脓毒症患者外周血FOXO3a TREM-1与PCT表达水平及其临床意义

金宇兰 周翔英 董甜甜 吴晓梁

脓毒症是临床中较为常见的全身炎症反应综合征，且感染是导致脓毒症发生与发展的重要因素［1］。研究显示，机体释放过度炎症介质，诱发机体出现免疫系统失调，是脓毒症发病本质，在其病理过程中呈涉及诸多炎症因子［2］。有研究认为血清降钙素原（PCT）是人体内重要的重症感染相关炎症指标［3］。插头蛋白O3a（FOXO3a）及髓系细胞触发受体-1（TREM-1）是人体内重要的炎性介质及调控因子，脓毒症患者危重程度与人体内如白细胞介素等多种细胞因子的表达量密切相关［4］。本文探讨脓毒症患者血中FOXO3a、TREM-1及PCT的表达及其临床意义。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2015年1月至2017年1月脓毒症患者144例，根据病情分为三组，脓毒症组40例，男28例，女12例；平均年龄（61.29±10.39）岁。有可疑或明确感染诱发的SIRS，无组织灌注不全及器官功能障碍。严重脓毒症组48例，男30例，女18例；平均年龄（60.84±12.26）岁。患者伴有组织灌注不全或器官功能障碍。脓毒症休克组56例，男36例，女20例；平均年龄（61.54±13.05）岁。患者出现低血压，液体治疗后患者病情尚无法有效逆转。另选取本院体检健康者50例为健康对照组，男27例，女23例；平均年龄（60.38±12.13）岁。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：（1）患者临床症状符合中国脓毒症诊疗指南诊断标准［5］，对照组患者体检结果正常。（2）无并发恶性肿瘤。（3）对治疗药物无过敏。（4）对本项目知情并签署知情同意书。排除标准：（1）原发免疫功能障碍或缺陷。（2）入组前3个月内接受其他方案进行治疗。（3）自动离院或中途放弃治疗。

1.3 方法 收集患者一般临床资料，实时监测患者心率、体温、血压、动脉血气、尿常规、血常规、电解质、肾功能、肝功能、CT情况，若患者病情出现变化及时发现并采取科学合理措施进行干预。入院时及治疗2周时采集空腹静脉血3ml，采用免疫荧光色谱法检测患者血清中PCT水平，所用试剂盒购买自上海欧典生物技术有限公司，所有操作均严格遵照试剂盒说明书进行操作。采用酶联免疫吸附法检测血中TREM-1水平，所用试剂盒购买自生工生物科技有限公司，所有操作均严格遵照试剂盒说明书进行操作。并使用外周血单个核细胞分离液分析PBMC，并采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测PBMC中FOXO3a水平，所用试剂盒购买自北京康为试剂有限公司，严格遵照试剂盒说明书进行操作。所用引物均有金斯瑞公司合成，FOXO3a荧光值/GAPDH荧光值计为FOXO3a表达量。以病理检查结果作为判断金标准，分析FOXO3a、TREM-1和PCT的诊断价值。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件。计量资料以（x±s）表示，多组间比较用方差分析，组间两两比较用q检验；计数资料以%表示，用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 四组FOXO3a、TREM-1与PCT检测结果 脓毒症组、严重脓毒症组及脓毒症休克组患者血中PCT及TREM-1水平均显著高于健康对照组（P＜0.05），且FOXO3a水平显著低于健康对照组（P＜0.05），随着患者病情加重，患者PCT及TREM-1水平显著升高（P＜0.05），FOXO3a显著降低（P＜0.05），见表 1。

表1 四组FOXO3a、TREM-1与PCT检测结果比较（x±s）

2.2 脓毒症组患者治疗前后FOXO3a、TREM-1与PCT检测结果 见表2。

表2 脓毒症组患者治疗前后FOXO3a、TREM-1与PCT检测结果（x±s）

2.3 严重脓毒症组患者治疗前后FOXO3a、TREM-1与PCT检测结果 见表3。

表3 严重脓毒症组患者治疗前后foxo3a、TREM-1与PCT检测结果（x±s）

2.4 脓毒症休克组患者治疗前后FOXO3a、TREM-1与PCT检测结果 见表4。

表4 脓毒症休克组患者治疗前后foxo3a、TREM-1与PCT检测结果（x±s）

2.5 FOXO3a、TREM-1与PCT评估患者病情价值 FOXO3a、TREM-1及PCT均具有较高的诊断精确度、灵敏度，且三者诊断效能差异无统计学意义（P＞0.05），见图 1。

图1 FOXO3a、TREM-1与PCT诊断ROC曲线

3 讨论

脓毒症是临床常见的全身炎症综合征，感染是其主要的临床诱因，若患者病情无法得以有效控制，则可能诱发严重脓毒症、脓毒症性休克、多器官功能衰竭等，威胁患者生命安全，导致病死率居高不下。有研究指出，脓毒症患者体内常可见明显的过度炎症反应［6］。FOXO3a是PI3K/Akt信号通路的重要下游活性因子，也是人体内重要的转录因子叉头蛋白家族成员［7］。当FOXO3a发生磷酸化后可导致其与DNA结合位点脱离，并向胞质内转移，其转录活性显著降低，阻断TLR2信号通路转导途径［8］。有研究指出，在LPS大剂量干预后，其炎症细胞中FOXO3a表达量显著降低［9］。真菌和细菌诱发的炎症反应中，在皮肤、肺组织、淋巴结中均可见明显的TREM-1高表达，且在肺泡巨噬细胞、CD14单核/巨噬细胞、中性粒细胞、单核细胞源性的上皮样细胞、肉芽肿等也可见明显的TREM-1高表达。TREM-1可通过释放并激活大量炎症介质和细胞因子，进一步激化炎症反应。研究结果显示，TREM-1可促进钙离子的转移，加速磷脂酶C酪氨酸磷酸化、细胞表面信号因子的释放，最终增强、放大炎症反应，导致炎症反应过度［10］。有研究认为，PCT是次级炎症因子，其本身并无法有效启动脓毒症反应，但可有效加重并放大脓毒症病理过程，其也可能是重要的潜在致死因子［11］。一般情况下，细菌感染后常导致患者血清中PCT水平异常升高，并与疾病严重状态密切相关。

本资料结果显示，随着脓毒症患者病情加重，患者PBMC中FOXO3a表达量显著降低，且治疗后患者PBMC中FOXO3a表达量可明显改善。脓毒症患者血中TREM-1水平显著高于健康人，随着患者病情的加重TREM-1水平也显著改善，经治疗后患者血中TREM-1水平均得以显著改善。脓毒症患者血中PCT水平显著高于健康对照组，与前人研究结果相似［12］。此外，在对脓毒症患者病情进行评估时，FOXO3a、TREM-1及PCT均具有较高的诊断精确度、灵敏度。分析认为，在脓毒血症发生及发展过程中，FOXO3a水平的降低起到十分重要的作用。脓毒症以脂多糖的大量释放较为常见，而TREM-1异常升高可放大炎症反应，加重患者病情。而经治疗后，TREM-1可有效改善患者细胞内炎症因子合成与分泌，并有效降低钙离子动员。研究结果显示随着患者病情加重，其血中PCT水平也随着升高，经治疗后所有患者血中PCT也可见显著改善。在对脓毒症患者病情进行评估时，可对患者血中FOXO3a、TREM-1及PCT水平进行检测，及时评估患者病情并采用合理治疗方式进行干预，有助于提高患者治疗临床疗效。

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［10］ Hu R, Liu W, Qiu X, et al. Expression of tumor necrosis factorα-induced protein 8 in stage III gastric cancer and the correlation with DcR3 and ERK1/2. Oncology Letters, 2016, 11(3):1835.

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［12］ 陈琛, 苏华, 蒋丽娜,等. 血清IL-4、NT-proBNP及PCT检测在脓毒症患者预后的应用. 检验医学与临床, 2017, 14(6):762-764.