山鸡传染性法氏囊病免疫与效价评估

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(1.上海欣灏珍禽育种有限公司，上海 奉贤 201403； 2.上海市奉贤区动物疫病预防控制中心，上海 奉贤 201400)

0 引言

鸡传染性法氏囊病(IBD)是一种以法氏囊发炎、坏死、萎缩和囊内淋巴细胞严重受损为特征的急性、接触性传染病，其病原体为传染性法氏囊病毒(IBDV)。法氏囊是禽类特有的免疫器官，又称腔上囊，其在70～80日龄时的体积最大，以后逐渐消退，至性成熟时完全消失，因此IBD主要发生于鸡的早期生长阶段。

IBD是目前养禽业中最重要的疫病之一，其对所有品种的鸡均可感染，且发病率可达100%，但死亡率较低，为5%～15%；由于IBD可引起鸡的法氏囊炎症而造成机体免疫抑制，使病鸡马立克氏病和新城疫等疫苗免疫的反应能力下降以及对球虫病和大肠杆菌等细菌性疾病更易感，对鸡群造成更大损失。

对IBD的预防，目前各山鸡养殖场主要是采用蛋种鸡的免疫程序来对种山鸡实施免疫，但在生产实践中常会出现免疫失败的现象。为此，笔者选择了一家大型山鸡育种公司的一批种山鸡(雏苗)，开展了一轮山鸡全周期(一个世代、56周)IBD疫苗免疫和课题效价评估的的试验，并根据试验结果提出了山鸡专用的免疫程序。现将试验情况汇总如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验山鸡

选择某大型山鸡养殖场2016年7月2日出雏的祖代1日龄种山鸡雏苗1万羽；该批雏苗的入孵种蛋为43周龄健康种山鸡所产；孵化过程严格按照种蛋孵化流程操作。记录显示，该批入孵种蛋的亲本母山鸡在整个饲养期已分别于19日龄和26日龄采用IBD活疫苗(B87株)进行了2次饮水免疫，并于125日龄时实施了IBD灭活疫苗的免疫。

1.1.2 免疫疫苗

(1)IBD灭活疫苗:IBD基因工程亚单位疫苗；生产商：青岛易帮生物工程有限公司；批号：160041405；有效期：2017.06.30。

(2)IBD活疫苗:IBD活疫苗(B87株)；生产商：青岛易帮生物工程有限公司；批号：160161101；有效期：2018.05.19。

1.1.3 检测试剂

IBD病毒抗体检测试剂盒；供应商：北京爱得士元亨生物科技有限公司；批号：WM083。

1.2 方法

1.2.1 试验山鸡饲养

本试验对试验山鸡的整个饲养期进行IBD抗体的全程跟踪监测。该批试验山鸡的全饲养期为56周，分为育雏期、保育期、育雏期和种用期4个阶段。其中：0～35日龄为育雏期，采用4层叠层式立体育雏笼饲养，育雏舍采用智能内环境自动控制系统；36～55日龄为保育期，采用内环境水供暖自动加热系统和双层阶梯式保育笼饲养。

育成期分为育成前期和育成后期2个阶段，其中： 56～120日龄为育成前期，采用暗光照地面平养方式饲养；121日龄～开产(190～195日龄)为育成后期，又称为产蛋准备期；采用3层叠层单鸡单笼式种山鸡笼饲养。试验山鸡从开产～56周龄淘汰为种用期，采用3层叠层单鸡单笼式种山鸡笼饲养。

1.2.2 试验山鸡免疫

对试验山鸡全周期实施以下IBD疫苗的免疫，详见表1。

表1 试验山鸡IBD免疫程序表

1.2.3 采样与样品处理

(1)亲本母山鸡采样:在留取种蛋(43周龄)时随机采取20羽试验山鸡亲本母山鸡的血液样品。

(2)育雏期采样:随机抽取20羽0日龄雏山鸡血液样品；以后每隔10天随机抽取20羽雏山鸡采取血样，共采集0日龄、10日龄、20日龄、30日龄等四个批次、80份血样；由于雏山鸡体型偏小，此期采血可取心脏采血法或直接颈动脉放血采样。

(3)育成期及后续样品采集:育成期60日龄时随机采取20份血样，以后每隔30 d在试验山鸡群中随机采取20份血样，共采集60日龄、90日龄、120日龄、150日龄、180日龄、210日龄、240日龄、270日龄、300日龄和330日龄等10个批次、200份血样。

(4)样品处理与保存:整个试验共采集试验山鸡14个批次、280份血液样品和43周龄亲本母山鸡1个批次、20份血液样品，总数为15个批次、300份血液样品；每个批次样品在采集后立即分离血清，标记后冷冻保存；至全部15个批次血样全部采集完成后集中检测。

1.2.4 样品检测

(1)检测方法：采用ELISA方法对300份试验样品同时进行抗体检测。

(2)判定标准：阴、阳对照成立确定试验有效，样品OD值>临界值判为阳性，否则判为阴性。

2 结果与分析

2.1 结果

2.1.1 亲本母山鸡一个批次血样IBD抗体ELISA检测结果

20份43周亲本母山鸡血样的IBD抗体ELISA检测结果，IBD抗体95%合格，平均OD值0.17(临界值0.0819、标阳OD均值0.232)。亲本母山鸡样品IBD抗体检测OD值分布情况见表2。

表2 样品检测结果汇总表

2.1.2 试验山鸡IBD抗体ELISA检测结果

(1)试验山鸡各批次血样ELISA检测IBD免疫抗体的OD均值见表3，其全阶段免疫抗体变动情况见图1。

表3 试验山鸡IBD抗体ELISA检测结果汇总表

图1 试验山鸡IBD免疫抗体变动曲线图

(2)试验山鸡IBD抗体检测阳性合格结果:14个批次的试验山鸡血样ELISA检测IBD免疫抗体阳性合格率见表4，不同阶段阳性合格率变化情况见图2。

表4 试验山鸡各批次样品IBD抗体阳性合格率结果汇总表

图2 试验山鸡各批次样品IBD抗体阳性合格率变化曲线图

2.2 分析

2.2.1 亲本母山鸡IBD母源抗体情况

从表2可以看到，亲本母山鸡IBD免疫抗体总体良好，基本呈正态分布，唯一1份不合格样品的OD值也与临界值较接近，大部分样品OD值界于临界值与全部样品均值之间，另有3份样品的OD值超过了检测试验标阳OD值。

2.2.2 试验山鸡IBD抗体情况

结合试验山鸡的生长阶段，分析表3可以发现，在全部14个批次280份检测结果中，120日龄以前的7个批次样品的OD值小于临界值。其中：0日龄20份样品的OD值为0.06，阳性合格率仅为15%，提示IBD母源抗体的遗传性较差，亲本母山鸡较高的母源抗体末能较好地传给子代，后续6个批次样品的OD均值也基本在这一水平波动；期间虽经IBD中等毒力弱毒疫苗于19日龄和26日龄二次饮水免疫，但IBD免疫抗体末获提高，说明弱毒疫苗饮水免疫的效果较差；125日龄采用IBD灭活疫苗肌注免疫后，免疫抗体OD均值快速上升，150日龄批次样品检测结果达到0.136,180日龄批次继续上升至0.185，但抗体上升期较短，在210日龄时已快速下降至0.122，240日龄时的OD均值已消退到0.095，接近OD临界值，说明IBD灭活苗肌注免疫有较好的免疫作用，但抗体有效维持期仅约4个月。其后，3个批次样品的OD均值又出现了一轮强劲反弹，但期间末进行任何相关的免疫措施，提示试验鸡群在此阶段可能感染了IBD病毒。

2.2.3 试验山鸡IBD抗体阳性合格情况

分析表4和图2，可见试验鸡群IBD免疫抗体阳性合格率有2个明显的变化区间，一个是在120日龄以前的低水平区间，另一个是在150日龄后的高水平区间，而125日龄的免疫是二个区间的拐点。

在低水平区间7个批次样品中，阳性合格率最高的仅为25%，最低为0。虽然二次饮水免疫也未见效，抗体检测OD均值无明显提高；在高水平区间，又可分为2个高峰阶段，第一个高峰段是125日龄免疫后，抗体快速上升并维持3个月后的消退阶段，此阶段抗体阳性合格率最高值达到了80%；第二个高峰段是本次试验的最后3个批次样品，在灭活疫苗抗体逐步消退至临界值后，可能是受到IBD野毒感染，试验鸡群的抗体阳性合格率出现了一波强势反弹，高峰值达到了90%，这一变动现象与IBD抗体OD均值的变动情况相符。

3 讨论

(1)试验结果显示，亲本母山鸡拥有较高的IBD母源抗体，但试验山鸡未能通过种蛋垂直获得这些较高的IBD母源抗体，而且在2次使用D78中毒活疫苗进行饮水免疫后，未能有效提升试验山鸡早期免疫抗体；但青年种山鸡在上笼后使用灭活苗进行肌注免疫后，可使IBD免疫抗体快速提升至较高水平，且可有效维持3个月以上，说明2次中等毒力活疫苗的饮水免疫，虽然未能有效提高早期免疫抗体水平，但仍起到了较好的基础免疫作用，为灭活疫苗的免疫起到一定的协同作用。

(2)相关资料显示，免疫接种IBD疫苗是预防本病的一种有效措施。目前在我国批准使用的疫苗主要有弱毒苗、灭活苗和进口的中等毒力活疫苗(D78)。临床上低毒力株弱毒疫苗主要用于无母源抗体或低母源抗体的鸡群，一般在出壳后用滴鼻、点眼+肌注的方式超前免疫1次，2～3周时用中毒活疫苗加强1次；中毒活疫苗主要是供有母源抗体的鸡群使用；灭活疫苗主要是供种鸡群使用。

(3)结合本次试验结果，建议山鸡IBD的免疫程序见表5。

表5 种山鸡IBD免疫程序

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