Sevage法纯化紫菜粗多糖的工艺研究

刘子健，岳 玲

（1.松原市油田总医院；2.松原市食品药品监督管理局，吉林松原138000）

紫菜（Porphyra），是在海中互生藻类的统称。属于红藻纲，红毛菜科。种类多，主要有条斑紫菜、坛紫菜、甘紫菜等。中国沿海地区已进行人工栽培。21世纪初中国紫菜产量跃居世界第一位。紫菜其中富含蛋白质、多糖和碘、磷、钙等，营养十分丰富。其中的紫菜多糖实验研究表明：紫菜多糖主要由岩藻糖、半乳糖、甘露糖和木糖组成，是一种糖醛酸含量较高的酸性杂多糖。对人体具有很好的保健作用，可以增强肌体免疫力，对某些淋巴细胞具有明显的抑制作用，而且，对心血管疾病有较好的预防和治疗作用[1-3]，紫菜是一种药食两用很有发展前景的资源。为了很好地利用紫菜资源，更好的发挥紫菜多糖的功效。本文对通过水提醇沉法制得的粗多糖进行纯化除杂研究，为有效利用和开发紫菜多糖提供可靠依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

U1901双光束紫外可见分光光度计（北京普西通用仪器责任有限公司），电子天平BS224S（赛多利斯科学仪器北京有限公司），数显恒温水浴锅（HH-2型，常州国华电器有限公司）。

1.2 材料

紫菜（购于长春农贸市场）、苯酚、浓硫酸、乙醇等均为分析纯；标准品：无水葡萄糖（飞宇生物科技有限公司，含量大于98%，批号：FY18720206）。

2 试验方法

2.1 紫菜粗多糖的提取[4]

取紫菜适度粉碎后，加水煎煮3次，合并提取液浓缩至原药液的1/3，加浓缩药液4倍量的无水乙醇后，放置过夜进行沉淀。抽滤后用无水乙醇、丙酮和乙醚进行依次洗涤，干燥至恒重，即得紫菜粗多糖样品。

2.2 Sevage法纯化紫菜粗多糖

精密称取紫菜粗多糖3份，加蒸馏水使成4mg/ml、8mg/ml、12mg/ml的粗多糖溶液；依据正交实验设计方案，加入Sevage试剂，适度振摇后，充分静置，分出下层（Sevage试剂层），将剩余的药液和析出物置于离心机内离心，向倾出的上清液中加乙醇至含醇80%，放置过夜，离心，即得紫菜多糖沉淀。

2.3 紫菜粗多糖样品液的配制

分别精密称取干燥至恒重的上述3种紫菜多糖各0.5g（9份），加蒸馏水定容至500ml容量瓶中，即得紫菜多糖样品液（1～9号）。

2.4 多糖的测定方法[4]

药材多糖的测定以葡萄糖为标准品，采用硫酸-苯酚比色法。即：精密吸取样品溶液2ml，再各加1.0ml6%苯酚试剂，混匀，精密加入5ml浓硫酸，振摇后放置5min，置沸水浴中加热15min，立即转入冷水浴中冷却至室温，以蒸馏水为空白，在490nm波长处测定吸收度，依据标准曲线回归方程计算即得多糖含量。

2.5 标准样品溶液的配制

精密称取0.0149g干燥至恒重的标准品无水葡萄糖，加入100ml容量瓶中，用水溶解至刻度，使成149ug/ml即得。

2.6 标准曲线的制备[5]

依据参考文献[6]标准曲线制备方法得：以浓度C对吸收度A回归方程

3 紫菜多糖纯化条件的实验设计与统计学分析

3.1 紫菜多糖提取条件的实验设计

依据正交试验设计法，在对紫菜多糖的纯化条件进行单因素考察的基础上，依据L9(34)正交表进行试验，因素-水平设计如表1。

表1 正交水平表

3.2 实验结果与分析

表2 正交实验表

根据表1进行正交设计试验结果和方差分析，见表2和表3。

表3 方差分析表

，则该因素影响显著，这里取

4 结论

正交试验结果经过计算得知，影响紫菜多糖得率从主到次的因素排序为A，C，B，即紫菜多糖浓度，Sevage试剂中氯仿与正丁醇体积比，Sevage试剂添加量与紫菜多糖样品液体积比。因为极差R大小顺序是，由，极差越大，对实验的结果影响就越大。

正交试验结果经过计算得知，因素 的水平1比其他两个水平好，B的水平3比其他两个水平好，C的水平1比其他两个水平好，所以，经纯化后紫菜多糖中多糖含量最高的最佳工艺条件是A1B3C1，即：紫菜多糖浓度4mg/ml，Sevage试剂添加量与紫菜多糖样品液体积比1/6，Sevage试剂中氯仿与正丁醇体积比。样品浓度，试剂添加量与供试液体积比3/1。因为均值Ki因素反映了该因素水平对指标的影响，指标值越大越好，由

在水平下，由于FA，FB，FC均大于19，故ABC三因素对紫菜多糖的纯化均有显著影响。

5 讨论

多糖的纯化方法有很多，本实验仅对Sevage法纯化紫菜粗多糖进行了实验研究，并且是在单因素考察的基础上，只对纯化后的紫菜多糖中总糖含量进行了计算和分析，得出最佳工艺方案。但是，由于此法应用的是萃取法，处理的样品量较少，在纯化过程的操作中，出现了乳化现象，难免有多糖的损失，因此，此项研究许多指标需要考量，例如多糖的回收率情况等。

紫菜多糖作为食品紫菜中的主要成分之一，具有多方面的生理活性，并且，作为有药用价值的食品，无毒、无不良反应、无副作用，若能将其有效地开发和利用，必将对人们的健康和保健具有很重要的意义，以后会有很好的发展前景。

[1]赵国华,陈宗道,李志孝,等.活性多糖研究进展[J].安徽农业科学,1995,23(03)：270-271.

[2]黄芳,蒙义文.活性多糖的研究进展[J].天然产物研究与开发,1999,11(05)：90-98.

[3]马红樱,张德禄,胡春香,等.植物活性多糖研究进展[J].西北师范大学学报（自然科学版）,2004,40(03):112-117.

[4]纪耀华,纪跃芝,等.大黄粗多糖传统水提-醇沉法最佳工艺研究[J].中国食物与营养,2010(01):62-65.

[5]纪耀华,纪跃芝,等.微波法提取大黄多糖最佳工艺优化研究[J].中药材,2009,(32).