整合素α6β1和CD44V4在卵巢上皮癌中表达及相关性分析

刘飞　叶帆　杨晓文

摘 要：目的 通过检测上皮癌病理组织及正常卵巢组织中整合素α6β1和CD44V4表达情况，探讨其表达特点与临床病理特征的相关性。方法 收集2015年1月～2016年12月手术切除的20例正常卵巢组织、40例卵巢上皮良性肿瘤及65例卵巢上皮癌组织，利用免疫组织化学法检测整合素α6β1和CD44V4的表达水平，结合病理组织特征进行相关性分析。结果 卵巢上皮癌组织中整合素α6β1和CD44V4的表达水平显著高于正常卵巢及上皮良性肿瘤组织，差异有统计学意义（P<0.05），且在不同病理分期及分化程度的卵巢上皮癌组织之间的差异有统计学意义（P<0.05）；但在不同组织学分型病理组织中差异无统计学意义（P>0.05）；α6β1和与CD44V4在卵巢上皮癌组织中的表达存在明显正相关（r=0.599，P<0.05）。结论 整合素α6β1和与CD44V4在卵巢上皮癌组织中高表达且有相关性，可作为卵巢上皮癌发展的分子标志物。

关键词：整合素α6β1；CD44V4；卵巢上皮癌

中图分类号：R737.3 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.04.020

文章编号：1006-1959（2018）04-0062-03

Abstract：Objective To detect the expression of integrin α6β1 and CD44V4 in epithelial carcinoma and normal ovarian tissues，and to explore the correlation between the expression of integrin α6β1 and clinicopathological features.Methods 20 cases of normal ovarian tissue，40 cases of ovarian epithelial benign tumor and 65 cases of epithelial ovarian cancer surgically resected from January 2015 to December 2016 were collected.The expression of integrin α6β1 and CD44V4 were detected by immunohistochemistry.Tissue characteristics for correlation analysis.Results The expression of integrin α6β1 and CD44V4 in ovarian epithelial carcinoma was significantly higher than that in normal ovarian and benign epithelial tumors，the difference was statistically significant（P<0.05），there was a statistically significant difference in epithelial ovarian cancer between different pathological stages and differentiation degree（P <0.05），but there was no significant difference in pathological histology among different histological types（P>0.05）.There was a significant positive correlation between α6β1 and CD44V4 expression in epithelial ovarian cancer（r=0.599，P<0.05）.Conclusion The expression of integrin α6β1 and CD44V4 in epithelial ovarian cancer are highly correlated and may be used as molecular markers for the development of epithelial ovarian cancer.

Key words：Integrin α6β1；CD44V4；Epithelial ovarian carcinoma

卵巢肿瘤是发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌的恶性肿瘤，致死率居妇科肿瘤之首，严重威胁女性健康[1]。卵巢恶性肿瘤以上皮癌最常见，明确卵巢上皮癌的发展机制及早期诊断物对该肿瘤的治疗有重要意义[2]。该类肿瘤较强的侵袭及转移能力是临床治疗困难的主要原因，细胞与基质的黏附作用是恶性肿瘤侵袭的重要过程[3]。整合素是主要的细胞黏附分子，整合素α6β1与CD44V4多表达于淋巴细胞和肿瘤细胞表面[4]，可能在卵巢上皮癌的发展中有重要作用。本文通过检测整合素α6β1和CD44V4表达水平，结合临床病理资料进行分析，以探讨整合素α6β1和CD44V4在卵巢上皮癌组织中的表达特点及其相关性。

1资料与方法

1.1一般资料 选取2015年1月～2016年12月萍乡市人民医院妇科行卵巢切除术切除的卵巢上皮癌组织标本65例，卵巢上皮良性肿瘤组织40例，并选取20例正常卵巢组织做对照；所有标本切除前均未接受放化療治疗且经均经病理学专家盲法认定。卵巢上皮癌组织根据临床病例分型分类：根据病理分期（Ⅰ、Ⅱ期13例，Ⅲ、Ⅳ期34例）；组织学分型（子宫内膜样癌13例，粘液性囊腺癌20例，浆液性囊腺癌32例）；病理组织分化程度（低分化34例，中分化19例，高分化12例）。

1.2方法 ①主要试剂：兔抗整合素α6β1单克隆抗体、鼠抗CD44V4单克隆抗体，S-P试剂盒均为Sigma公司产品。②组织切片制作法：病理组织用10%甲醛室温固定24 h后用梯度浓度乙醇脱水后晾干除去酒精，用二甲苯浸泡组织充分透明；完全透明的组织浸于混合蜡中，并放置于温箱中透蜡；最后向包埋柜中加入融化好的石蜡充分包埋；LEICA石蜡切片机切片后烤干备用。③免疫组织化学染色检测：病理组织石蜡切片常规脱蜡后经梯度浓度酒精逐步脱水；滴加适量过氧化氢溶液至切片以充分消除内源性过氧化物酶活性；高温修复抗原后用山羊血清（1∶10正常山羊血清）封闭组织非特异性抗原；一二抗孵育后滴加HRP标记链亲和素工作液，37 ℃恒温孵育30 min进行DAB显色；经苏木素复染后脱水透明中性树胶封片观察。

1.3阳性结果评定标准 整合素α6β1表达水平根据阳性细胞数量与染色强度评分综合确定：蛋白染色根据染得强度设定0～3分。阳性细胞数<10%计为0分；在10%～25%之间计为1分；25%～50%之间为2分；阳性细胞数>50%为3分。根据染色强度和阳性细胞数评分相加分级：≤2分记为低表达（-）；3～4分记为中表达（+）；5～6分则记为高表达（++）。

1.4统计学方法 利用SPSS19.0软件分析数据，计数资料以（%）表示，采用？字2检验，变量间差异分析采用Spearman等级相关分析。P<0.05说明差异具有统计学意义。

2结果

2.1不同病理组织中整合素α6β1与CD44V4表达水平比较 整合素α6β1在细胞中呈黄色或棕黄色颗粒，主要表达于卵巢上皮癌细胞胞浆中（72.31%），远高于正常卵巢与良性肿瘤组织中的表达水平，差异具有统计学意义（P<0.05）。CD44V4在卵巢上皮癌细胞胞浆中呈棕褐色颗粒，其表达水平显著高于正常卵巢与卵巢良性肿瘤组织，差异具有统计学意义（P<0.05）；而正常卵巢与卵巢良性肿瘤组织间的两者表达水平差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2整合素α6β1及CD44V4表达水平与卵巢上皮癌临床病理关系 整合素α6β1与卵巢上皮癌组织学分型无关（P>0.05），而与组织分化程度及临床分期有关，低分化组中整合素α6β1的表达明显高于高分化组，且随着临床分期的升级，整合素α6β1的表达也明显增加，差异均有统计学意义（P<0.05）。CD44V4表达水平与卵巢上皮癌组织分化程度及病理分期同样有关，随着分化程度的提高其表达水平下降，同时表达水平随着病理分期的增加而提高，差异均有统计学意义（P<0.05），但在不同组织学分型的病理组织中差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.3整合素α6β1与CD44V4表达水平在卵巢上皮癌组织中表达的相关性 经Spearman分析显示，整合素α6β1的表达水平与CD44V4呈正相关（r=0.599，P<0.05）。

3讨论

全球癌症每年发病率总体呈上升趋势，其中卵巢恶性肿瘤是妇科常见致死性肿瘤，多为上皮性卵巢癌。我国上皮性卵巢癌的发病情况在近十几年来呈上升趋势，已然成为威胁女性健康的最大杀手[5]。而卵巢癌细胞较强的浸润和转移能力为临床根治带来极大困难，虽然针对癌细胞浸润、转移的分子机制已有较深入研究，但关键有效的分子机制尚不清楚。因此寻找上皮性卵巢癌发生发展的分子标记物，对提高患者的治疗与预后有重要的意义。

卵巢上皮癌细胞的浸润与转移涉及多方面的机制，细胞与基质的黏附作用是恶性肿瘤侵袭的首要步骤[6]。整合素与CD44分子作为主要的细胞黏附分子，参与多种转移性肿瘤细胞内外基质的黏附作用，可通过多途径影响细胞，即可以改变基质成分调节细胞间的粘附作用，促进肿瘤细胞的浸润、转移；又介导了肿瘤细胞的分化增殖中的信息传递，可作為靶向抗癌的新分子靶点。

整合素α6β1是由介导细胞与ECM之间黏附的α6亚基和β1亚基和构成的异二聚体，具有调节细胞的生长、凋亡、血管形成等功能[7]。研究发现整合素α6β1在卵巢上皮细胞中广泛的表达，对卵巢组织的发育和功能起重要作用，其异常表达可能与卵巢肿瘤的发生发展相关。而近期对卵巢癌病理组织的检测研究发现，整合素α6β1在不同病理分型的癌组织中的表达水平有差异，提示整合素α6β1与卵巢上皮癌有可以值得研究探讨的关系。本研究发现在正常卵巢与卵巢良性肿瘤组织中α6β1蛋白表达水平较低，远低于卵巢上皮癌组织中72.31%的阳性率（P<0.05）；且与卵巢上皮癌组织分化程度及病理分期存在明显相关性，即低分化组织的表达高于高分化的表达，且随着病理组织分期的提高而显著增高，差异均有统计学意义（P<0.05）；但是整合素α6β1与病理组织学分型无明显相关性，在子宫内膜样癌、粘液性与浆液性囊腺癌中表达差异无统计学意义（P>0.05）。以上提示整合素α6β1可能参与了卵巢上皮癌的发生发展过程，对其临床发展阶段的诊断有一定参考价值。

CD44V4分子作为CD44分子家族的一种亚型，可以通过跨膜糖蛋白的方式介导细胞-细胞、细胞-ECM 的相互作用，在肿瘤细胞的黏附、肿瘤的浸润、转移中发挥重要的作用[8]。本文探讨CD44V4 的表达情况与卵巢不同组织临床病理特征的关系。结果显示CD44V4在卵巢上皮癌细胞胞浆中呈棕褐色颗粒，其表达水平显著高于正常卵巢与卵巢良性肿瘤组织（P<0.05）；而正常卵巢与卵巢良性肿瘤组织间的两者表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。而卵巢上皮癌高-中分化组的表达低于低分化组的表达，Ⅰ～Ⅱ期组CD44V4的表达明显低于Ⅲ～Ⅳ期组，差异均有统计学意义（P<0.05）；但在子宫内膜样癌、粘液性及浆液性囊腺癌组织中差异无统计学意义（P>0.05）。以上充分证实了CD44V4在卵巢上皮癌的发生发展中起重要作用。

整合素α6β1是一种黏附分子，其过量表达可使癌细胞与组织细胞的黏附力发生改变，为肿瘤细胞的转移提供条件；CD44V4作为一种原癌基因参与肿瘤发生发展，诱导了其他原癌基因的高效表达，整合素α6β1与CD44V4共同参与肿瘤的浸润与转移过程。本文通过检测卵巢肿瘤组织和正常组织中整合素α6β1、CD44V4的表达，发现整合素α6β1、CD44V4与卵巢上皮癌组织临床病理特点相关。同时，随着整合素α6β1表达的增强，CD44V4的表达也有增强的趋势，其表达呈正相关，可以推断这两种分子在卵巢上皮癌浸润、转移这一复杂的过程中有正协同作用。但是要更进一步的了解两者的具体作用机制，仍需进一步研究探讨。

参考文献：

[1]张爽爽，夏庆民，郑荣寿，等.中国2010年卵巢癌发病与死亡分析[J].中国肿瘤，2016（03）：169-173.

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[3]Zhang W，Huang N，Wang Q，et al.Effect of CXCL1 gene expression on the biological function of epithelial ovarian carcinoma cells in vitro[J].Chinese Journal of Oncology，2013，35（2）：109-113.

[4]Sagawa K，Uwa N，Daimon T，et al.Expression of CD44 variant isoforms，CD44v3 and CD44v6，are associated with prognosis in nasopharyngeal carcinoma[J].J Laryngol Otol，2016，130（9）：843-849.

[5]纪晓宁，丰有吉.上皮性卵巢癌病因学研究进展[J].中国癌症杂志，2014（11）：861-864.

[6]He M，Wang D，Zou D，et al.Re-purposing of curcumin as an anti-metastatic agent for the treatment of epithelial ovarian cancer：in vitro model using cancer stem cell enriched ovarian cancer spheroids[J].Oncotarget，2016，7（52）：86374-86387.

[7]Buommino E，Di Domenico M，Paoletti I，et al.AlphaVBeta5 integrins mediates Pseudomonas fluorescens interaction with A549 cells[J].Front Biosci（Landmark Ed），2014，19：408-415.

[8]雷燕，吳绪峰.CD44基因在卵巢癌中的表达及其与预后的关系[J].医学综述，2013（01）：155-158.

收稿日期：2017-8-23；修回日期：2017-9-21

编辑/杨倩