渔药的给药方法与技术（3）

孟思妤 孟长明 陈昌福

（1.河南省新乡市康大消毒剂有限公司，453700；2.华中农业大学，430070）

抗菌药的稀释剂通常用纯水。一般可按商品药使用说明书上的配制。按1.0g药物需加多少毫升水或配多少毫克饲料，就相当于配制试验药液所加纯水的毫升数。如10g药物可配50kg饲料，其换算方法为1g本品加5000mL纯水。此溶液即为用于做药敏试验的药液。

因为不同的致病菌对同种药物的敏感性可能是不相同的，采用药敏片法测定相同药物对不同种类的致病菌的抑菌效果时，可能会观察到直径不同大小的抑菌圈。如果致病菌不纯，该供试致病菌在试验中所产生的抑菌圈，与纯培养状态下菌株所产生的抑菌圈大小差异比较大，就会影响对药敏试验结果判断的准确性，最终导致水生动物执业兽医在疾病治疗中，难以参考药敏试验结果选择到合适的药物。

一般而言，应该避免直接挑取初分离的菌落完成药敏试验，除非在暴发性疾病流行的紧急情况下、当革兰染色提示出分离微生物为单一种类时，可以直接挑取分离菌落做药敏试验。但是，其结果也仅能作为药敏试验结果的初步报告，随后必须用标准方法重复完成药敏试验。

在涂有致病菌的平皿上，药敏片中的抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其药物浓度呈梯度递减。因此，在药敏片周围一定距离内的致病菌生长受到抑制。在经过一定时间培养后，可形成一个抑菌圈（图1）。

以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。每个平板可放4～6支小管。等待5分钟后，分别向各小管中滴加一定数量的各种药液，勿使其外溢。置适当温度条件下培养一定时间，观察结果。

图1 牛津杯法抑、杀菌试验结果

表1 药敏试验结果判定标准

抑菌圈越大，说明该菌对此药物越敏感，反之就敏感性越差，若无抑菌圈形成，就说明该菌对此供试药物具有耐药性。其抑菌圈直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。因此，药敏试验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准（表1）。

影响药敏片试验结果的主要因素有很多：首先，就是培养基。致病菌药敏试验所用的培养基种类较多，在一般情况下，可以参照美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）统一要求的水解酪蛋白（Meller-Hinton，M-H）培养基，因为这种培养基中含有的低胸腺嘧啶是与磺胺类药物竞争的物质。因此，进行致病菌药敏试验的效果比较好。此外，这种培养基中还含有适量的Ca、Mg，在培养基中起到触媒的作用。但是，有些致病菌对培养基中的成分有特殊的要求，这类特殊的微生物就需要用特殊的培养基才能完成药敏试验。例如，对于弧菌中的专性嗜盐菌株、美人鱼发光杆菌杀鱼亚种、发光杆菌美人鱼亚种和杀鲑弧菌的药敏试验培养基，最好是采用添加有1.5%NaCl的MHA培养基；柱状黄杆菌、嗜鳃黄杆菌的药敏试验培养基要用经过稀释的MHA培养基（或者采用Cytophaga agar，配方是0.05%（W/V）胰蛋白胨，0.05%酵母膏，0.05%醋酸钠，0.02%牛肉膏，1.0%琼脂，pH7.2～7.4）；而嗜冷黄杆菌的药敏试验培养基要用Cytophaga agar培养基（或者采用TYE agar，配方是0.14%胰蛋白胨，0.04%酵母膏，0.05% MgSO47H2O，0.05%CaCl2H2O，1.0%琼脂，pH7.2）、海豚链球菌的药敏试验培养基要用添加5.0%羊血的MHA。培养基中还有适量的Ca、Mg，在培养基中起到触酶的作用，其含量的变化，可影响氨基糖苷类和四环素对部分致病菌的药敏试验结果，这些物质的含量过高，抑菌圈会变小，含量过低，抑菌圈就会很大。致病菌药敏试验的培养基厚度大约为4mm，若培养基厚度大于4mm，会使细菌出现耐药；若厚度小于4mm，则可能导致本应耐药的容易出现敏感。所以，试验时最好不要把药敏片放在中央部位，而应均匀地排布在平皿周围的培养基上。制作药敏试验的培养基用水中的一些物质，主要是Ca、Mg、A1等矿物质离子，也会在很大程度上影响着药敏试验的结果。