液氮研磨和机械粉碎对云芝多糖提取的影响

王梓桐 林海

摘 要：云芝免疫调节多糖是云芝中生物调节活性突出的一类物质。本实验是根据前人研究的基础上参考真菌活性的提取工艺，分析液氮和机械破碎对云芝多糖的影响，选取出提取云芝多糖的最佳工艺。结果表明，在液氮研磨的条件下80℃时200目是最佳的工艺条件。

关键词：云芝 液氮 多糖 蛋白

中图分类号：G63 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2018）01（a）-0245-02

云芝的药效成分有多种，云芝活性物质有免疫调节蛋白和多糖，目前云芝蛋白和多糖有很多种提取方法，一般的方法常先用水提醇沉获得粗提物，然后在此基础上采用酶解、微波、超声波，膜处理和机械粉碎等方法进行辅助提取或精制[1-2]。本实验通过液氮研磨和机械粉碎两种方式对云芝子实体进行处理，并在不同目数和不同温度条件下用水提法提取多糖进行初步研究。

1 实验材料

云芝实体、液氮，苯酚、浓硫酸、甲醇、磷酸。

筛子：40目筛，100目筛，200目筛（浙江上虞市道墟仪器筛具产）。

2 实验方法

取一定量云芝实体两份，50℃烘干后分成两份。一份粉碎机处理。另一份液氮研磨至粉末状。然后分別过40目筛、100目筛和200目筛。

取上述制备的两种粉末各5g，分别加入200mL双蒸水，37℃、80℃条件下提取3h，每隔15min取1.5mL反应液。离心后取上清待测；在100℃条件下，提取3次每次60min，每次加水150mL离心合并上清。定容至500mL，每次取样1.5mL待测。

标准曲线的绘制：称取于50mg葡萄糖，加水溶解得1mg/mL的对照品溶液。精密量取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL于50mL容量瓶定容、摇匀。分别精密吸取以上对照品溶液1.0mL，加5%苯酚试液0.5mL，摇匀，迅速加浓硫酸2.5mL，振摇2min。另量取1.0mL蒸馏水按上述方法操作，作为空白对照。在490nm波长处分别测定吸光度，以吸光度值A为纵坐标，葡萄糖浓度C为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Abs=11.48C+0.01，R2=0.9981.结果表明，葡萄糖在0.02～0.10mg/mL范围内呈线性关系，重现性良好（见图1）。

子实体样品总糖含量测定：取上述200μL多糖样品溶液，5倍稀释后，再加0.5mL 5%苯酚的溶液，迅速加2.5mL浓硫酸并摇匀，在490nm波长处测定吸光度。

3 实验结果及讨论

本研究中，我们发现采用不同的预处理方式，云芝多糖的提取率均不相同。在相同温度下，随着时间的变化云芝多糖的释放速度也有一定的变化趋势（见图2～3）。

由图2和图3可知，在37℃条件下云芝多糖的提取率有稳定上升趋势，在80℃条件下，相较于37℃条件下云芝整体的提取率有明显优势。在该条件下，100～200目的样品，云芝多糖的提取率相对200目以上及40～100目为最低。200目以上液氮预处理条件下相对于其他样品有极其明显的优势，达到了最高值。而且对于不同目数的颗粒，预处理方式对多糖的提取影响均不同。100～200目之间，二者差异最小。40～100目机械粉碎方式相对占有优势。200目以上，液氮研磨要更好一些。

4 结语

本实验通过液氮研磨和机械粉碎两种方式对云芝子实体进行处理，并在不同目数和不同温度条件下用水提法提取多糖，通过这一系列的实验，发现提取最佳条件是80℃条件下，液氮研磨的，颗粒大小在200目以上。

参考文献

[1] 孟庆虹，张守文.真菌多糖的研究进展[J].粮食与食品工业，2003（3）：42-44.

[2] 李小定，荣建华，吴谋成.真菌多糖生物活性研究进展[J].食用菌学报，2002，9（4）：50-58.