2016，175:290-299.

[15]Suzuki K,Terui Y,Yokoyama M,et al.Prognostic value of high thymidine kinase activity in patients with previously untreated diffuse large B-cell lymphoma treated by rituximab,cyclophosphamide,doxorubicin,vincristine and prednisolone [J].Leuk Lymphoma，2013，54(11):2412-2417.