P16 Bmi-1和C-myc检测在宫颈癌早期诊断中的应用

郑月萍 金敏 张兴翔 王敏

宫颈癌（SCC）是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌。在世界范围内居女性恶性肿瘤第2位，在发展中国家居第1位［1］。正常宫颈组织进展为SCC约需8～12 年，但每年新发病例约13万，占全世界总发病数的28%，中国每年约有2万女性死于宫颈癌［2］。本文探讨P16、Bmi-1和C-myc表达在宫颈癌早期诊断中的应用价值，现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2014 年1 月至2016 年12 月本院宫颈上皮内瘤变（CIN）144 例（经病理证实CINⅠ级55例、CINⅡ级48例、CINⅢ级41例）及宫颈癌（SCC）37例患者的宫颈活检病理标本，年龄22～76岁，平均年龄（41.5±16.0）岁。均未做化学、免疫及放射治疗。另选取正常宫颈组织及慢性宫颈炎标本30例为对照组，年龄25～70 岁，平均年龄（42.0±13.5）岁。所有研究对象均经患者及其家属同意，并签署知情同意书。

1.2 方法 P16 单克隆抗体试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司；Bmi-1和C-myc 单克隆抗体试剂盒购自福州迈新公司。免疫组化SP法严格按照试剂盒要求进行操作，用已知阳性切片作阳性对照，PBS代替第一抗体作阴性对照。阳性表达及阴性表达判定标准：p16阳性染色为细胞核和/或胞浆，出现黄色或棕黄色颗粒：（-）：阳性细胞百分率＜10%；（+）：阳性细胞百分率10%～30%；（++）：阳性细胞百分率30%～50%；（+++）：阳性细胞百分率＞50%。Bmi-1阳性染色为细胞核和细胞质，呈现出棕黄色：（-）：阳性细胞数＜10%；（+）：阳性细胞数10%～25；（++）：阳性细胞数26%～50%；（+++）：阳性细胞数＞50%。C-myc阳性染色为细胞核呈棕黄色着色：（-）：无阳性染色细胞或阳性细胞≤ 10%；（+）：阳性细胞 11%～ 30%；（++）：31%～60% ；（+++）：＞60%。

1.3 统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件。计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 P16、Bmi-1和C-myc在各组标本中表达水平 P16、Bmi-1和C-myc在对照组标本中表达阳性率显著低于CIN及SCC组，CINⅠ组阳性率显著低于CINⅡ、CINⅢ及SCC组；Bmi-1和C-myc 在CINⅡ组阳性率显著低于SCC组，Bmi-1在CINⅢ组阳性率显著低于SCC组（P＜0.05），见表1。

2.2 P16、Bmi-1和C-myc在37例SCC中的表达及其与临床的关系 SCC患者P16、Bmi-1和C-myc表达阳性率与年龄无关（P＞0.05）；与临床分期有关，Ⅰ～Ⅱ期表达阳性率显著低于Ⅲ～Ⅳ期（P＜0.05）；P16在淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组（P＜0.05），见表 2。

表1 P16、Bmi-1和C-myc在各组标本中表达水平结果比较［n（%）］

表2 P16、Bmi-1和C-myc在SCC中的表达及其与临床的关系［n（%）］

2.3 P16、Bmi-1和C-myc在SCC检测中单独和联合检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较 见表3。

表3 P16、Bmi-1和C-myc单独和联合检测分析比较

3 讨论

宫颈细胞学筛查法的普遍应用，使SCC发生率及病死率明显降低，但鉴于其有假阴性等局限性，可能造成宫颈癌的漏诊和误诊，故可靠的生物性肿瘤标记物对SCC的诊断更重要［3-5］。

P16基因是1994年Kamb等［6］在人染色体9p21区发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因，其产物p16蛋白能特异性抑制CDK4的活性，从而阻止细胞从G1期进入S期，使细胞增殖受到抑制。P16基因以缺失、 突变等方式广泛参与肿瘤的形成，检测P16 基因有无改变对判断宫颈萎缩、非典型鳞状化生、SIL 具有十分重要的临床意义［7-8］。王娇等［9］研究认为，P16 在慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC组的阳性率各组差异有统计学意义（P＜0.05），且 P16 在慢性宫颈炎中无表达，在宫颈低级别病变中以阳性表达为主，在宫颈高级别病变中以强阳性表达为主。沈蓉等［10］研究认为P16蛋白在慢性宫颈炎组织中以阴性表达为主，而在 CINⅢ和浸润癌组织中以过表达为主，p16蛋白在宫颈鳞癌及 CINⅢ中的表达显著高于CIN Ⅰ -Ⅱ（P＜0.001）。

Bmi-1 是多疏基因（PcG）家族中核心成员之一，具有癌基因特性，目前被认为是一种原癌基因，定位于10号染色体11区23带，由十个外显子和九个内含子组成，全长4.9kb，编码一个含326个氨基酸，相对分子量为36.9KD的核蛋白质［11］。Bmi-1通过多种途径参与细胞的自我更新、增殖、衰老和永生化，并且其高表达与肿瘤的发生、发展、转移、预后及复发等一系列病理过程密切相关［12］。李娇等［13］研究发现在正常宫颈组织中Bmi-1低表达，在宫颈病变中阳性表达率依次呈递增趋势，且CINⅢ组明显高于CINⅠ组（P＜0.01），在SCC组织中阳性表达率显著增高，进一步证实Bmi-1参与肿瘤的形成 。高翔等［14］研究认为Bmi-1基因和蛋白在SCC中的表达显著高于正常子宫颈组织，且分化程度低和（或）伴有淋巴结转移者的SCC组织中Bmi-1的表达则越高，提示Bmi-1基因的异常表达与SCC的分化程度和转移扩散密切相关，表明Bmi-1的过表达在SCC的发生发展过程中发挥重要作用。

C-myc基因是一种癌基因，定位于染色体8q24，包含3个外显子和2个内含子。C-myc蛋白位于细胞核内，是核内特异性DNA结合蛋白，包含四个重要的功能结构区（DNA结合区、核定位区、非特异性DNA结合区及转录激活区），与细胞周期的调控有关，参与DNA复制、细胞生成、增殖及分化等过程［15］。武海英等［16］研究结果认为，随宫颈病变级别的升高，C-myc基因的阳性表达率升高，且C-myc基因与宫颈癌的分化程度有关，证实C-myc 在SCC的发生发展中起着非常重要的作用，可作为判断预后的一个重要指标。施浩帆等［17］研究发现SCC中C- myc 阳性表达率100. 0%，明显高于正常宫颈和 CIN 中的阳性表达率水平，表明C-myc 基因参与SCC的发生发展。

本资料结果表明，P16、Bmi-1和C-myc在对照组标本中表达阳性率显著低于CIN及SCC组，CINⅠ组阳性率显著低于CINⅡ、CINⅢ及SCC组；Bmi-1和C-myc 在CINⅡ组阳性率显著低于SCC组，Bmi-1在CINⅢ组阳性率显著低于SCC组（P＜0.05）。P16、Bmi-1和C-myc在SCC组Ⅰ～Ⅱ期表达阳性率显著低于Ⅲ～Ⅳ期，P16在淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组（P＜0.05）。单独检测P16和Bmi-1敏感度为81.08%，C-myc敏感度为78.38%，三者联合检测能达89.19%，联合检测提高阳性检出率。

总之，P16、Bmi-1和C-myc表达水平与SCC发生及发展相关，可作为宫颈CIN分级与SCC早期诊断的重要辅助指标。

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